干扰素2α治疗Ph+慢性粒细胞白血病的细胞遗传学反应分析

文章编号(Article ID):1009-2137(2003)03-0269-05·论著·干扰素2α治疗Ph+慢性粒细胞白血病的
细胞遗传学反应分析
洪　虹,丘镜滢,赖悦云,师　岩,何　琦,党　辉,陆道培
北京大学人民医院、血液病研究所细胞遗传室,北京100044
摘要 为了研究慢性粒细胞白血病(CML)慢性期患者应用干扰素2α(IFN2α)治疗后细胞遗传学疗效及其影响预后的因素,对我院10年来128例CML慢性期患者单用IFN2α或联用化疗药物后细胞遗传学变化、核型演变及与临床有关特征的关系进行了回顾性分析。

核型分析全部应用G2显带,部分联合应用荧光染色体原位杂交技术检测。

结果表明:①所有患者均获血液学缓解。

②118例Ph染色体标准易位患者中36例(30.8%)获细胞遗传学反应,其中20例(17.1%)Ph染色体仍>35%,13例(11.1%)Ph染色体<35%,3例(215%)Ph染色体为0,达完全细胞遗传学缓解,细胞遗传学有效应者共16例(13.6%)。

③7例复杂变异易位患者中4例获细胞遗传学反应,其中2例(14.3%)Ph染色体>35%,2例(14.3%)Ph染色体<35%,无1例Ph染色体为0;3例简单变异易位患者无1例获细胞遗传学疗效。

④IFN2α治疗后影响细胞遗传学疗效的因素有:性别、初诊病情、IFN2α是否联用其他化疗药物及是否持续治疗。

⑤IFN2α治疗并不能防止CML疾病进展。

结论:①每周IFN2α600-900万U单用或联合Bu/Hu可使11.1%的标准易位和少数复杂变异易位Ph+CML患者获主要细胞遗传学效应,但不能防止疾病进展;
②Ph变异易位并不预示IFN2α疗效不佳;③细胞遗传学监测有益于反映疗效与疾病进展,应定期监测。

关键词 慢性粒细胞白血病;干扰素2α;细胞遗传学反应
中图分类号 R733172文献标识码 A
Analysis of Cytogenetic R esponse in Ph+Chronic Myeloid Leukemia
Patients T reated with Interferonα
HON G Hong,Q IU Jing2Y ing,LA I Yue2Yun,SHI Yan,HE Qi,DAN G Hui,L U Dao2Pei
Depart ment of Cytogenetics,Instit ute of Hematology and People′s Hospital,Peki ng U niversity,Beiji ng100044,Chi na
Abstract Ph chromosome occurs in nearly all patients with CML,and eliminating Ph2positive clone is a major target in the treatment of CML.IFN2αis a well2known effective treatment in chronic phase CML.The cytogenetic response and the prognostic factors in128CML patients treated with IFN2αwere retros pectively studied.IFN2αadminestered singly at
a dose of3million U/day for2-3times a week or in combination with either hydroxyurea(Hu),busulfan(Bu),low
dose Ara2C or harringtonine.K aryotyping was examined by G2banding before and after IFN2α2based treatment.The results showed that all patients achieved complete hematological remission.Cytogenetic response occurred in36of118 patients with standard t(9;22)translocation;3of these36patients had a complete cytogenetic response(Ph=0),13had major cytogenetic responses(Ph<35%)and20had minmal res ponse(Ph>35%).The total cytogenetic effectiveness was13.6%(16/118).Four of seven patients with complicated variant translocation also achieved cytogenetic response,2 of them had a major cytogenetic response and2had minmal res ponse.Factors influenced the prognosis associated with cytogentic response included sex,patient status at diagnosis and IFN2αadministered singly or in combination with other chemotherapeutic agents.IFN2αcould not prevent the progression of CML.It is concluded that Ph+CML patients with both standard and variant translocation had ma jor cytogenetic response to IFN2αtreatment at a dose of6-9million U/
week in single or combination with Hu/Bu,however,IFN2αtreatment could not prevent disease progression.Long term suvival was also observed in patients with variant translocation treated with IFN2α.Regular cytogenesis examination in CML patients is necessary during IFN2αtherapy,which is useful to reflect curative effect and progression of the disease.
K ey w ords chronic myeloid leukemia;interferon2α;cytogenetic response
J Ex p Hem atol2003;11(3):269-273
慢性粒细胞白血病(CML)是一种起源于造血干细胞的恶性克隆性疾患,95%的CML患者具有特征性细胞遗传学改变———Ph染色体,由t(9;22)易位形成[1],Ph染色体的存在是CML发生、发展及急变的根源,因此治疗目标应致力于清除Ph染色体。

