优化的细菌鞭毛染色技术
实验四 鞭毛染色法及活细菌活动性的观察
鞭毛染色法及活细菌活动性的观察
一、实验目的及要求
1、了解细菌鞭毛染色的原理，掌握鞭毛染色 的方法； 2、学习用压滴法和悬滴法观察细菌的运动性。
二、实验原理
细菌的鞭毛很纤细，直径一般为0.1-0.2μm， 只有用电子显微镜才能观察到。但是，如采用 特殊的染色法，则在普通光学显微镜下也能看 到它。 鞭毛染色的基本原理是：即在染色前先用媒染 剂处理，让它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径加粗， 然后再进行染色。 常用的媒染剂由丹宁酸和氯化高铁或钾明矾等 配制而成。
四、实验方法
（一）鞭毛染色（硝酸银染色法）
1.清洗玻片：选择光滑无裂痕的玻片，置洗衣粉过滤液中（洗 衣粉煮沸后用滤纸过滤，以除去粗颗粒），煮沸20min。取 出用清水冲洗，沥干水后，置95%乙醇中浸泡，用时取出在 火焰上烧去酒精。
2.菌液的制备：菌龄较老的细菌容易失落鞭毛，所以在染色前 应将待染细菌在新配制的牛肉膏蛋白胨培养基斜面上连续移 接3-5代，以增强细菌的运动力。最后一代菌种放恒温箱中 培养12-16h。然后，用接种环挑取斜面与冷凝水交接处的菌 液数环，移至盛有1-2mL无菌水的试管中，使菌液呈轻度混 浊。将该试管放在37℃恒温箱中静置10min（放置时间不宜 太长，否则鞭毛会脱落），让幼龄菌的鞭毛松展开。
3.制片：吸取少量菌液滴在洁净玻片的一端，立即将玻片倾 斜，使菌液缓慢地流向另一端，用吸水纸吸去多余的菌液。 涂片放空气中自然干燥。 4.染色： ①滴加A液，染3-5min； ②用蒸馏水充分洗净 A 液； ③用B液冲去残水，再加 B 液于玻片上覆盖染色 数秒至1min，必要时在酒精灯微火加热直至显 褐色，立即用蒸馏水洗，自然干燥。 5.镜检：先低倍，再高倍，最后用油镜 检查。结果：菌体呈深褐色， 鞭毛呈浅褐色。
细菌鞭毛染色
细菌鞭毛染色很多细菌自细胞内长出一至很多根细丝状附属物称为鞭毛.鞭毛是细菌的运动器官,有鞭毛的细菌均可运动.鞭毛瘦长透亮,其宽度在一般光学显微镜波长检验范围之外,所以不易观看.但是在不染色状况下可以检测到细菌的运动推断鞭毛的存在. 【试验目的】学习并把握鞭毛染色的原理和方法.【试验原理】细菌的鞭毛特别纤细,直径一般在20nm左右,用电镜才能观看.本试验采纳特别染色法,即在染色前先经媒染剂处理,媒染剂吸附在鞭毛上,使鞭毛加粗,便可达到一般光学显微镜的辨析范围以内.染色后,即可利用一般光学显微镜进行观看.【试验材料、药品及器具】1、菌种培育18-24h的菌种大肠杆菌(Escherichia coli)一般变形杆菌(Proteus Vulgaris)荧光极毛杆菌(Pseudomonas fluorescens)2、染色液鞭毛染色液甲鞭毛染色液乙(试验前配好的新奇染液)3、器皿显微镜、酒精灯、洗瓶装蒸馏水、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸、洁净载玻片、玻璃缸、无菌水三管、灭菌长滴管三支.【试验步骤】1、用长滴管取无菌水轻轻移入长好菌种的试管内,培育20-30min 使细菌自己渐渐游入水中并充分伸展其鞭毛,使水呈轻度混浊.2、取一滴菌悬液滴于玻片的1/3位置上,然后轻轻抬起此端,使悬液缓慢流至玻片另一端,平放使其在空气中自然干燥固定.切忌用火焰烘干.3、在涂片部位滴甲液,染色3~5min.4、用蒸馏水轻轻冲洗.5、加乙液染30~60s,可在酒精灯上稍稍加热.冲洗多余的染液.6、制片干后检查.【试验结果】1、显微镜下检查鞭毛染成什么颜色和外形.2、比较菌种鞭毛着生的位置、数目并绘图.【思索题】1、菌种的培育时间与鞭毛染色有什么关系?2、你在显微镜下看到的鞭毛是否为原来的大小和外形?3、鞭毛涂片与芽孢涂片有何区分?为什么?。
鞭毛染色实验报告
1. 掌握鞭毛染色的原理和方法。
2. 观察细菌鞭毛的形态、数量和分布位置。
3. 了解鞭毛在细菌分类和鉴定中的意义。
二、实验原理鞭毛是细菌的运动器官，对细菌的分类和鉴定具有重要意义。
鞭毛染色是一种特殊染色方法，通过媒染剂和染色剂的作用，使鞭毛变粗，便于在显微镜下观察。
常用的媒染剂有单宁酸、明矾钾等，染色剂有碱性复红、硝酸银、结晶紫等。
三、实验材料1. 菌种：金黄色葡萄球菌、普通变形杆菌、大肠杆菌。
2. 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基。
3. 试剂：鞭毛染色液（A液）、0.01%美蓝水溶液（B液）、香柏油、二甲苯、无菌水、凡士林。
