β—catenin在原发性肝细胞癌中的表达及其临床意义

β—catenin在原发性肝细胞癌中的表达及其临床意义目的探讨肝细胞癌肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC）β-catenin的表
达与HCC临床病理特征的关系。

方法应用Envsion法检测333例HCC，168例癌旁肝组织及89例正常肝组织的β-catenin表达；RT-PCR检测37例HCC及癌旁组织，肝癌细胞株HepG2和正常肝细胞株LO2的β-catenin mRNA表达。

结果β-catenin在HCC胞质、胞核的阳性表达率为79%/37%；在癌旁和正常肝组织中的表达率为72%/0%、70%/0%。

差异均有统计学意义（P均76%。

然后根据两项评分乘积判断结果。

RNA结果分析：采用图像分析软件Gensnap对电泳结果进行半定量分析，计算目的基因和内参基因的灰度比值。

1.5 统计学分析
所有数据均采用SPSS 15.0统计学软件包进行处理。

采用χ2检验或Fisher 精确检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果
2.1 β-catenin蛋白的表达
β-catenin蛋白在胞膜的阳性表达率是70%（234/333）；在癌旁和正常肝组织的表达率分别是60%（100/168）和65%（58/89）。

β-catenin在非癌组织中的膜表达低于在癌组织中的膜表达（封三图4A、C、D）。

经统计学分析，肝细胞癌中β-catenin膜的表达与在非肿瘤组织中膜的表达两两比较有显著性差异（癌旁，P=0.000；正常肝组织，P=0.000）；β-catenin胞质的阳性表达率是79%（262/333）；在癌旁和正常肝组织中的表达率分别是72%（122/168）和70%（62/89）。

β-catenin 在非癌组织中的胞质表达低于在癌组织中的表达（封三图4A、C、D）。

经统计学分析，肝细胞癌中β-catenin胞质的表达与在非肿瘤组织中胞质的表达两两比较有显著性差异（癌旁，P=0.000；正常肝组织，P=0.000）；β-catenin蛋白在胞核的阳性表达率是37%（123/333），在非癌组织中无核表达（封三图4B）。

经统计学分析，肝细胞癌中β-catenin胞核表达与在非肿瘤组织中核表达两两比较有显著性差异（癌旁，P=0.000；正常肝组织，P=0.000）。

2.2 β-catenin mRNA的表达
本实验检测了37例肝细胞癌及对应的癌旁非肿瘤组织中β-catenin mRNA的表达。

β-catenin mRNA在癌旁非肿瘤组织的表达明显低于其在肝细胞癌组织中的表达（图1）。

经统计学分析，β-catenin mRNA在肝细胞癌组织和癌旁非肿瘤组织中的表达量有显著性差异（P=0.001）。

本实验也检测了β-catenin mRNA在肝癌细胞株HepG2和正常肝细胞株LO2的表达。

β-catenin mRNA在HepG2的表达明显高于其在LO2的表达（图1）。

A：肝细胞癌（T）及对应的癌旁非肿瘤
组织（P）中β-catenin mRNA的表达；B：1.正常肝细胞株LO2中未检测出β-catenin mRNA的表达；2.肝细胞癌细胞株HepG2中β-catenin mRNA 过表达
图1 β-catenin mRNA的表达
2.3 β-catenin蛋白的表达与肝细胞癌临床病理参数的关系
β-catenin胞质表达与肿瘤细胞分化密切相关（P=0.031），随着细胞的分化程度降低而增加。

与年龄、性别、AFP值、肿瘤大小、HBs-Ag 感染、门静脉癌栓和TNM分期无统计学意义。

β-catenin蛋白核表达与HBV 感染密切相关（强度，P=0.028；百分比，P=0.026），与细胞分化程度相关（P=0.023），β-catenin蛋白核表达随着细胞分化程度的降低而增加。

与年龄、性别、AFP值、肿瘤大小、门静脉癌栓和TNM分期比较，差异无统计学意义（表1）。

3 讨论
肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是全球最常见的恶性肿瘤之一，其发病率地区差异很大，常见于亚洲和非洲国家。

HCC的发生是一个多阶段、多因素协同作用，经过启动、促癌和演进等多步骤过程以及多个癌基因和相关基因参与、多个基因发生突变的结果。

有研究显示，β-catenin基因外显子3突变在肝癌中是频发事件，可达62.5%，其突变可使β-catenin稳定化，促进肝癌的发生[3]。

正常情况下β-catenin主要与细胞膜上E-cadherin结合参与细胞黏附作用，细胞内的β-catenin与糖原合成酶激酶3（GSK-3），结直肠腺瘤息肉蛋白（APC）和轴蛋白（Axin）结合，形成多聚蛋白复合体。

并在APC和GSK-3β等作用下很快降解，不会形成聚集。

当Wnt蛋白与胞膜受体结合后抑制GSK-3激活，阻止β-catenin多聚蛋白复合体的形成，β-catenin降解减少从而进入细胞核内形成β-catenin-Tcf/Lef复合体，调控下游靶基因的表达，参与肿瘤的发生发展。

