分析化学-高效液相色谱
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3-1 概 述
HPLC是60年代在GC和经典液相色谱基础上发展起来 的。
GC柱效高，且能分离、定量，但有些热稳定性差，不 易挥发的组分不能用GC直接分析，人们想到模仿GC，用细 颗粒固定相，薄壳固定液，以增加柱效。
模仿LC用液体作流动相，在室温下进行，但阻力太大， 液体流动相难以通过，所以又想到加高压泵，加快流动相流 速，这样即增加了柱效，又加快了分析速度，也拓宽了应用 范围，把柱子、高压泵、检测器配成仪器，就形成高效液相 色谱仪。
高压梯度洗脱（高压混合，高压进柱，2个泵。）
贮液槽1
贮液槽2
贮液槽1
贮液槽2
梯度洗脱装置 程序控制
高压泵1 高压泵2
混合室
高压泵
梯度洗脱装置
进柱
进柱
低压梯度洗脱
高压梯度洗脱
不易改变流动向配比,自动化程度低 随时改变流动向配比,自动化程度高
二.进样系统 注射进样：装置简单、死体积小。但进样量小且重现性差。 六通阀进样：目前最常用，由于进样量可由样品管控制， 因此进样准确，重复性好，如图。
1. 影响分离的因素与提高柱效的途径
• 在高效液相色谱中, 液体的扩散系数仅为气体的万分之一 ，则速率方程中的分子扩散项B/U较小，可以忽略不计，即：
H=A+Cu 故液相色谱H-u曲线与气相色谱的形状不同，如图所示。
• 液体的黏度比气体大一百倍，密度为气体的一千倍，故 降低传质阻力是提高柱效主要途径。 • 由速率方程，降低固定相粒度可提高柱效。
1. 液-液分配及离子对分离固定相
（1）全多孔型担体 由氧化硅、氧化铝、硅藻土等制成的多孔球体；早期采
用100μm的大颗粒，表面涂渍固定液，性能不佳已不多见； 现采用10μm以下的小颗粒，化学键合制备柱填料；
（2）表面多孔型担体 （薄壳型微珠担体） 30～40 μ m的玻璃微球，
表面附着一层厚度为1 ～ 2μm的多孔硅胶。
二、高效液相色谱法的特点
feature of HPLC
特点：高压、高效、高速、高灵敏度 高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。
3-2 影响分离的因素
factors influenced separation
分配系数 K=组分在固定相中的浓度 /组分 在流动相中的浓度
=CS / CM
分配系数的差异是所有色谱分离的实 质性原因
GC与 HPLC选择： 小分子——热稳定性好——GC 大分子——热稳定性差——HPLC
GC优点：
tR 短 ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ 廉价 灵敏度高
一. HPLC法的分类
吸附色谱 l —s 离子交换色谱法
尺寸排阻色谱法 l — l 正向色谱
反向色谱 二. HPLC法的特点： 1. 高效分离 n =105 /米 2. 高速 使用高压泵，出峰时间几分钟到几十分钟 3. 高灵敏度 检测下限：10-9～10-13g（最小检测量） 4. 自动化程度高（仪器分析、电脑控制、色谱工作站） 5. 应用范围广 可测有机物75%～80%
气相色谱中的固定液原则上都可以用于液相色谱，其 选用原则与气相色谱一样。但在高效液相色谱中，分离柱 的制备是一项技术要求非常高的工作，一般很少自行制备。
高效液相色谱仪
由五大部分组成：高压输液系统
进样系统
分离系统
检侧系统
记录及数据处理系统
分析流程：
流动相贮液槽
压力表
流动相1 流动相2
馏分收集器
高压泵
原理
三、离子交换色谱
ion-exchange chromatograph
四、离子色谱
ion chromatograph
五、离子对色谱
ion-pair chromatograph
六、排阻色谱
basic principle and
size- exclusion chromatograph
七、亲和色谱(AC)
六、 排阻色谱
size- exclusion chromatography
固定相：凝胶(具有一定大小孔隙分布)；
原理：按分子大小分离。 小分子可以扩散到凝胶空隙， 由其中通过，出峰最慢；中等 分子只能通过部分凝胶空隙， 中速通过；而大分子被排斥在 外，出峰最快；溶剂分子小， 故在最后出峰。