4. 工具：显微镜、接种环、酒精灯、凹载玻片、盖玻片、镊子、细玻棒、吸水纸。
四、实验步骤1. 活化菌种：将保存的菌种在新制备的牛肉膏蛋白胨斜面培养基上连续移种2-3次，每次于30℃培养10-15h。
活化后菌种备用。
2. 制片：在干净载玻片的一端滴一滴蒸馏水，用无菌操作法，以接种环从活化菌种中取少许菌苔（注意不要带培养基），在载玻片的水滴中轻沾几下。
将载玻片稍倾斜，使菌液随水滴缓缓流到另一端，然后平放，于空气中干燥。
3. 染色：滴加鞭毛染色液A液，染3-5min。
用蒸馏水充分洗净A液，使背景清洁。
将残水沥干或用B液冲去残水。
滴加B液，在微火上加热使微冒蒸汽，并随时补充染料以免干涸，染30～60s。
待冷却后，用蒸馏水轻轻冲洗干净，自然干燥或滤纸吸干。
4. 镜检：先用低倍镜和高倍镜找到典型区域，然后用油镜观察。
菌体为深褐色，鞭毛为褐色。
注意观察鞭毛着生位置（镜检时应多找几个视野，有时只在部分涂片上观察到鞭毛）。
1. 金黄色葡萄球菌：观察到典型的鞭毛，数量较多，主要分布在菌体一端。
2. 普通变形杆菌：观察到鞭毛，数量较少，主要分布在菌体两端。
3. 大肠杆菌：未观察到鞭毛。
六、实验讨论1. 鞭毛染色是细菌鉴定的重要方法之一，通过观察鞭毛的形态、数量和分布位置，可以初步判断细菌的种类。
2. 本实验中，金黄色葡萄球菌和普通变形杆菌均具有鞭毛，而大肠杆菌无鞭毛。
鞭毛染色原理
鞭毛染色原理鞭毛染色是一种常用的细胞生物学技术，它通过染色技术可以清晰地观察细胞鞭毛的结构和形态，为研究细胞运动、感觉和信号传导等提供了重要的手段。
鞭毛是细胞表面的一种突起结构，其直接参与了细胞的运动和感知功能。
鞭毛染色的原理主要是利用染色剂特异性地与鞭毛结构中的蛋白质或其他成分结合，从而使鞭毛在显微镜下呈现出清晰的形态。
下面将详细介绍鞭毛染色的原理及其操作步骤。
首先，鞭毛染色的原理是利用染色剂与鞭毛结构中的特定成分发生特异性反应。
通常使用的染色剂有伊红、甲苯胺蓝等，它们可以与鞭毛中的蛋白质或核酸等成分结合，使鞭毛呈现出颜色。
通过染色后，在显微镜下观察可以清晰地看到鞭毛的形态和结构。
其次，进行鞭毛染色的操作步骤如下，首先，将待观察的细胞置于载玻片上，并在玻片上加一滴染色剂。
然后，用玻璃棒轻轻搅拌，使染色剂均匀地覆盖在细胞上。
接着，用盖玻片轻轻盖住待观察的细胞，避免空气氧化影响染色效果。
最后，将载玻片放置在显微镜下观察，调节倍率和焦距，即可清晰地看到染色后的鞭毛结构。
鞭毛染色技术的应用非常广泛，特别是在细胞生物学和生物医学研究中。
通过观察鞭毛的形态和结构，可以了解细胞的运动、感知和信号传导等重要生理功能。
同时，鞭毛染色还可以用于研究细胞器官的形成和功能，为疾病的诊断和治疗提供重要的依据。
总之，鞭毛染色是一种重要的细胞生物学技术，通过染色剂与鞭毛结构中的特定成分发生特异性反应，清晰地观察细胞鞭毛的结构和形态。
它在细胞生物学和生物医学研究中具有重要的应用前景，为揭示细胞的生理功能和疾病发生机制提供了重要的手段。
希望通过本文的介绍，能够让读者对鞭毛染色原理有一个更加清晰的了解。
细菌鞭毛染色的方法
细菌鞭毛染色的方法细菌鞭毛染色是一种常用的细菌形态鉴定方法，可以帮助微生物学家观察和描述细菌鞭毛结构，从而推测其遗传特性和功能。
下面将详细介绍三种常用的细菌鞭毛染色方法：简单抗酸杆菌染色法、尾鞭毛染色法和菲尔维改良法。
一、简单抗酸杆菌染色法简单抗酸杆菌染色法是一种鉴别分枝杆菌（Mycobacterium）属中患者血液、尿液、痰、脓液等标本中的分枝杆菌。
这种染色方法利用酸性染料石蜡红，可以使抗酸杆菌的鞭毛显色，增强观察的准确性。
步骤：1.取血液、尿液、痰等标本制备涂片，将标本涂抹在玻璃片上，晾干。
2.用火焰消毒的钳子将玻璃片的涂片轻轻通火，将染料石蜡红涂滴于涂片上，让其覆盖标本。
3.将玻璃片先静止1-2分钟，然后用水冲洗掉过多的染料。
4.用20%硝酸酒精对涂片进行脱色，可观察到分枝杆菌的鞭毛呈红色。
5.再用水冲洗涂片，使其完全清洁。
6.取一滴一滴草绿染料滴在涂片上，均匀涂抹。
7.用水冲洗后晾干，用油镜覆盖玻璃片，镜检。
二、尾鞭毛染色法尾鞭毛染色法用于显示一些有机质，如细菌鞭毛、纤毛，尤其是真细菌和螺旋菌的表面鞭毛。
这种染色方法使用了特定的染料，其中一种叫做尾鞭毛染料，可以与细菌鞭毛发生特异性的染色反应。
步骤：1.取细菌液滴制备涂片，晾干。
2.用尾鞭毛染料滴于涂片表面，使其充分渗透，静置几分钟。
3.用水冲洗涂片，除去未与鞭毛结合的染料。
4.用光学显微镜观察涂片，即可看到染色的细菌鞭毛。
