(人教版)高中生物选修1专题2课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 Word版含解析

专题2 微生物的培养与应用
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
1．在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养细菌后，指示剂将
( )
A．变蓝色B．变红色
C．变黑色D．变棕色
解析：细菌合成的脲酶将尿素分解成了氨，氨会使培养基的碱性增强，pH升高，
加入酚红指示剂将变红。

答案：B 2．测定土壤中细菌数量一般选用104、105和106倍的稀释液进行平板培养，而
测定真菌的数量一般选用102、103和104倍稀释，其原因是( )
A．细菌个体小，真菌个体大
B．细菌易稀释，真菌不易稀释
C．细菌在土壤中数量比真菌多
D．随机的，没有原因
解析：土壤中的微生物大约70%～90%是细菌，真菌的数量要比细菌少。

样品
的稀释度越高，在平板上生成的菌落数目就越少。

在实际操作中，通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数在30～300，适于平板计数，所以细
菌的稀释倍数要高于真菌的稀释倍数。

答案：C 3．用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数时，通过统计平板上的菌落数就
能推测出样品中的活菌数。

原因是( )
A．平板上的一个菌落就是一个细菌
B．菌落中的细菌数是固定的
C．此时的一个菌落一般来源于样品稀释液中的一个活菌
D．此方法统计的菌落数一定与活菌的实际数相同
解析：用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数时，平板上的一个菌落一般来
源于样品稀释液中的一个活菌，但偶尔也能来自两个细菌，所以此方法统计的菌落
数可能与活菌的实际数不相同。

答案：C
4．土壤中的细菌能分解尿素，是因为它们能合成一种( )
A．尿素酶B．脲酶
C．蛋白酶D．肽酶
解析：能够分解利用尿素的细菌，其细胞内含有脲酶，可以把尿素分解成氨，
然后进一步利用。

答案：B
5．回答有关微生物的培养与应用问题：(1)微生物的培养需要使用培养基，不同培养基的配方不同，但一般都含有___
_____、碳源、氮源；在配制从土壤中筛选纤维素分解菌的培养基时，需加入____ ____作为唯一的碳源，该培养基属于________培养基；若将样品接种到鉴别纤维素分解菌的培养基上，在该培养基中需要加入的特殊染料是________，当形成菌落以后可以根据菌落周围是否产生________来筛选纤维素分解菌。

(2)若要统计土壤样品中纤维素分解菌的数目，宜采用________法接种，根据
土壤样品的稀释倍数和接种稀释液的体积，统计平板上的________就能大约推测
出样品中的活菌数。

(3)某同学在稀释倍数为104的培养基中测得平板上菌落数的平均值为23.4，则
每毫升样品中的活菌数是________(所用稀释液的体积为0.2 mL)。

答案：(1)水、无机盐纤维素选择刚果红透明圈(2)稀释涂布平板
菌落数目(3)1.17×106
A级基础巩固
1．下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是( ) A．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、尿素、琼脂、水
B．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、琼脂、水
C．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、尿素、琼脂、水D．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水
解析：能选择出分解尿素的细菌的培养基必须是以尿素为唯一氮源，B、D不符
合。

C没有有机碳源，分解尿素的微生物不能正常生长。

答案：A 2．从土壤中分离能分解尿素的细菌，可以利用选择培养基，其成分中一定有
( )
①尿素②有机氮化物③无机盐④有机碳化物
⑤水⑥无机碳化物
A．①③④⑤B．②③④⑤
D．②③⑤⑥
C．①③⑤⑥
解析：分离能分解尿素的细菌，故培养基中一定有尿素，一定没有有机氮化物；
另外，水、无机盐和碳源、能源也是细菌生长所必不可少的。

有机碳在这里既是碳源又是能源，因为分解尿素的细菌是异养微生物，不能利用无机碳化物。

答案：A
3．关于土壤取样的叙述错误的是( )
A．土壤取样，应选取肥沃、湿润的土壤
B．先铲去表层土3 cm左右，再取样
C．取样用的小铁铲和信封在使用前不用灭菌
D．应在火焰旁称取土壤
答案：C 4．取少量酵母菌液放入血球计数板直接记数，测得的数目是( )
A．活细胞数B．死细胞数
C．菌落数D．细胞总数
解析：显微镜直接计数法的缺点就是不能区分活菌和死菌。

