克隆抗体的制备过程
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克隆抗体的制备过程
克隆抗体是一种由单一克隆细胞产生的抗体,具有高度的特异性和亲和力。
该技术可
以将体内产生的单一种抗体经过克隆扩增,制备大量的同种类抗体,用于生物学和医学等
领域的研究应用,所以得到了广泛的应用和重视。
1.抗原制备
首先,需要获得目标分子或细胞的抗原物质。
抗原分子可以是蛋白质、多肽、碳水化
合物、病毒、细菌、真菌等。
通常,将目标分子充分提取和纯化,以获得高质量的抗原,
从而提高制备抗体的效率。
2.免疫动物
选取适当的动物,例如小鼠、大鼠、兔子、鸭子等,根据抗原物质的不同,选择适当
的动物种类作为抗原注射对象。
在注射之前应先进行动物预处理,使其免疫系统处于兴奋
状态;然后再将纯化的抗原注射到动物体内,以诱导免疫系统产生相应的抗体。
3.获得抗血清
等待动物产生抗体所需要的时间因动物种类及抗原物质的不同而异,通常需要等待
4-8周。
收集动物体内的抗血清,在离心后将清澈的血清收集放置于取代的杯子内备用。
4.制备抗体细胞
从动物获得的抗体血清中,分离单一种抗体细胞,可以使用选择性培养基、差速离心
等方法来实现。
这样可以得到一个细胞克隆,它们能够制造特异的克隆抗体。
5.细胞培养和收获抗体
将细胞进行扩增,并在培养基中提供充足的营养,以促进细胞生长和分裂。
通过特殊
方法,可使细胞分泌大量的单克隆抗体。
然后,从培养液中收回分泌单克隆抗体的细胞,
分离和纯化抗体,去除污染并提高抗体的纯度。
6.检测抗体的特异性和亲和力
检测克隆抗体的特异性和亲和力,通常采用免疫学技术,例如EIA、西方免疫印迹等。
通过这些技术能够确定克隆抗体的特异性和亲和力,保证其质量和稳定性,从而更有效地
实现其研究和应用。