三、菲尔维改良法菲尔维改良法是细菌鞭毛染色中的一种较新的方法，其主要优点是能够清晰地显示出细菌鞭毛的细节结构，对细菌鞭毛的分类和鉴定非常有帮助。
步骤：1.取细菌液滴制备涂片，晾干。
2.用菲尔维液滴于涂片表面，使其充分渗透，静置5-10分钟。
3.用水冲洗涂片，除去未结合的染料。
4.将菲尔维溶液滴于涂片上，再用菲尔维JL染色液（主要成分是菲尔维色素）滴于涂片上，使其充分渗透，静置15-20分钟。
5.用70%酒精脱色1-2秒钟，去除多余的染料。
细菌鞭毛染色法的改良研究
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细菌鞭毛染色的方法
细菌鞭毛染色的方法目前，细菌鞭毛染色方法根据染色剂的不同，可分为碱性复红法、副品红法、结晶紫法、维多利亚蓝B法、镀银染色法和荧光蛋白染色法6类，前5类方法的媒染剂成分中均含有单宁酸，染色原理通常是采用不稳定的胶体溶液做媒染剂，并使其沉淀于鞭毛上而使“鞭毛肿胀（tar and feather）”，鞭毛直径加粗，进一步染色后即可在油镜下观察。
1. 碱性复红法和副品红法：1926年由Gray首创，其媒染液成分包括20%丹宁酸水溶液2.0ml，硫酸钾铝饱和水溶液5ml，饱和氯化汞水溶液2ml，3%碱性复红乙醇（95%）溶液0.4ml，临用前混合，且需过滤后方可使用。
染片时，媒染剂染色约6min，具体时间尚需在试验中摸索确定，染色液是抗酸染色Ziehl-Ne elsen石碳酸复红染液，染片时需要1小片吸水纸盖在涂片上，染色3min。
由于该方法媒染剂混合物不稳定、操作复杂、经验性强。
Leifson于1930年建立了副品红法，并于1938年和1951年两次对该方法进行了改良，称为Leifson方法。
染色试剂由3种溶液组成：A为1.5%NaCl水溶液，B为3%单宁酸水溶液，C 为乙酸副品红0.9g，碱性副品红0.3g溶解于100ml95%乙醇溶液中。
使用时把等体积A和B混合，然后再加2体积C与之相混。
该试剂冷藏可保存1～2个月。
2. 结晶紫法：又称Ryu法，1937年由Ryu建立，1982年由Kodaka等进行了改良。
媒染剂：5%石碳酸1 0 ml，2g单宁酸和10 ml饱和硫酸钾铝。
染色剂：饱和结晶紫乙醇溶液，即12g结晶紫溶于100 ml无水乙醇中。
使用时把10份媒染剂与1份染色剂混合，染色5min。
1989年，Heimbrook等使用改良的Ryu染色试剂，采用湿片技术进行鞭毛染色，虽然可以观察到细菌鞭毛，但效果不好。
Ryu染色方法优点是试剂比较稳定，目前Difco公司已经研制出该方法的商品试剂盒，但染色效果亦不甚理想.3. 维多利亚蓝B法：1990年由Inoue等报道日本制药株式会社Shionogi Seiyaku研制出一种细菌鞭毛染色商品试剂盒。
实验六 细菌的鞭毛染色
（三）实验方法：
1.制备菌液：在幼龄菌斜面上，滴加3-4mL无菌水，制成轻度混浊的菌悬液。
2.涂凡士林：取洁净无油的盖玻片1块，在其四周涂少量的凡士林。
3.滴加菌液：加1滴菌液于盖玻片的中央，并用记号笔在菌液的边缘做一记号，以便在显微镜观察时，易于寻找菌液的位置。
4.盖凹玻片 将凹玻片的凹槽对准盖玻片中央的菌液，并轻轻地盖在盖玻片上，使两者粘在一起，然后翻转凹玻片，使菌液正好悬在凹槽的中央，再用铅笔或火柴棒轻压盖玻片，使玻片四周边缘闭合，以防菌液干燥。
②水洗：在没有倾去染料的情况下，就用蒸馏水轻轻地冲去染料，否则会增加背景的沉淀。
③干燥：自然干燥。
（5）镜检 先低倍观察，再高倍观察，最后再用油镜观察，观察时要多找一些视野，不要企图在1-2个视野中就能看到细菌的鞭毛。
结果：菌体和鞭毛均染成红色。
（五）实验作业：给出鞭毛菌的形态图
④用蒸馏水洗，自然干燥。
（4）镜检：先低倍，再高倍，最后用油镜检查。
结果：菌体呈深褐色，鞭毛呈浅褐色。
2.改良Leifson染色法
（1）清洗玻片法同1。
（2）配制染料 见附录二（一）9。染料配好后要过滤15-20次后染色效果才好。
（3）菌液的制备及涂片
①菌液的制备同1。
②用记号笔在洁净的玻片上划分3—4个相等的区域。
③放1滴菌液于第一个小区的一端，将玻片倾斜，让菌液流向另一端，并用滤纸吸去多余的菌液。
④干燥 在空气中自然干燥。
（4）染色
①加染色液于第一区，使染料覆盖涂片。隔数分钟后再将染料加入第二区，依此类推（相隔时间可自行决定），其目的是确定最合适的染色时间，而且节约材料。
用于鞭毛染色的菌体也可用半固体培养基培养。方法是将0.3-0.4%的琼脂肉膏培养基熔化后倒入无菌平皿中，待凝固后在平板中央点接活化了3-4代的细菌，恒温培养12-16h后，取扩散菌落的边缘制作涂片。