通讯作者:丘镜滢,教授.电话:(010)68792782
2003-02-25收稿;2003-04-11接受
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中国实验血液学杂志　Journal of Ex perimental Hem atology2003;11(3):269-273
业已证明,γ2干扰素(IFN2α)治疗可使部分CML患者Ph染色体阳性的细胞克隆减少和消失,延长CML慢性期,平均生存期延长约1年,是无条件行异基因造血干细胞移植患者的主要治疗方法[2]。

本研究对128例CML慢性期患者应用IFN2α治疗后临床疗效、细胞遗传学改变情况及其影响因素进行分析。

材料与方法
病例
自1992年1月至2001年5月于北京大学血液病研究所接受IFN2α治疗并在治疗后至少行1次染色体检查的128例Ph+CML慢性期患者,男92例,女36例,男∶女比为2.56∶1。

患者年龄<35岁63例,年龄>60岁患者10例,平均年龄38.81±1.13(18 -78)岁。

CML慢性期诊断标准参照张之南等《血液病诊断及疗效标准》[3]。

治疗
128例患者中63例在应用IFN2α前先应用羟基脲(hydroxyurea,Hu)、马利兰(bulsufan,Bu)、小剂量阿糖胞苷、靛玉红或柔红霉素+阿糖胞苷、高三尖杉酯碱+阿糖胞苷等化疗方案的治疗,IFN2α治疗前病程平均为8.07±1.45(1-96)月,其余65例在明确诊断后即开始应用IFN2α治疗。

128例患者中19例单用IFN2α治疗,其余患者均采用IN F2α与Hu 或Bu等联用。

128例中51例采用IFN2α2b治疗(Intron2A,Sherin Bongh/Sandoz),6例采用IFN2α2a治疗(Roferon2A,Roche),9例采用国产制剂,其中5例采用IFN2α(成都生物制品研究所),2例用IFN2α(武汉生物制品研究所),2例用IFN2α1b治疗(深圳科兴生物药业),余62例患者均曾使用2个或2个以上厂家的IFN2α。

绝大多数患者IFN2α应用剂量为每次300万U,2-3次/周,128例患者平均IFN2α治疗时间为18109±1.85(3-128)个月。

染色体制备及分析
采用本室以往报道的骨髓细胞短期培养法和G2显带技术进行核型检测,部分联合应用荧光染色体原位杂交技术[4]。

根据《人类细胞遗传学国际命名体制(ISCN1995)》进行核型分析及异常克隆定义[5],每份标本至少分析20个分裂相。

细胞遗传学反应评价标准
参照张之南等《血液病诊断及疗效标准》[3]。

无细
胞遗传学反应:Ph染色体持续存在于所有分析的中期分裂相中。

微小细胞遗传学反应:Ph染色体占分析的中期分裂相的比例35%-95%。

主要细胞遗传学反应:Ph染色体占分析的中期分裂相的1%-34%。

完全细胞遗传学反应:所分析的中期分裂相皆未见Ph染色体。

按国际文献惯例,获完全或主要细胞遗传学反应的患者为有细胞遗传学疗效,Ph染色体≥35%的患者均为无细胞遗传学疗效[6],本文亦采用此标准。

统计学分析
χ2分析、独立样本t检验及二阶多因素回归分析。

P值小于0.05时统计学意义具有显著性。

结 果
血液学疗效
128例患者经IFN2α单用或联用Hu或Bu或其他药物后血像控制在正常范围,脾脏回缩至正常,除36例获细胞遗传学反应,其余患者外周血仍时可见极少量(<3%)中晚幼粒细胞。

细胞遗传学疗效及其影响因素
治疗前128例患者中有标准t(9;22)易位的118例(92.8%),变异易位10例(6.2%)。

标准易位患者IFN2α疗效　118例标准易位患者临床情况见表1。

118例患者中36例(30.8%)有细胞遗传学反应,男性占32例,女性4例,中位年龄35 (18-78)岁,平均IFN2α治疗时间为18.43±3.44 (1-86)个月。