全部在死体积前出峰； 可对相对分子质量在100105范围内的化合物按质量分离
main separating types Affinity chromatograph
一、 液-固吸附色谱
liquid-solid adsorption chromatography
固定相：固体吸附剂为，如硅胶、氧化铝等，较常使 用的是5～10μm的硅胶吸附剂；
流动相：各种不同极性的一元或多元溶剂。 基本原理：组分在固定相吸附剂上的吸附与解吸； 适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样，对具有 官能团的化合物和异构体有较高选择性； 缺点：非线形等温吸附常引起峰的拖尾；
性能：①有足够的压力 ②输出流量恒定，可调 ③输出压力平稳 ④泵室体积小 ⑤泵体抗腐蚀、耐酸
马达
密封
往复式拉动
机械往复柱塞泵示意图
到色谱柱 脉动阻 尼器 球阀
溶剂
2. 梯度洗脱装置
作用：将两种或两种以上溶剂按一定程序连续改变配比， 以改变流动相极性、离子强度、 PH值、提高分离效率。
低压梯度洗脱（常压混合，高压进柱，1个泵。）
二、 液-液分配色谱
liquid- liquid partition chromatography
固定相与流动相均为液体（互不相溶）； 基本原理：组分在固定相和流动相上的分配； 流动相：对于亲水性固定液，采用疏水性流动相，即流 动相的极性小于固定液的极性（正相 normal phase），反之 ，流动相的极性大于固定液的极性（反相 reverse phase）。 正相与反相的出峰顺序相反； 固定相：早期涂渍固定液，固定液流失，较少采用； 化学键合固定相：将各种不同基团通过化学反应键合到 硅胶（担体）表面的游离羟基上。C-18柱（反相柱）。
梯度洗 脱装置
进样器
色
谱
微机
柱
检测器
HPLC仪器详解
出口检查
储液瓶 分布器 过滤 2m
高压泵
脉流消除
入口检查
抽气
到检测器
分离柱
压力计
反压调节
注样阀
过滤器
一. 高压输液系统
1. 高压输液泵：恒压泵（流量随阻力变化重现性差）
恒流泵（多用）：往复式 注射式
作用：将流动相在高压下连 续不断地送入液路系统。
1. 载样管
图12-5 六通阀进样示意图 a．载样(样品进入定量管) b．倒阀(样品导入色谱柱)
1．定量管 2．样品进入口 3．流动相进口 4．色谱柱
装入样品
采样环
进样
进色谱柱
泵入溶剂 出口
三.分离系统：色谱柱 不锈钢 直型 分析：内径 2～6mm 长10～30cm 制备：内径 10～25mm 长15～50cm 恒温器：电热恒温装置（室温～150℃）
恒温水浴类套（70℃以下） 作用：保证分析时温度恒定，否则对tR影响较大
四. 检测系统
1. 紫外—可见光度检测器：
①固定波长：254nm ， 低压汞 灯。
②可调波长：190～800mm， UV 钨灯，氘灯。
③光电二极管矩阵检测器： 190～700nm。
接色谱柱 石英窗 光电倍增管
废液
光电二极管矩阵检测器特点： 灵敏度高、分辨率好、方便、快速、准确，可扫描得三维 流出曲线 紫外检测器的应用： 对紫外有吸收的组分，且吸光度与浓度成正比。 紫外检测器的特点：
三、 离子交换色谱
ion-exchange chromatography
固定相：阴离子离子交换树脂或阳离子离子交换树脂； 流动相：阴离子离子交换树脂作固定相，采用碱性水溶 液；阳离子离子交换树脂作固定相，采用酸性水溶液； 基本原理：组分在固定相上发生的反复离子交换反应； 组分与离子交换剂之间亲和力的大小与离子半径、电荷、存 在形式等有关。亲和力大，保留时间长； 阳离子交换：R—SO3H +M+ = R—SO3 M + H + 阴离子交换：R—NR4OH +X- = R—NR4 X + OH应用：离子及可离解的化合物，氨基酸、核酸等。
灵敏度高 最小检测浓度10-9g/ml 线性范围宽 对温度和流速不敏感，可进行梯度洗脱 应用范围广
皮质酮
可的松
氟美松
波长
快速扫描—光电二极管阵列（PDA）检测所获得的三维色谱-光谱图