细菌鞭毛染色方法的改良
数安全参考值为：轻微有创操作血小板＞20×109/L；留置导管、胸腔穿刺、肝活组织检查、经支气管活组织检查血小板＞50×109/L；腰穿血小板＞50×109/L。
成人急性白血病患者血小板＞20×109/L，儿童急性淋巴细胞白血病血小板＞10×109/L时，大多可承受腰穿而无严重出血并发症；骨髓穿刺和活检操作前一般无需输注血小板。
②各种手术的血小板计数安全参考值为：拔牙或补牙血小板≥50×109/L；小手术、硬膜外麻醉血小板（50～80）×109/L；正常阴道分娩血小板≥50×109/L；剖腹产手术血小板≥80×109/L；大手术血小板（80～100）×109/L。
3.2血制品的选择国内的血小板制品主要有单采血小板和浓缩血小板2种。
单采血小板是用血细胞分离机采集单个供血者循环血液中的血小板，每袋血小板定义为1个治疗量（血小板≥2.5×1011/L）。
浓缩血小板为从全血中分离出来的血小板，国内以每200mL全血分离出的血小板定义为1个单位（U，血小板≥0.2×1011/L），10～12U浓缩血小板约折合1个治疗量的单采血小板。
3.3输血前评价输血前做血常规检测以确定患者是否需要输注血小板。
3.4输血后疗效评估一般输注1治疗量，可以使得PLT浓度提高50×109/L。
输血后应进行评估，包括血小板计数、出血情况及体征有无改善。
血常规检测对于输血的指导作用是每个临床医师必须掌握的，是医师判断是否输血的主要指标。
（收稿日期：2016-10-24）细菌鞭毛染色方法的改良徐娜娜何静妹汤仁仙鞭毛（flagellum）作为细菌的运动器官，鞭毛的数量、形态和它在菌体的分布位置是鉴定细菌的重要指标，但由于它的直径非常纤细，只有12~30nm，需用电子显微镜观察，或采用特殊的染色方法使鞭毛增粗后才能在普通光学显微镜下观察到。
细菌鞭毛的染色方法
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细菌鞭毛银染法技术
细菌鞭毛银染法技术本文介绍了细菌鞭毛银染法技术，对操作者鞭毛染色大有帮助，其染色效果十分理想，值得同行们借鉴学习。
标签：细菌；鞭毛；银染法；培养基；玻片；染色1资料与方法1.1一般资料1.1.1供试菌种枯草杆菌（Bacillus subtilis）.粘质沙雷氏菌（Serratia marcescens）由湖南师范大学微生物教室提供。
1.1.2培养基配方组成：牛肉膏10 g，蛋白胨15 g，琼脂15 g，氯化钠5 g，蒸馏水1000 mL，pH 7.2。
（牛肉膏、蛋白胨由杭州微生物试剂有限公司生产，琼脂由福建省石狮市宝双塔琼脂加工厂生产）。
按上述配方配好培养基后，用干净试管分装包捆好，经高压灭菌摆斜面冷却凝固, 然后放入冰箱冷藏24 h，使斜面析出冷凝水，为供试菌活化提供斜面培养基。
1.2方法1.2.1载玻片洗涤新玻片的洗涤，用洗衣粉煮沸玻片1 h，然后用自来水冲洗干净，沥干后用95%的乙醇侵泡备用；用后玻片的洗涤，采取稀溶液洗涤法，将重铬酸钠或重铬酸钾50 g先溶解于850 mL自来水中，然后慢慢加热溶解，待冷却后除除加入100 mL浓硫酸，边加边搅动。
此溶液氧化能力极强，具有极强的去油污作用。
对处理玻片应放入溶液中加盖密封，（以防溶液氧化变质）。
一般侵泡2 d取出冲洗干净，沥干后用95%的乙醇侵泡备用。
如除污剂侵泡时间太长，会导致玻片变质不能使用。
对划伤较严重的玻片，建议不要使用, 以免影响染色效果。
1.2.2供试菌活化为增强细菌的活动力，将供试菌放在30℃的培养箱内连续培养活化五代（每代12 h）。
然后将最后一代转接放入31℃培养箱内培养12 h，作为细菌鞭毛染色的最佳时期。
1.2.3菌种稀释孵育取斜面活化菌种2~3环于盛有2 mL无菌水试管中,制成轻度浑浊的菌悬液，然后把试管直立于36℃水浴锅中孵育9 min，让菌体表面附着的鞭毛自然舒展游动。
实验表明，细菌孵育5 min，只有部分鞭毛舒展游动，染色效果欠佳；孵育18 min菌体鞭毛染色明显很大，与真实细菌差异较大；超过25 min后鞭毛从菌体上自然脱落，染色效果较差。
实验五细菌鞭毛染色与鞭毛类型观察
实验五细菌鞭毛染色与鞭毛类型观察一、目的要求学习掌握细菌鞭毛染色方法掌握细胞鞭毛的类型、形态及功能二、实验原理细菌的鞭毛极细，直径一般为10-20nm，超过了一般光学显微镜的分辨力，只有用电子显微镜才能观察到。
然而，鞭毛若采用特殊的染色法后，就是用普通光学显微镜也能看到鞭毛。