36例中14例起病即开始IFN2α治疗,22例平均起病后6.24±1.53(1-24)个月开始IFN2α治疗。

36例中9例为单用IFN2α,余27例为IFN2α与Hu或Bu等联用。

36例患者中20例(17.1%)为微小细胞遗传学反应(Ph染色体≥35%),13例(11.1%)为主要细胞遗传学反应(Ph染色体为1%-35%),3例(215%)完全细胞遗传学反应(Ph染色体=0)。

共16例(13.6%)患者获细胞遗传学疗效,其中8例在IFN2α治疗6月后即获细胞遗传学疗效,3例在治疗6-12月时获细胞遗传学疗效,4例在IFN2α治疗12月时已有微小细胞遗传学反应,分别在治疗后18,34,47和70个月达主要细胞遗传学反应,1例患者在IFN2α治疗12个月时曾检查骨髓染色体仍Ph 染色体占100%,36个月时骨髓染色体检查为主要细胞遗传学反应。

3例完全细胞遗传学缓解者分别
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T able1　Clinical features of Ph+CML patients with stand ard translocation
Item
Cytogenetic response Responder Non2responder
sex
Male(case)1368 Female(case)334 age
<35(case)1051 35-60(case)543 >60(case)18
WBC(×109/L)111.5±24.3
(13.6-260.0)
197.3±23.4 (13.9-976.0)
Spleen(cm) 5.8±1.0
(0-10.0)8.1±0.8 (0-23.0)
Interval between diagnosis and IFN2αtreatment (month)3.2±1.7
(0-24)
3.9±1.0
(0-54)
Duration of IFN2αtherapy (month)27.6±7.9
(1-86)
16.4±3.1
(3-128)
Prior therapy
none758
Hu349
Bu58
Hu+Bu113
IFN2αtreatment
Single415
Combined1287
K ind of IFN2α
Domestic36
Imported1344
WBC:initial WBC count at diagnosis without treatment.Spleen:size of spleen at diagnosis without treatment.Responder:patients with major and complete cytogenetic effectiveness.Non2responder:patients with no or minor cytogenetic effectiveness
在IFN2α治疗后3,34和47个月达完全遗传学反应。

13例主要细胞遗传学反应的患者中5例在IFN2α减量维持过程中Ph阴性细胞的比例减少或消失。

获微小细胞遗传学反应、主要细胞遗传学反应和完全细胞遗传学反应患者间的年龄、初诊时白细胞计数、脾脏大小、开始应用IFN2α之前病程、IFN2α制剂种类、疗程及单用或联用IFN2α统计学均无显著差异(P>0.05)。

变异易位患者IFN2α疗效　在IFN2α治疗前10例t(9;22)变异易位患者中7例为复杂变异易位,3例为简单变异易位(临床及核型情况见表2),均为男性,平均年龄3813±310(19-54)岁,平均IFN2α治疗时间36.0±10.2(3-88)月,平均随访时间为4016±9.7(5-88)月。

10例患者中5例(4例复杂变异易位,1例简单变异易位)起病即开始IFN2α治疗,5例平均起病后5.6±1.7(2-12)个月开始IFN2α治疗。

10例中除1例复杂变异易位患者为单用IFN2α治疗,余8例均为与化疗联用。

7例复杂变异易位患者中4例IFN2α治疗后获细胞遗传学反应,其中2例为微小细胞遗传学反应, Ph染色体分别为82%和72%;2例为主要细胞遗传学反应,Ph染色体分别为20%和5%。

IFN2α治疗细胞遗传学有效应率为28.6%(2/7)。

3例简单易位患者均无细胞遗传学反应。

细胞遗传学疗效的影响因素　9例单纯应用国产IFN2α治疗的患者中2例(22.2%)有细胞遗传学效应,57例仅应用进口IFN2α的患者中9例(15.8%)有细胞遗传学效应,提示国产IFN2α治疗同样可获细胞遗传学疗效。

多因素分析提示IFN2α治疗细胞遗传学有效的有利因素依次为:男性、初诊时白细胞计数低、初诊时脾脏不大、IFN2α治疗时联用其他化疗药物及IFN2α疗程长。

年龄、开始应用IFN2α之前病程及IFN2α类型不影响细胞遗传学疗效。

附加异常染色体　18例(15.4%)标准易位患者在IFN2α治疗后发现附加异常,平均年龄4014±310 (27-61)岁,附加异常平均发现时间为16.7±2.5 (4-36)月(表3)。