答案：D 5．在做分离分解尿素的细菌实验时，A同学从对应106培养基上筛选出大约15 0个菌落，而其他同学只筛选出大约50个菌落。

A同学的结果产生原因可能有(
)①由于土样不同②由于培养基被污染③由于操作失误④没有设置对照
A．①②③
B．②③④
D．①②④
C．①③④
答案：A
6．下列关于统计菌落数目的方法的叙述，不正确的是( )
A．采用平板计数法获得的菌落数往往少于实际的活菌数
B．当样品的稀释度足够高时，一个活菌会形成一个菌落
C．为了保证结果准确，一般采用密度较大的平板进行计数D．在某一浓度下涂布三个平板，若三个平板统计的菌落数差别不大，则应以
它们的平均值作为统计结果解析：当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，因此统
计的菌落数往往比活菌的实际数目低。

一般选择菌落数在30～300的平板进行计数，密度过大会使计数结果偏小，影响结果的准确性。

涂布三个平板，作为重复组，
取其平均值作为统计结果能增强试验的说服力与准确性。

答案：C
B级能力训练
7．在农业生产研究上，常常需要进行微生物的培养和计数。

(1)如图是利用________法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步________分散
到培养基的表面。

(2)
分析下面培养基的配方：NaNO3、KH2PO4、NaH2PO4、MgSO4·7H2O、KCl、H2 O。

若此培养基用于培养分解尿素的细菌，则应除去上述的________，并加入____
____，以补充________源。

(3)
若在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均值为233，那么每毫升样品中的菌落数是(涂布平板时所用稀释液的体积为0.2 mL)________。

解析：(1) 由题图可知，其采取的是平板划线法，该方法能把聚集的菌种逐步稀
释分散到培养基的表面。

(2) 培养分解尿素的细菌，其氮源是尿素，所以培养基中要除去含氮物质，即除去NaNO3，并加入尿素和葡萄糖，以提供氮源和碳源。

(3) 根据题意可知，每毫升样品中的菌落数＝平板上菌落数的平均值÷体积×稀释倍数＝
233÷0.2×106＝1.165×109。

答案：(1) 平板划线稀释(2) NaNO3尿素和葡萄糖氮、碳(3)
1.165×109 8．有机化工原料氯苯不易降解，会污染环境，现欲从土壤中分离高效降解氯
苯的微生物。

回答下列问题：
(1)
为了获得能降解氯苯的微生物菌种，可在被氯苯污染的土壤中取样，并应选用以_ _______为碳源的培养液进行选择培养。

除含有碳源外，培养液还应含有________
、无机盐和蒸馏水等。

(2) 将获得的3种待选微生物甲、乙、丙分别接种在1 L含20
mg氯苯的相同培养液中培养(培养液中其他营养物质充裕、条件适宜)，观测从实验开始到微生物停止生长所用的时间，甲、乙、丙分别为33 h、15 h、46 h，则应选择微生物乙作为菌种进行后续培养，理由是________________________
_____________________________。

(3)
若要测定培养液中选定菌种的菌体数，既可在显微镜下用________直接计数，也
可选用________法统计活菌数目。

(4) 制备固体培养基，基本步骤是：
计算→称量→溶化→分装→________→包扎→高压蒸汽灭菌→________。

(5) 接种时要对接种环进行灼烧，目的是________。

答案：(1) 氯苯氮源(2) 微生物乙分解氯苯的能力比甲、丙更强
(3) 血细胞计数板稀释涂布平板
(4) 加棉塞倒平板(5) 杀灭接种环上的微生物，避免感染杂菌9．广东省是我国甘蔗生产区之一。

甘蔗是一种高光效的C4植物，单位面积产
量很高，种植面积日益扩大，目前已成为南方地区燃料酒精生产的重要原料。

利用甘蔗生产燃料酒精的一般工艺流程为：甘蔗→榨汁(蔗糖)→酵母发酵→蒸馏→成
品(燃料酒精)。

(1)具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌是理想的酒精发酵菌种，对野生酵母菌进
行诱变后通过筛选可以得到具有这些特性的突变菌，诱变及筛选过程如下：步骤1：野生菌液体培养一段时间后接受紫外线照射诱变处理。