鞭毛染色方法的基本原理是在染色前先用媒染剂处理，让媒染剂沉积在鞭毛上，使鞭毛直径加粗，然后再进行染色。
常用的媒染剂由丹宁酸和氯化高铁或钾明矾等配制而成。
三、实验器材1、菌种大肠杆菌(Escherichia coli) 、枯草杆菌(Bacillus subtilis) 、白色葡萄球菌（Staphylococcus albus）；2、仪器与材料显微镜，接种环、接种针，酒精灯与灯用酒精，火柴，洁净载玻片与盖玻片，洗瓶与蒸馏水，废液缸，擦镜纸与吸水纸，香柏油，二甲苯；3、染料A液：丹宁酸5.0g、甲醛2.0ml、FeCl3 1.5g、1% NaOH 1.0ml、蒸馏水100mlB液：AgNO3 2.0g、蒸馏水100ml四、操作步骤1、载玻片的清洗取新的载玻片以浓重铬酸钾液浸泡24h，清水洗净后再以蒸馏水洗，然后于95%的酒精浸泡，再将玻片通过火焰至玻片边缘火焰呈桔黄色为止，放于滤纸上冷却后再以95%酒精浸泡备用。
2、菌种的准备取斜面菌种在无菌条件下接种到新制备的牛肉膏-蛋白胨-琼脂培养基斜面上，30℃培养12-18小时，并重复转管培养2-3次后备用。
3、制片将浸泡于95%酒精中的载玻片取出，在酒精灯火焰上燃烧除去酒精，冷却后在一端滴加一滴蒸馏水，用无菌的接种环从取少许菌苔，在载玻片的水中轻沾几次。
将载玻片倾斜，使菌液流下，玻片上即遗留一条细菌悬浮液膜，然后平放于空气中干燥。
4、染色⑴滴加鞭毛染色液A液，染色3-5分钟；⑵用蒸馏水充分A液，使背景清洁⑶将水沥干或用B液冲去余水。
⑷滴加B液，在微火上加热使微冒蒸汽，并随时补充染料使不干涸，染色时间30-60S。
鞭毛染色制片实验报告
鞭毛染色制片实验报告
1. 实验目的
本实验旨在通过染色制片技术观察和研究细胞鞭毛的结构和功能，从而加深对细胞鞭毛的认识。
2. 实验原理
鞭毛是一种微细、共纤毛状的细胞器，通过微管结构的动力学机制控制其运动。
为了观察鞭毛的细节结构，常常需要使用染色制片技术。
3. 实验步骤
3.1 鞭毛样本的制备
（略）
3.2 鞭毛染色
（略）
3.3 鞭毛制片
（略）
4. 实验结果与分析
通过实验观察，我们成功制备了鞭毛样本，并完成了染色制片过程。
在显微镜下观察到了染色后的鞭毛样本。
与未染色的鞭毛相比，染色后的鞭毛明显更清晰、更易于观察。
染色剂能够染亮鞭毛的结构，使其在显微镜下更加鲜明可见。
在染色制片的过程中，我们也注意到了一些问题。
首先，染色剂的选择非常重要。
染色剂要能染亮目标物质，同时要不破坏样本的细胞结构。
其次，制片过程需要细心和耐心，避免在操作过程中损坏细胞。
5. 实验总结
本实验通过鞭毛染色制片，观察和研究了鞭毛的结构和功能。
染色制片技术是一种常用的细胞学观察方法，可以使细胞和细胞器的结构更加清晰可见，有助于进一步研究细胞的功能和机理。
在进行鞭毛染色制片实验时，需要注意染色剂的选择和制片过程中的细心操作。
鞭毛染色制片可以应用于多个领域的研究，如生物医学研究、生态学研究等，对于深入了解细胞鞭毛的作用和机制具有重要意义。
总之，本实验通过鞭毛染色制片的方法，成功观察到染色后的鞭毛结构，加深了对细胞鞭毛的认识，并且对于细胞学研究提供了有效的技术手段。
鞭毛染色法——精选推荐
【改良Ryu法】
一、配方：A液：5%石炭酸10ml，鞣酸2g，饱和硫酸铝钾液10ml
B液：饱和结晶紫
应用液：A液10+B液1份混合后室温保存
二、方法：
1.玻片的处理：要求用新的。
用前在95%酒精中浸泡24h以上，用时取出以洁净纱布擦干。
2.在玻片上滴2d蒸馏水
3.取菌环挑取菌落少许，点在蒸馏水顶部；
4.玻片自然干燥
5.加染色液，染15min后自来水轻轻冲洗干净
6.自然干燥，镜检。
【本人经验】
1.蒸馏水不要加太多，否则干燥时间长（尤其是低温环境）；
2.一定要自然干燥
3.整个过程动作要温柔，冲洗时切不可直接对准染色部位，要小流水冲玻片一端。
4.取菌量要少，否则细菌重叠在一起，不易观察鞭毛；
5.要从菌落边缘取菌
6.细菌最好用对数生长期的，切不可用选择培养基培养！
7.观察时要从染色斑边缘开始，逐渐向里。
细菌多数集中在边缘。
8.一定用蒸馏水，不要用生理盐水！。
1马心同-细菌的鞭毛染色
实验要求
• 端生丛毛
两 端 生 鞭 毛 周生鞭毛
鞭毛的有无和着生方式具有十分重要的分类学意义
鞭毛的结构及其运动机制
L环 P环 基体 S环 M环
鞭毛钩 鞭毛丝
观察和判断细菌鞭毛的方法 电子显微镜直接观察 鞭毛长度：15～20μm；直径：0.01～0.02μm 光学显微镜下观察：鞭毛染色和暗视野显微镜
• 镜检观察。