18例患者中除1例IFN2α治疗获主要细胞遗传学反应外,余患者均无细胞遗传学反应。

附加异常常涉及8号,17号,21号及双Ph 染色体,而19号,15号及9号染色体间或异常。

3例出现8号染色体异常的患者中1例为i(8q),发现异常时病情已进展为急性髓性白血病;1例出现染色体异常时的骨髓情况不详;1例在IFN2α治疗18个月时染色体检查Ph染色体占19%,治疗24个月时Ph染色体占56%,且部分阳性核型中出现+8异常(占4%),此后虽加大IFN2α应用剂量仍Ph染色体核型比例递增,治疗106个月时Ph阴性核型完全消失,阳性核型中除+8外尚出现+Ph异常,病情进展为急性髓性白血病。

3例出现双Ph染色体的患者1例失访,1例在染色体检查出现异常后的2月急变,1例在IFN2α治疗12个月时出现双Ph染色体(占11.5%),治疗42个月时发生急变,核型极复杂,其间两次复查染色体可供分析的分裂相数目分别为13和14个,未达核型分析标准,故虽未见双Ph,仍不能判定双Ph 克隆的比例。

4例涉及17号染色体异常的患者中1例17p+患者失访,1例17p+及1例i(17q)的患者发现附加
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干扰素2α治疗Ph+慢性粒细胞白血病的细胞遗传学反应分析
T able2　Clinical features of10male Ph+CML patients with variant translocation
Case No.Age PCR FISH WBC
(×109/L)
Spleen
(cm)
Course before
IFN2α
(month)
Duration
of IFN2α
(month)
In combination
with Hu
Intermittent
chemotherapy
K aryotype
pretherapy
Ph-rate
after therapy
(%)
Follow2up
status
140(+)3485076yes yes t(9;13;22)0STI571 236(+)036yes no t(1;9;22)18Lost 345012yes no t(9;15;22)80Lost 419(+)(+)2444422no yes t(6;9;22)95STI571 53859.215125yes no t(18;22)0SCT 6435702047yes yes t(2;22)0Lost 741(+)3606088yes yes t(21;22)0STI571 838038yes no t(9;11;22)28AML 92923no no t(9;11;22)0SCT 1054(+)(+)39.85673yes yes t(9;9;22)0STI571 PCR:detection of bcr/abl RNA by PCR.FISH:detection of t(9;22)by FISH.WBC:initial WBC count at diagnosis without treatment.Spleen:ini2 tial size of spleen at diagnosis without treatment.Course before IFN2α:interval between diagnosis and IFN2αtreatment.STI671:accept STI571treat2 ment.SCT:accept stem cell transplantation
T able3　The additional chromosome abnormality of t(9;22)in patients after IFN2αtreatment
Case No.Sex Age Duration of
IFN2α
therapy
(month)
Additional karyotype WBC
count
(109/L)
Blast in
bone
marrow
(%)
Follow2up
status
1m351517p+(-)△(-)Lost 2f293621p+7.5(-)(-) 3f4912+8,+1914.6(-)(-) 4m352413p+,15p+(-)(-)Lost 5f611512p- 5.34AP 6f3434-18,-22,17p+,+Ph9.810AP 7f5614+Ph10.62AP 8m3036+Ph(-)(-)Lost 9m334t(13;14)(p11;q11) 5.7 3.5SCT 10#f286t(15;17) 5.32SCT 11f3916t(9;8;21;22)(q34;q21;q11;q11) 4.7 2.5SCT 12m3615i(21q)12.57.5AP 13m4167q-,i(17q)69.216AP 14m641219p+14.6 4.5AP 15m3399q+,15q-55.010AP 16f4816-6,i(8q),21q+113.0　35BC 17f5621+8 5.62AP 18m27133p-16.79.5AP #:The translocation is verified by chromosome9,15and22probe.△(-):no data.AP:accelerated phase.BC:blast crisis
异常时白细胞计数明显上升,分别在1和3个月后病情发展为急性髓性白血病;1例t(15;17)患者发现附加时血像及骨髓像均正常,随后接受异基因造血干细胞移植。