2. 荧光检测器：多波长荧光检测器（滤光片） 荧光分光检测器（光栅分光）
氘灯作激发光源，波长范围250～600nm 应用：组分吸收一定波长紫外光后发射荧光的物 质，且荧光强度与浓度成正比。 特点：灵敏度更高 检测限10-12～10-13g/ml（灵敏 度比UV检测器高2~3个数量级）
• 液相色谱中，不可能通过 增加柱温来改善传质。恒温 • 改变淋洗液组成、极性是 改善分离的最直接的因素。
2.流速
流速大于0.5 cm/s时, H～u 曲线是一段斜率不大的直线。 降低流速，柱效提高不是很大。 但在实际操作中，流量仍是一 个调整分离度和出峰时间的重 要可选择参数。
3.固定相及分离柱
选择性好 对温度和流速不敏感，可进行梯度洗脱 所需试样量少，适于痕量分析 应用范围广 3、电化学检测器 电导、库仑、极谱、安培、电位等检测器。
一、液-固吸附色谱
liquid-solid adsorption chromatograph
二、液-液分配色谱
3-3 主要分离类型与 liquid- liquid partition chromatograph
可定量
仪器分析
HPLC与GC的比较
流动相 温度
GC g
高温
HPLC l
室温
组分
易挥发、热稳定性好
不受限制
可测有机物 20%
tR 灵敏度
1～30min 10-12～10-14g/ml
流出物 不易收集
75%～80% 1～60min 10-9～10-11g 易收集
HPLC 优点： 应用范围广，组分易回收
表面积小，柱容量底；
（3）化学键合固定相
化学键合固定相: 目前应用最广、性能最佳的固定相； a. 硅氧碳键型： ≡Si—O—C b. 硅氧硅碳键型：≡Si—O—Si — C
稳定，耐水、耐光、耐有机溶剂，应用最广； c. 硅碳键型： ≡Si—C d. 硅氮键型： ≡Si—N
化学键合固定相的特点
（1）传质快，表面无深凹陷，比一般液体固定相传质快； （2）寿命长，化学键合，无固定液流失，耐流动相冲击；
原理：将一种（或多种）与溶质离子电荷相反的离子（ 对离子或反离子）加到流动相中使其与溶质离子结合形成疏 水性离子对化合物，使其能够在两相之间进行分配；
阴离子分离：常采用烷基铵类，如氢氧化四丁基铵或氢 氧化十六烷基三甲铵作为对离子；
阳离子分离：常采用烷基磺酸类，如己烷磺酸钠作为对 离子；
反相离子对色谱：非极性的疏水固定相(C-18柱)，含有 对离子Y+的甲醇-水或乙腈-水作为流动相，试样离子X-进入 流动相后，生成疏水性离子对Y+ X -后；在两相间分配。
耐水、耐光、耐有机溶剂，稳定； （4）选择性好，可键合不同官能团，提高选择性； （5）有利于梯度洗脱；
存在着双重分离机制： (键合基团的覆盖率决定分离机理) 高覆盖率：分配为主； 低覆盖率：吸附为主；
七、 亲和色谱(AC)
Affinity chromatograph
原理：利用生物大分子和固定相表面存在的某种特异性 亲和力，进行选择性分离。
先在载体表面键合上一 种具有一般反应性能的所 谓间隔臂(环氧、联胺等)， 再连接上配基(酶、抗原等) ，这种固载化的配基将只 能和具有亲和力特性吸附 的生物大分子作用而被保 留。改变淋洗液后洗脱。
3-4 液相色谱的固定 相与流动相
stationary phase and mobile phase of HPLC
一、液相色谱固定相
stationary phase of HPLC
二、液相色谱流动相
mobile phase of HPLC
一、液相色谱固定相
stationary phases of LC
HPLC与LC的比较
柱径 颗粒 压力
LC 1 ～ 2cm 150 ～ 200µm 常压
HPLC 2 ～ 5mm 5 ～ 10 µm
高压
tR n 用途
1 ～ 20h 2 ～ 50 初步分离
1h内 105 / 米 高效分离、高灵敏度定量
装置 非仪器化
精密仪器，自动化.智能化
HPLC 优点： 柱效高
分析时间短
四、 离子色谱
ion chromatography
离子色谱是在20世纪70年代中期发展起来的一中技术， 其与离子交换色谱的区别是其采用了特制的、具有极低交换 容量的离子交换树脂作为柱填料，并采用淋洗液抑制技术和 电导检测器，是测定混合阴离子的有效方法。