根据培养特征判断：半固体穿刺、菌落（菌苔）形态
实验要求和步骤
• 新鲜的菌种：将菌种连续传代接种后培养至对数 中期。
• 载玻片的准备：将载玻片用洗衣粉煮沸约20分钟， 充分洗净，置于95%的乙醇中备用。
• 制片：将菌液沿载玻片一端流下，自然干燥后染 色。
• 染色：加硝酸银染色A液覆盖3~5分钟，用蒸馏水 冲洗，再用B液覆盖至出现明显褐色（约1min)， 立即用蒸馏水冲洗，自然干燥。
细菌鞭毛染色法染色条件的研讨
细菌鞭毛染色法染色条件的研讨【关键词】细菌［摘要］目的探讨不同的染色条件对细菌鞭毛染色效果影响，寻找一套适合的染色方法。
方法将37 ℃培养18～24 h的普通变形杆菌培养物，稀释成菌悬液制片、染色，比较不同的菌悬液浓度、处理时间、染色时间和染色方法对细菌鞭毛染色效果的影响。
结果浓度为1.5×1012/L的菌悬液37 ℃放置10 min制片，用石炭酸复红法染色10～15 min，水洗，干燥镜检，其背景清晰，80%～90%的细菌有鞭毛，菌体红色，鞭毛淡红色，染色效果理想。
结论细菌鞭毛染色过程中菌悬液的浓度、菌悬液的处理时间、制片方法以及染色时间的长短等条件影响鞭毛染色效果。
［关键词］普通变形杆菌；鞭毛；染色与标记［ABSTRACT］ObjectiveTo study the staining of bacterial flagellum under different staining conditions and to find an appropriate way of it.MethodsThe Proteus vulgaris culture was cultured a t 37 ℃ for 18-24 h， then a slide was made by the diluted suspension and stained. The staining result of bacterial flagellum under different conditions，such as the concentration and handling time of the suspension， staining time and staining methods， was compared. ResultsA slide of bacterial suspension with a concentration of 1.5×1012/L ，to be placed at 37 ℃ for 10 min then stained by carbolfuchsin for 10-15 min. Under a microscope， a clear background with red thalli and faint red flagellum could be seen in 80%-90% of the bacteria.ConclusionThe concentration and handing time of suspension， slidemaking method and staining time are important factors for an ideal flagellum staining.［KEY WORDS］Proteus vulgaris; flagella; staining and labeling细菌鞭毛染色是医学微生物学实验和临床细菌学诊断中一项常用的实验技术，通过鞭毛染色，可以观察鞭毛的形态、数量和鞭毛在菌体分布的位置，并以此来鉴定细菌的一些重要特征［1］。
细菌鞭毛染色
细菌鞭毛染色一、实验目的学习并掌握鞭毛染色方法，并观察鞭毛的形态。
二、实验原理细菌的鞭毛极纤细，直径一般为0.1—0.2um，只有用电子显微镜才能观察到。
但是，如采用特殊的染色法，则在普通光学显微镜下也能看到它。
鞭毛染色的基本原理：即在染色前先用媒染剂(如单宁酸或明矾钾)处理，让它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径加粗，然后再进行染色（如碱性复红、硝酸银、结晶紫）。
常用的媒染剂由丹宁酸和氯化高铁或钾明矾等配制而成。
（本次实验用硝酸银当染色剂）三、实验器材及试剂1.菌种：枯草芽孢杆菌（鞭毛周生）、铜绿假单胞菌（鞭毛端生）。
2.溶液和试剂：硝酸银鞭毛染色剂A液和B液、95%乙醇、蒸馏水。
3.仪器和其他物品：载玻片、酒精灯、显微镜、双层瓶、擦镜纸、接种环、镊子、电热炉、大烧杯、洗衣粉四、实验步骤鞭毛染色——硝酸银染色法1.载玻片准备：将载玻片用洗衣粉洗涤后，置于95%的乙醇溶液中浸泡20min，使用时取出再火焰上烧去乙醇及可能残留的油迹。