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讨 论
自1981年Talpaz首次将白细胞纯化的IFN2α应用于CML患者,并证明其血液学及细胞遗传学疗效以来,IFN2α成为CML的主要治疗手段之一,文献报道细胞遗传学有效率20%-50%左右[7]。

由于各家报道中IFN2α应用剂量及调整剂量标准不同,报道的IFN2α的细胞遗传学效应率亦有不同,大宗病例疗效总结中以Mahon等[8]报道为最高,其IFN2α初始应用剂量为500万U/(m2·d),调整剂量至维持白细胞计数在(1.5-5)×109/L。

本研究细胞遗传学反应率低,可能由于IFN2α应用剂量偏小、白细胞控制标准低,以致疗效不如国外显著的缘故。

国外一般认为IFN2α每日用量应≥500万U,本研究证明每周用量600-900万U单用或联合Bu/Hu 可使11.1%的Ph+CML患者获细胞遗传学效应,低于文献报道,但也提示低剂量IFN2α仍可使部分病人获细胞遗传学效应[9]。

Mahon等[8]提出IFN2α治疗3个月后,如骨髓Ph染色体阴性核型比例增加,则提示IFN2α治疗细胞遗传学有效的可能性大。

本研究发现大部分患者(15/16)在IFN2α治疗12月内即出现主要或完全细胞遗传学反应,与Mahon等的观察结果相似。

我们同时也观察到IFN2α减量后细胞遗传学疗效减少或消失的现象,说明IFN2α需长期应用。

进口IFN2α价格明显高于国产,本研究中单独应用国产IFN2α的病例不多,但发现单纯应用国产IFN2α也可获细胞遗传学疗效。

我们在IFN2α治疗有效及无效的患者中均观察到附加异常的出现,且均为CML患者进入加速期或急变期时常见的细胞遗传学异常[10],符合一般概念[11](邱镜滢,洪波,党辉等,450例慢性髓性白血病核型及变异Ph易位的研究。

中韩国际学术交流汇编,1995),说明IFN2α治疗并不能防止CML急变。

我们也观察到出现附加异常时异常比例不高,血像及骨髓像均正常,继续坚持IFN2α治疗,有加速期较长的现象,但例数偏少,尚不能说明加速期早期患者继续IFN2α治疗能延长生存期。

我们观察到7例Ph染色体复杂变异易位患者中2例获主要细胞遗传学反应,2例获微小细胞遗传学反应,这说明Ph染色体复杂变异易位并非预示IFN2α疗效不佳。

参考文献
1Rowley JD.A new consistent chromosomal abnormality in chronic myelogenous leukemia identified by quinacrine fluorescence and
G iemsa staining.Nature,1973;243:290-293
2The European Study Group on Interferon in Chronic Myeloid Leukemia.Chronic myeloid leukemia and interferon2α:a study of complete cytogenetic responders.Blood,2001;98:3074-3081
3张之南,沈　悌.《血液病诊断及疗效标准》第二版.北京:科学出版社,1998:162-258
4邱镜滢,段爱君,党　辉等,自体血浆培养体系对改善白血病细胞染色体的研究.北京医科大学学报,1993;25:249-251
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7Hochhaus A,Reiter A,Saussele S,et al.Molecular heterogeneity in complete cytogenetic responders after interferonαtherapy for chronic myelogenous leukemia:low levels of minimal residual disease are associated with continuing remission.G erman CML Group and the U K MRC CML Study Group.Blood,2000;95:62-65
8Mahon FX,Faberes C,Pueyo S,et al.Response at three months is
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leukemia patients treated by recombinant interferonα.Blood,1998;
92:4059-4065
9Anonymous.Randomized study on hydroxyurea alone versus hy2 droxyurea combined with low2dose interferon22b for chronic myeloid leukemia.The Benelux CML Study Group.Blood,1998;91:2713 -2721
10Majlis A,Smith T,Talpaz M,et al.Significance of cytogenetic clonal evolution in chronic myelogenous leukemia.J Clin Oncol, 1996;14:196-203
11Johansson B,Fioretos T,Billstr^o m R,et al.Aberrant cytogenetic evolution pattern of Philadelphia2positive chronic myeloid leukemia treated with interferonα.Leukemia,1996;10:1134-1138
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