步骤2：制备选择培养基。

在基本培养基的基础上，注意________和________
，加琼脂后灭菌，制成固体平板。

步骤3：将紫外线照射后的菌液稀释涂布平板。

步骤4：根据___________________________________________，
筛选出突变菌。

(2)上述步骤2、3和4的依据分别是________________________
______________________________________________________。

解析：(1)要筛选耐高糖和耐酸的菌种，培养基中必须加入高浓度蔗糖和调低pH，能在选择培养基上生长的即为所需菌种。

(2)步骤2是给其提供高糖或酸性的筛选环境；步骤3是为了获得单菌落；步骤4是根据能生长的菌株具有耐高糖和耐酸
的特性筛选出突变菌。

答案：(1)添加高浓度蔗糖(葡萄糖) 调低pH 是否能在选择培养基上生长(2)提供高糖和酸性的筛选环境；获得单菌落；能生长的菌落具有耐高糖和耐酸的
特性10．某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。

实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察计数，请回答与此实验相关的问题：(1)培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了_______和_____。

除
此之外，培养基还必须含有的基本成分是______和_____。

(2)对培养基进行灭菌，应该采用的方法是__________________
__________________。

(3)为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品的平板置于恒
温培养箱中培养，培养的温度设定在37 ℃。

要使该实验所得结果可靠，还应该同
时在另一平板上接种____________作为对照进行实验。

(4)培养20
h后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，这说明湖水样品中有________种细
菌。

一般说来，菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越___________________
_________。

(5)如果提高培养基中NaCl的浓度，可以用于筛选耐______________细菌，这
种培养基被称为____________________。

答案：(1)氮源(碳源不作要求) 碳源无机盐水(2)高压蒸汽灭菌
(3)无菌水(4)多高(5)盐(或NaCl) 选择培养基11．某同学要分离土壤中能分解尿素的细菌，并统计每克土壤样品中活菌数
目，培养基配方如下表。

将各种物质溶解后，用蒸馏水定容到1 000
mL，再经高温灭菌，制成固体培养基备用。

根据培养基的成分判断，该同学能否分离出土壤中分解尿素的细菌？________(填
“能”或“不能”)，原因是_____________________________________________________。

(2)
培养基用________法灭菌，培养皿用________法灭菌，待培养基冷却到________
℃(填“20”“30”“40”或“50”)左右时，在________附近倒平板，等平板冷却凝固后，将平板倒过来放置，可以防止________________________，以免造成污染。

(3)
培养分解尿素的细菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。

对于固体培养基
应采用的检测方法是_______________________________________________________
_____________________________________________________。

(4)
实验中使用过的培养基及其培养物必须经过________处理后才能丢弃，以防止培
养物的扩散。

解析：(1) 据表分析，表中的蛋白胨可以为微生物的生存提供氮源，所以不能分
离尿素分解菌，分离尿素分解菌需要用以尿素为唯一氮源的选择培养基培养。

(2) 培养基常用高压蒸汽灭菌，培养皿常用干热灭菌。

培养基要冷却到50 ℃左右时才能倒平板，倒平板时要在酒精灯火焰旁进行，以防止杂菌的污染。

将平板倒过来放置可以防止培养皿盖上的水珠落入培养基对培养基造成污染。

(3)培养分解尿素的细菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。

对于固体培养基应采用的检测方法是将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生。

(4) 使用过的培养基及其培养物必须经过灭菌处理后才能丢弃，以防止培养物的扩
散。

答案：(1)不能
培养基含蛋白胨，尿素不是唯一氮源，不能选择出只以尿素为氮源的微生物(培养基含蛋白胨，蛋白胨中含有氮元素) (2)高压蒸汽灭菌干热灭菌50
酒精灯火焰培养皿盖上的水珠落入培养基(3)将未接种的培养基在适宜温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产
生(4)灭菌。