2.制片：取一块载玻片，在一端滴一滴蒸馏水，用接种环无菌操作从枯草芽孢杆菌（铜绿假单孢菌)斜面上挑取菌种在载玻片液滴上轻轻蘸一下，使液滴表面形成一薄层菌膜，随后倾斜玻片，使悬菌液缓慢流向另一端，用吸水纸在载玻片边缘处吸去多余菌悬液，自然干燥。
3.染色：滴加硝酸银染液A液覆盖菌面3-5min后用蒸馏水充分洗去A液，之后用B液洗去残留水分，再滴加B液覆盖菌面数秒至1min，其间可用微火加热，当菌面出现明显褐色时，立即用蒸馏水冲洗，自然干燥。
4.镜检：先低倍，再高倍，最后用油镜检查，菌体呈深褐色，鞭毛呈浅褐色。
四、实验结果记录枯草芽孢杆菌鞭毛染色观察图铜绿假单胞菌鞭毛染色观察图五、实验结果分析1.理论结果：2.实验结果：3.铜绿假单胞菌鞭毛实验，观察结果与理论结果差异分析：油镜视野中，铜绿假单胞菌的鞭毛出现了多根，与理论结果的一根有所差异，其原因可能是染色方法不恰当或干燥时装片遭到剧烈震动，导致鞭毛脱落，脱落的鞭毛附着在了菌体表面，造成了一个菌体着生多跟鞭毛的假象。
鞭毛染色液(石碳酸复红法)
鞭鞭毛染色液(石碳酸复红法)简介：细菌鞭毛是细菌的运动器官，幽门螺杆菌能够从强酸性的胃内腔穿过胃上皮细胞上的黏液层达到胃上皮细胞的中性环境，这就是鞭毛运动作用的很好例证。
通过鞭毛染色，可以观察到鞭毛形态、数量和鞭毛在菌体分布的位置，鞭毛数量和在菌体上的分布位置是鉴定细菌的重要依据之一。
Leagene 鞭毛染色液采用石碳酸复红法，该染色法的优点是采用石碳酸复红作为核心染料，试剂比较稳定，操作简单，结果判断更可靠。
组成：操作步骤(仅供参考)：1、 配制鞭毛染色工作液：使用前按试剂(A):试剂(B)=混合，即为鞭毛染色工作液，室温保存待用。
2、 在洁净无油脂的载玻片上滴加2滴蒸馏水。
3、 用接种环挑取无菌蒸馏水，再与血平板上菌落接触，允许细菌游到接种环蒸馏水中，再将接种环移到玻片上蒸馏水顶部轻点次。
4、 轻轻摇动玻片，使细菌分布均匀。
切勿研磨和搅动，以防鞭毛脱落。
5、 置室温或35℃恒温箱内干燥固定。
6、 滴加鞭毛染色工作液染色。
7、 轻轻水洗。
8、 自然晾干。
9、 镜检：从涂片边缘开始，由外及里，逐渐移至中心。
细菌分布少的地方，鞭毛容易观察。
细菌密集的地方，鞭毛被菌体挡住，不易观察。
染色结果：菌体和鞭毛皆为红色，菌体染色较鞭毛为深。
注意事项：编号 名称 DM0031 50ml DM0031 100ml Storage 试剂(A): 染色稀释液 50ml 100ml RT 避光 试剂(B): 碱性品红染色液 5ml 10ml RT 避光使用说明书 1份1、固定时不宜用火焰固定。
2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：12个月有效。
相关：编号名称CS0001 ACK红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer)DC0032 Masson三色染色液DC0041 天狼星红染色液DG0005 糖原PAS染色液DM0002 姬姆萨染色液(1:9)PS0013 RIPA裂解液(强)PW0053 Western抗体洗脱液(碱性)TC0713 葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD比色法)。
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Ａｂ ｔａ ｔ Ｔ ｉ ｓｕ ｙｉ ｔ ｐｉ ｅｔｅｔ ｄｔ ｎ ｌ ｉ ｅＱ ｅｔ ｔｉｉｇｍｅｈ ｄ ｙｕ ｉｇｔｎ ｉ ｎ ｅ １ ｗ ｔ ｉｈ ｒ ｓｒ ｃ ｈｓ ｔｄ ｓ ｏｏ ｔ ｈ ｒ ｉ ｏ ａ ｌ ｒ ｕ ｓ ｓａｎｎ ｔｏ ．Ｂ ｓｎ ａ ｎｎａ ｄＦ Ｃ３ ｉ ｈｇ ｅ ｍｚ ａ ｉ Ｓｖ ｈ ｍａｓｃ ｎ ｅ ｔａｉｎ ｓｍｏｄ ｎ ｔｅｅｓ ｌｔ ｎ ｒ ｅ ａａｅｙｓ ｒｄ ｓ ｏ ｃ ｎｒｔ ｓａ ｒａ ｔ（ｈ ｓ ｏｕｉ ｓｗｅｅｓｐ ｒｔｌ ｔ ｅ ），ａｓ ｂｅａ ｄ ｃｅｒｓａｎｎ ｅｕｔ ｆ ａ ｉｕ ｏ ｏ ｏ ｔ ｌ ｎ ｌａ ｔｉｉｇｒｓｌ ｏ ｃ ｌｓ ａ Ｂ ｌ
色 时间太长 ， 且效果 不够稳 定 。不 少 生 物 、 医学 专 业 的教 师及科研 人员 对鞭毛 的染 色方 法 进行 了改
１ 材料 与方 法
１ １ 材 料 ．
１ １ １ 菌种 ． ． １ １２ 培 养基 ．．
