实验三 细胞骨架的光学显微镜观察

实验三细胞骨架的光学显微镜观察
一、实验目的
掌握植物细胞骨架的光镜标本制作方法。

细胞骨架是指细胞质中纵横交错的纤维网络结构，按组成成分和形态结构的不同可分为微管、微丝和中间纤维。

它们对细胞形态的维持、细胞的生长、运动、分裂、分化和物质运输等起重要作用。

光学显微镜下细胞骨架的形态学观察多用1% Triton X-100处理细胞，可使细胞膜溶解，而细胞骨架系统的蛋白质被保存，再用考马斯亮兰R250染色，使得胞质中细胞骨架得以清晰显现。

二、材料、试剂和仪器
1．材料
新鲜洋葱鳞茎、人口腔上皮细胞
2．试剂
1）M缓冲液（pH 7.2）各成分终浓度为：
50mmol/L咪唑(MW:68.08),
50mmol/L KCl(MW:74.55),
0.5mmol/L MgCl2?6H2O(MW:203.30),
1mmol/L EGTA(MW:380.36),
0.1mmol/L EDTA-Na2(MW:372.24),
1mmol/L DTT(MW:154.3)
2）6mmol/L PBS磷酸缓冲液（pH 6.5）:
KH2PO4 : Na2HPO4?2H2O = 7:3 (见附录3 查磷酸缓冲液的配置)
3）0.7% NaCl生理盐水
4）1% Triton X-100(聚乙二醇辛基苯基醚) 溶于M-缓冲液
5）3% 戊二醛100mL: 25% 戊二醛取12mL ,PBS 88mL
6）0.2% 考马斯亮蓝R250染液200mL:
考马斯亮蓝R250 0.2g,
甲醇46.5mL,
冰乙酸7mL,
蒸馏水46.5 mL
3．仪器
光学显微镜，镊子，剪刀，试管，表面皿，滴管，载玻片，盖玻片,灭菌牙签，1.5mL离心管，1mL 吸头，1mL取液器，酒精灯，染色缸
细胞骨架动画
三、实验程序
四、结果与分析
洋葱鳞茎外层与内层的表皮细胞比较（放大倍数10×20）
五、思考题
1．光镜下观察到的细胞骨架有何形态特征？
2．对实验成功或失败的原因进行讨论。

实验中的注意事项和关键步骤。