五、 离子对色谱
ion pair chromatography
HPLC是60年代在GC和经典液相色谱基础上发展起来 的。
GC柱效高，且能分离、定量，但有些热稳定性差，不 易挥发的组分不能用GC直接分析，人们想到模仿GC，用细 颗粒固定相，薄壳固定液，以增加柱效。
模仿LC用液体作流动相，在室温下进行，但阻力太大， 液体流动相难以通过，所以又想到加高压泵，加快流动相流 速，这样即增加了柱效，又加快了分析速度，也拓宽了应用 范围，把柱子、高压泵、检测器配成仪器，就形成高效液相 色谱仪。
高压梯度洗脱（高压混合，高压进柱，2个泵。）
贮液槽1
贮液槽2
贮液槽1
贮液槽2
梯度洗脱装置 程序控制
高压泵1 高压泵2
混合室
高压泵
梯度洗脱装置
进柱
进柱
低压梯度洗脱
高压梯度洗脱
不易改变流动向配比,自动化程度低 随时改变流动向配比,自动化程度高
二.进样系统 注射进样：装置简单、死体积小。但进样量小且重现性差。 六通阀进样：目前最常用，由于进样量可由样品管控制， 因此进样准确，重复性好，如图。
1. 影响分离的因素与提高柱效的途径
• 在高效液相色谱中, 液体的扩散系数仅为气体的万分之一 ，则速率方程中的分子扩散项B/U较小，可以忽略不计，即：
H=A+Cu 故液相色谱H-u曲线与气相色谱的形状不同，如图所示。
• 液体的黏度比气体大一百倍，密度为气体的一千倍，故 降低传质阻力是提高柱效主要途径。 • 由速率方程，降低固定相粒度可提高柱效。
1. 液-液分配及离子对分离固定相
（1）全多孔型担体 由氧化硅、氧化铝、硅藻土等制成的多孔球体；早期采
用100μm的大颗粒，表面涂渍固定液，性能不佳已不多见； 现采用10μm以下的小颗粒，化学键合制备柱填料；
（2）表面多孔型担体 （薄壳型微珠担体） 30～40 μ m的玻璃微球，
表面附着一层厚度为1 ～ 2μm的多孔硅胶。
二、高效液相色谱法的特点
feature of HPLC
特点：高压、高效、高速、高灵敏度 高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。
3-2 影响分离的因素
factors influenced separation
分配系数 K=组分在固定相中的浓度 /组分 在流动相中的浓度
=CS / CM
分配系数的差异是所有色谱分离的实 质性原因
GC与 HPLC选择： 小分子——热稳定性好——GC 大分子——热稳定性差——HPLC
GC优点：
tR 短 ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ 廉价 灵敏度高
一. HPLC法的分类
吸附色谱 l —s 离子交换色谱法
尺寸排阻色谱法 l — l 正向色谱
反向色谱 二. HPLC法的特点： 1. 高效分离 n =105 /米 2. 高速 使用高压泵，出峰时间几分钟到几十分钟 3. 高灵敏度 检测下限：10-9～10-13g（最小检测量） 4. 自动化程度高（仪器分析、电脑控制、色谱工作站） 5. 应用范围广 可测有机物75%～80%
气相色谱中的固定液原则上都可以用于液相色谱，其 选用原则与气相色谱一样。但在高效液相色谱中，分离柱 的制备是一项技术要求非常高的工作，一般很少自行制备。
高效液相色谱仪
由五大部分组成：高压输液系统
进样系统
分离系统
检侧系统
记录及数据处理系统
分析流程：
流动相贮液槽
压力表
流动相1 流动相2
馏分收集器
高压泵
原理
三、离子交换色谱
ion-exchange chromatograph
四、离子色谱
ion chromatograph
五、离子对色谱
ion-pair chromatograph
六、排阻色谱
basic principle and
size- exclusion chromatograph
七、亲和色谱(AC)
六、 排阻色谱
size- exclusion chromatography
固定相：凝胶(具有一定大小孔隙分布)；
原理：按分子大小分离。 小分子可以扩散到凝胶空隙， 由其中通过，出峰最慢；中等 分子只能通过部分凝胶空隙， 中速通过；而大分子被排斥在 外，出峰最快；溶剂分子小， 故在最后出峰。
