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食品检验工食品卫牛检验知识操作考核一

微生物的分离、纯化和接种

一、微生物的分离、纯化

1.原理

从混杂微生物群体屮获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。平板分离法普遍用于微生物的分离与纯化。其基本原理是选择适合于待分离微生物的生长条件，如营养成分、酸碱度、温度和氧等要求，或加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。

微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落，通常是由一个细胞繁殖而成的集合体。因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。获取单个菌落的方法可通过平板划线等技术完成。当然，值得指出的是，从微生物群体中经分离生长在平板上的单个菌落并不一定保证是纯培养。因此，纯培养的确定除观察其菌落特征外，还要结合显微镜检测个体形态特征后才能确定，有些微生物的纯培养要经过一系列分离与纯化过程和多种特征鉴定才能得到。

2.材料

2.1培养基

牛肉膏蛋白腺琼脂培养基。

2.2微牛物群体

含混杂多种细菌待分离液体菌种。

2.3仪器及其他用品

无菌玻璃涂棒、无菌吸管、接种环、无菌培养皿等。

3.步骤

3・1平板划线分离法

3.1. 1倒平板

将牛肉膏蛋白陈琼脂培养基分别加热融化待冷至55〜60°C时，进行倒平板。方法：右手持盛培养基的试管或三角瓶置火焰旁边，用左手将试管塞或瓶塞轻轻地拔岀，试管或瓶口保持对着火焰；然后左手拿培养皿并将皿盖在火焰附近打开一缝，迅速倒入培养基约15 mL,加盖后轻轻摇动培养皿，使培养基均匀分布在培养皿底部，然后平置于桌面上，待凝后即为平板。并用记号笔标明培养基名称、试样编号和实验日期。

3.1.2划线

在近火焰处，左手拿皿底，右手拿接种环，挑取含混杂多种细菌待分离液体菌种在平板上划线。划线的方法很多，但无论采用哪种方法，其目的都是通过划线将样品在平板上进行稀释，使之形成单个菌落。常用的方法是用接种环以无菌操作挑取土壤: 悬液一环，先在平板培养基的一边作第一次平行划线3或4条，再转动培养皿约70。角，并将接种环上剩余物烧掉，待冷却后通过第一次划线部分作第二次平行划线，再用同样的方法通过第二次划线部分作第三次划线和通过第三次平行划线部分作第四次平行划线。划线完毕后，盖上培养皿盖，倒置于温室37°C培养24h。

二、微生物的斜面接种法

1・原理

斜面接种法主要用于接种纯菌，使其增殖后以鉴定或保存菌种用。

从平板培养基上挑取分离的单个菌落，或挑取斜面，接种到斜面培养基上。操作应在无菌室、接种柜或超净工作台上进行，先点燃酒精灯。

2.方法

将菌种斜面培养基（简称菌种管）与待接种的新鲜斜面培养基（简称接种管）持在左手拇指、食指、中指及无名指Z间，菌种管在前，接种管在后，斜面向上管口对齐，应斜持试管呈）〜45”角，并能清楚地看到两个试管的斜面，注意不要持成水平，以免管底凝集水浸湿培养基表面。用右手在火焰旁转动两管棉塞，使其松动，以便接种时易于取出。

右手持接种环柄，将接种环垂直放在火焰上灼烧。银钻丝部分（环和丝）必须烧红, 以达到灭菌目的，然后将除手柄部分的金属杆全用火焰灼烧一遍，尤其是接镰铮丝的螺口部分，要彻底灼烧以免灭菌不彻底。用右手的小指和手掌之间及无名指和小指之间拔出试管棉塞，将试管口在火焰上通过，以杀灭可能玷污的微牛物。棉塞应始终夹在手中如掉落应更换无菌棉塞。

将灼烧灭菌的接种环插入菌种管内，先接触无菌苔生长的培养基上，待冷却后再从斜面上刮取少许菌苔取出，接种环不能通过火焰，应在火焰旁迅速插入接种管。在试管中由下往上做S形划线。接种完毕，接种环应通过火焰抽出管口，并迅速塞上棉塞。再重新仔细灼烧接种环后，放回原处，并塞紧棉塞。将接种管贴好标签或用玻璃铅笔划好标记后再放入试管架，置于温室37°C培养24h。