枯 草芽 胞杆 菌 （ 实验 室保存 ） 。 牛 肉膏蛋 白胨 半 固体培 养基 ： 牛
维普资讯
微 生物 学杂 志 ２０ 年 ７ ０７ 月第 ２ 卷第 ４ ７ 期 Ｊ Ｕ Ｎ ＬＯ ＩＲ ＢＯ Ｏ ＹＪｌ２０ ｏ ２ Ｎ ． Ｏ Ｒ Ａ ＦＭ Ｃ Ｏ ＩＬ Ｇ ｕ ７ １ ７ ｏ ｙ０ Ｖ ． ４
优 化 的细 菌鞭 毛 染 色技 术
，
关键 词 细 茵鞭 毛 ； 色 ； 染剂 ； 性 染料 染 媒 碱
中 图分 类号Ｑ３ ９ 文献标识码 Ｂ 文章 编 号 １０ ７ ２ （０ ７ Ｏ ０ ９ ０ ０ ５— ０ １ ２ ０ ） ４— ０ ４— ３
Ａｎ ｉ ｐｒ ｖ ｄ ｓ ａ ｎｉ ｅ ｈｏ ｏ ａ ｔ ｒａ ａ ｅ ｕｍ ｍ ｏ ｅ ｔ ｉ ｎｇ ｍ ｔ ｄ ｆ ｒ ｂ ｃ ｅ ｉ ｌｆ ｇ ｌ ｌ
细菌鞭 毛的着 生方式是 鉴别 细菌 种类 的重 要
依据 ， 鞭毛染 色是 重要 的实 验 技 能 。但 因鞭 毛 极
作 步骤 ， 强 实验 效 果 ， 增 经过 多次 实验 ， 制 出一 研 种新 的鞭 毛染 色 方 法 ： 单 宁 酸 和三 氯化 铁 作媒 用 染 剂 ， 加单 宁酸和 三氯 化铁 的量 ， 将两 液 分别 增 并 保存 ， 临用时混 合在 一起 ， 染后 用 细菌单 染 色 的 媒
进 “ ， 到较好 的效果 ， 得 但仍存 在 不 同方 面 的 不
足 。如谷海 赢先生 改进 的银 染法 ， 液易 配制 、 染
保存 时间长 ， 色 时间 短 ， 色效 果 较 好 ， 因其 染 染 但
配制 的银 染液 加 大 了 硝酸 银 的 量 ， 加 了 实验 成 增
肉膏 ３ ｇ Ｌ 蛋 白 胨 １ ／ ， ａ １５ｇ Ｌ 琼 脂 ／ ， ０ ｇ Ｌ Ｎ Ｃ ／ ，
美蓝 ， 分别对培 养好 的枯 草芽胞 杆 菌进行 染 色 ， 得
到极好 的染色 效果 。
为纤 细 ， 直径 通 常只有 １ ２ ｍ， 其 ０～ ０ ａ 并且 鞭 毛 的 生 长又受培 养条 件 及 培 养 时 间的 影 响 ， 以要 想 所
技术 较为 困难 。现 用 实 验 教 材 上 介 绍 的银 染
ｓｂｔｓ ａ ｏｔ ｎｄｗ ｉ ｅｐｃｉ ｌ ｓ ｉｅ ｙｓｆ ｎｎａｕｏ ｓｓｌｔｎ ｈ ｉ ｓｃｒｏｉ ａｉ ａ ａｅｃｎｅ ｕｔｌ ｓ ｂａ ｅ ｈ ｈｒｓｅｔ ｅ ｔｎｄ ｂ ａ ａｉ ｑ ｅｕ ｏｕｏ ，ｔｅＱ ’ ａｂｌ ｃ ｌ ｌｓｅｃ ｉｅ ｗ ｉ ｃ ｖｙ ａ ｒ ｉ ｃ ｄ ｋ
王桂 萍 ，朱 陶 ，王 宜磊 ，张 子 宇 ，李 财 新 ，杨 宏 宇
（ 泽 学 院 生命 科 学 系 ， 菏 山东 菏泽 ２４ １ ） ７ ０ ５
摘 要
优 化 了 实验教 材 上 传 统 的 银 染 液 鞭 毛 染 色方 法 ， 单 宁 酸 和 Ｆ Ｃ３ 媒 染 剂 ， 大单 宁酸 和 Ｆ Ｃ 的 用 ｅ １做 增 ｅ１
质 量浓 度 （ 将 其 配 制 的溶 液分 别保 存 ） 然 后 用碱 性 染 料 沙 黄水 溶 液 齐 氏 石 炭 酸 碱 性 复 红 染液 和 稀 释 并 ， ”、 ‘
１ ｏ倍 吕 氏碱 性 美蓝 染液 … 分 别对培养好的枯草 芽胞杆茵进 行染色， 到较粗 、 得 清晰的染 色结果。
得 到理想 的染色 结 果 ， 使初 学 者 易 掌 握 的 染 色 染 液沙 黄水溶 液 、 氏石炭 酸碱 性 复红 、 并 齐 吕氏碱 性 法 ， 果虽好 ， 染 色 液配 制 较 难 掌 握 ， 存 时 间 效 但 保 也短 ， 且染 色液 中的药 品硝 酸银 价 格 较 贵 ， ｅ 并 Ｌｉ ｂ ｓｎ氏鞭 毛染色 法 ， 不存 在 银染 法 的 缺点 ， ｏ 虽 但染
ｆｃ ｉ ｎ ｅ ｌ ｌ ｅ ｖ’ ｌ ａｅ ｃｅ ｅ ｍｅｈｙｅ ｅ ｂｕｅ ｕ ｈｓｎ ａ ｄ ｄｅ ｕｐｅ ｄｉ ｕｔｄ ｌ Ｓａ ｋ ｌｓ ｎｃ ｔ ｌ ｎ ｌ ． Ｋ ｅ ｗ ｏ ｄ Ｂａ ｔｒａ ｌｇ ｌ ｙ ｒｓ ｃｅ ｉｌｆａ ｅｌ ； Ｓ ａｎ ｎ ｕｍ ｔｉ ｉ ｇ；Ｍ ｏ ｄ ｎｔ Ｂａ ｉ ｙ ｒａ ； ｓｃ ｄ ｅ
ＷＡＮＧ ｉｐ ｎ Ｇｕ — ｉ ｇ，Ｚ ＨＵ ｏ，Ｗ ＡＮＧ ・ｅ ，ＺＨＡＮＧ ｉｙ Ｔａ Ｙｉｌ ｉ Ｚ — ｕ，ＬＩＣａ — ｉ ｉｘ ｎ，ＹＡＮＧ ｎ — ｕ Ｈｏ ｇ ｙ
（ Ｄ￣ａ ｍｅ ｏ ｉ ｃ ｎｅ ， ｆ ｅＵ ｉ ｒ ｔ ， ｅ ｈ ｎ ｏ ｇ ２ ４ １ ） ａ ｍ ｆ Ｓｉ ｃ ｌｅ ｎ ｅｓｙ Ｈ ｚ Ｓ ａ ｄ ｎ ， ７ ０ ５ ｆＬ ｅ ｅ ｓ ｚ ｖ ｉ ｅ