全部在死体积前出峰； 可对相对分子质量在100105范围内的化合物按质量分离
main separating types Affinity chromatograph
一、 液-固吸附色谱
liquid-solid adsorption chromatography
固定相：固体吸附剂为，如硅胶、氧化铝等，较常使 用的是5～10μm的硅胶吸附剂；
流动相：各种不同极性的一元或多元溶剂。 基本原理：组分在固定相吸附剂上的吸附与解吸； 适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样，对具有 官能团的化合物和异构体有较高选择性； 缺点：非线形等温吸附常引起峰的拖尾；
性能：①有足够的压力 ②输出流量恒定，可调 ③输出压力平稳 ④泵室体积小 ⑤泵体抗腐蚀、耐酸
马达
密封
往复式拉动
机械往复柱塞泵示意图
到色谱柱 脉动阻 尼器 球阀
溶剂
2. 梯度洗脱装置
作用：将两种或两种以上溶剂按一定程序连续改变配比， 以改变流动相极性、离子强度、 PH值、提高分离效率。
低压梯度洗脱（常压混合，高压进柱，1个泵。）
二、 液-液分配色谱
liquid- liquid partition chromatography
固定相与流动相均为液体（互不相溶）； 基本原理：组分在固定相和流动相上的分配； 流动相：对于亲水性固定液，采用疏水性流动相，即流 动相的极性小于固定液的极性（正相 normal phase），反之 ，流动相的极性大于固定液的极性（反相 reverse phase）。 正相与反相的出峰顺序相反； 固定相：早期涂渍固定液，固定液流失，较少采用； 化学键合固定相：将各种不同基团通过化学反应键合到 硅胶（担体）表面的游离羟基上。C-18柱（反相柱）。
梯度洗 脱装置
进样器
色
谱
微机
柱
检测器
HPLC仪器详解
出口检查
储液瓶 分布器 过滤 2m
高压泵
脉流消除
入口检查
抽气
到检测器
分离柱
压力计
反压调节
注样阀
过滤器
一. 高压输液系统
1. 高压输液泵：恒压泵（流量随阻力变化重现性差）
恒流泵（多用）：往复式 注射式
作用：将流动相在高压下连 续不断地送入液路系统。
1. 载样管
图12-5 六通阀进样示意图 a．载样(样品进入定量管) b．倒阀(样品导入色谱柱)
1．定量管 2．样品进入口 3．流动相进口 4．色谱柱
装入样品
采样环
进样
进色谱柱
泵入溶剂 出口
三.分离系统：色谱柱 不锈钢 直型 分析：内径 2～6mm 长10～30cm 制备：内径 10～25mm 长15～50cm 恒温器：电热恒温装置（室温～150℃）
恒温水浴类套（70℃以下） 作用：保证分析时温度恒定，否则对tR影响较大
四. 检测系统
1. 紫外—可见光度检测器：
①固定波长：254nm ， 低压汞 灯。
②可调波长：190～800mm， UV 钨灯，氘灯。
③光电二极管矩阵检测器： 190～700nm。
接色谱柱 石英窗 光电倍增管
废液
光电二极管矩阵检测器特点： 灵敏度高、分辨率好、方便、快速、准确，可扫描得三维 流出曲线 紫外检测器的应用： 对紫外有吸收的组分，且吸光度与浓度成正比。 紫外检测器的特点：
三、 离子交换色谱
ion-exchange chromatography
固定相：阴离子离子交换树脂或阳离子离子交换树脂； 流动相：阴离子离子交换树脂作固定相，采用碱性水溶 液；阳离子离子交换树脂作固定相，采用酸性水溶液； 基本原理：组分在固定相上发生的反复离子交换反应； 组分与离子交换剂之间亲和力的大小与离子半径、电荷、存 在形式等有关。亲和力大，保留时间长； 阳离子交换：R—SO3H +M+ = R—SO3 M + H + 阴离子交换：R—NR4OH +X- = R—NR4 X + OH应用：离子及可离解的化合物，氨基酸、核酸等。
灵敏度高 最小检测浓度10-9g/ml 线性范围宽 对温度和流速不敏感，可进行梯度洗脱 应用范围广
皮质酮
可的松
氟美松
波长
快速扫描—光电二极管阵列（PDA）检测所获得的三维色谱-光谱图
2. 荧光检测器：多波长荧光检测器（滤光片） 荧光分光检测器（光栅分光）