如乳腺癌、食管癌、结直肠癌、恶性黑色素瘤、白血病、前列腺癌、子宫内膜癌、原发性肝癌、甲状腺癌、胰腺癌等恶性肿瘤中都有Wnt/β-catenin通路异常[4]。

Lai等[5]研究结果显示β-catenin mRNA在肝细胞癌中的表达明显高于癌旁肝组织，免疫组化结果亦显示β-catenin异常累积出现在肝细胞癌细胞胞核中；Austinat等[6]的研究显示，在53例肝细胞癌标本中有42例呈胞质/胞核阳性表达；Inagawa的研究亦表明[7]β-catenin 在肝癌中呈局部或广泛核内表达，其核阳性表达率达35.3%，在癌旁非肿瘤组织中无胞核表达。

Higgs MR等[8]的研究显示HCV 型肝炎病毒诱导活化的β-catenin促进c-Myc基因的表达，表明β-catenin与HCV 相关肝细胞癌的发生发展中起着重要的作用。

Evason KJ等[9]研究发现β-catenin 在非典型肝细胞腺瘤样肿瘤与高分化肝细胞癌中的激活都有相似的形态学和细胞遗传学的改变，提示β-catenin在肝细胞癌发生的早期发生改变。

本实验结果显示，β-catenin在癌旁肝组织和正常肝组织中中主要聚集在肝细胞膜，在大样本肝细胞癌组织中β-catenin胞质/核表达明显升高，核表达阳性率为37%。

RT-PCR 结果显示β-catenin mRNA在癌组织表达高，在非肿瘤组织中表达低；在肝癌细
胞株HepG2表达高，在正常肝细胞株LO2表达低。

与王启明等[10]的研究结果一致，亦提示β-catenin的激活与肝细胞癌的发生发展密切关系。

HCC的众多临床病理参数都与其生物学行为或预后存在着一定的联系。

徐兵等[11]研究发现，β-catenin的异位表达与肿瘤的分级密切相关。

本研究结果显示，β-catenin胞质/核的表达与肿瘤细胞分化程度和HBs-Ag状态（status）显著相关；β-catenin在分化差的细胞质/核表达高，分化好的细胞质/核表达低。

β-catenin作为Wnt/β-catenin通路的关键成员，对细胞的分化有重要影响。

Witjes CD等[12]研究表明β-catenin蛋白在胞质和核内的积聚与肝细胞癌细胞分化相关，低分化细胞表达升高，高分化细胞中减低。

因此，本研究结果提示β-catenin 蛋白的异常积聚过程伴随着细胞分化程度的降低，参与了肝细胞癌的发生发展。

[参考文献]
[1] Surana R，Sikka S，Cai W，et al. Secreted frizzled related proteins：Implications in cancers[J]. Biochim Biophys Acta，2013，1845（1）：53-65.
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[3] Lachenmayer A，Alsinet C，Savic R，et al. Wnt-pathway activation in two molecular classes of hepatocellular carcinoma and experimental modulation by sorafenib[J]. Clin Cancer Res，2012，18（18）：4997-5007.
[4] Klaus A，Birchmeier W. Wnt signalling and its impact on development and cancer[J]. Nat Rev Cancer，2008，8（5）：387-398.[5] Lai TY，Su CC，Kuo WW，et al. β-catenin plays a key role in metastasis of human hepatocellular carcinoma[J]. Oncol Rep，2011，26（2）：415-422.
[6] Austinat M，Dunsch R，Gaunitz F，et al. Correlation between beta-catenin mutations and expression of Wnt-signaling target genes in hepatocellular carcinoma[J]. Mol Cancer，2008，7（21）：1-9.
[7] Inagawa S，Itabashi M，Fukao K，et al. Expression and prognostic roles of β-catenin in hepatocellular carcinoma[J]. Clin Cancer Res，2002，8（2）：450-456.
[8] Higgs MR，Lerat H，Pawlotsky JM. Hepatitis C virus-induced activation of β-catenin promotes c-Myc expression and a cascade of pro-carcinogenetic events[J]. Oncogene，2013，32（39）：4683-4693.
[9] Evason KJ，Grenert JP，Ferrell LD，et al. Atypical hepatocellular adenoma-like neoplasms with β-catenin activation show cytogenetic alterations similar to well-differentiated hepatocellular carcinomas[J]. Hum Pathol，2013，44（5）：
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[10] 王启明，贾连群，周鸿鹰，等. Wnt/β-catenin 信号因子在HepG2以及LO2细胞中的表达[J]. 细胞与分子免疫学杂志，2007，32（8）：826-829.
[11] 徐兵，罗庆丰，江凌玲，等. 肝细胞肝癌β-catenin的表达与临床病理特征的关系[J].江西医药，2011，46（12）：1072-1074.
[12] Witjes CD，Ten Kate FJ，Verhoef C，et al. Immunohis to chemical characteristics of hepatocellular carcinoma in non-cirrhotic livers[J]. J Clin Pathol，2013，66（8）：687-691.。