氘灯作激发光源，波长范围250～600nm 应用：组分吸收一定波长紫外光后发射荧光的物 质，且荧光强度与浓度成正比。 特点：灵敏度更高 检测限10-12～10-13g/ml（灵敏 度比UV检测器高2~3个数量级）
• 液相色谱中，不可能通过 增加柱温来改善传质。恒温 • 改变淋洗液组成、极性是 改善分离的最直接的因素。
2.流速
流速大于0.5 cm/s时, H～u 曲线是一段斜率不大的直线。 降低流速，柱效提高不是很大。 但在实际操作中，流量仍是一 个调整分离度和出峰时间的重 要可选择参数。
3.固定相及分离柱
选择性好 对温度和流速不敏感，可进行梯度洗脱 所需试样量少，适于痕量分析 应用范围广 3、电化学检测器 电导、库仑、极谱、安培、电位等检测器。
一、液-固吸附色谱
liquid-solid adsorption chromatograph
二、液-液分配色谱
3-3 主要分离类型与 liquid- liquid partition chromatograph
可定量
仪器分析
HPLC与GC的比较
流动相 温度
GC g
高温
HPLC l
室温
组分
易挥发、热稳定性好
不受限制
可测有机物 20%
tR 灵敏度
1～30min 10-12～10-14g/ml
流出物 不易收集
75%～80% 1～60min 10-9～10-11g 易收集
HPLC 优点： 应用范围广，组分易回收
表面积小，柱容量底；
（3）化学键合固定相
化学键合固定相: 目前应用最广、性能最佳的固定相； a. 硅氧碳键型： ≡Si—O—C b. 硅氧硅碳键型：≡Si—O—Si — C
稳定，耐水、耐光、耐有机溶剂，应用最广； c. 硅碳键型： ≡Si—C d. 硅氮键型： ≡Si—N
化学键合固定相的特点
（1）传质快，表面无深凹陷，比一般液体固定相传质快； （2）寿命长，化学键合，无固定液流失，耐流动相冲击；
原理：将一种（或多种）与溶质离子电荷相反的离子（ 对离子或反离子）加到流动相中使其与溶质离子结合形成疏 水性离子对化合物，使其能够在两相之间进行分配；
阴离子分离：常采用烷基铵类，如氢氧化四丁基铵或氢 氧化十六烷基三甲铵作为对离子；
阳离子分离：常采用烷基磺酸类，如己烷磺酸钠作为对 离子；
反相离子对色谱：非极性的疏水固定相(C-18柱)，含有 对离子Y+的甲醇-水或乙腈-水作为流动相，试样离子X-进入 流动相后，生成疏水性离子对Y+ X -后；在两相间分配。
耐水、耐光、耐有机溶剂，稳定； （4）选择性好，可键合不同官能团，提高选择性； （5）有利于梯度洗脱；
存在着双重分离机制： (键合基团的覆盖率决定分离机理) 高覆盖率：分配为主； 低覆盖率：吸附为主；
七、 亲和色谱(AC)
Affinity chromatograph
原理：利用生物大分子和固定相表面存在的某种特异性 亲和力，进行选择性分离。
先在载体表面键合上一 种具有一般反应性能的所 谓间隔臂(环氧、联胺等)， 再连接上配基(酶、抗原等) ，这种固载化的配基将只 能和具有亲和力特性吸附 的生物大分子作用而被保 留。改变淋洗液后洗脱。
3-4 液相色谱的固定 相与流动相
stationary phase and mobile phase of HPLC
一、液相色谱固定相
stationary phase of HPLC
二、液相色谱流动相
mobile phase of HPLC
一、液相色谱固定相
stationary phases of LC
HPLC与LC的比较
柱径 颗粒 压力
LC 1 ～ 2cm 150 ～ 200µm 常压
HPLC 2 ～ 5mm 5 ～ 10 µm
高压
tR n 用途
1 ～ 20h 2 ～ 50 初步分离
1h内 105 / 米 高效分离、高灵敏度定量
装置 非仪器化
精密仪器，自动化.智能化
HPLC 优点： 柱效高
分析时间短
四、 离子色谱
ion chromatography
离子色谱是在20世纪70年代中期发展起来的一中技术， 其与离子交换色谱的区别是其采用了特制的、具有极低交换 容量的离子交换树脂作为柱填料，并采用淋洗液抑制技术和 电导检测器，是测定混合阴离子的有效方法。
五、 离子对色谱
ion pair chromatography