Expi293F表达重组鲎C因子用于荧光法内毒素检测

Expi293F表达重组鲎C因子用于荧光法内毒素检测
柯文锋;李诗洁;郑梦林;白仲虎;杨艳坤
【期刊名称】《食品与发酵工业》
【年(卷),期】2024(50)2
【摘要】鲎C因子是一种对痕量内毒素高度敏感的丝氨酸蛋白酶原,在医药行业可替代鲎试剂用于内毒素检测。

然而其重组表达困难,且对于环境中内毒素的控制要求极高。

该文首先克隆了来源于东方鲎的全长C因子,并在N末端和C末端分别添加了Flag标签和6×His标签,同时用哺乳细胞表达载体中的分泌信号肽替换掉了原始C因子信号肽。

构建好的重组质粒转染至人胚胎肾脏细胞Expi293F悬浮培养7 d后收获上清液,Western Blot检测蛋白与预测大小128 kDa一致,具有与内毒素结合以及结合后切割荧光底物的能力。

该研究首次在人胚胎肾脏细胞Expi293F 中成功表达出具有生物学活性的全长C因子,表达量达到19.18 mg/L,比DING在昆虫细胞SF9中的表达量提高了113%。

该方法对于后续开发低成本内毒素检测试剂盒具有指导意义。

【总页数】6页(P106-111)
【作者】柯文锋;李诗洁;郑梦林;白仲虎;杨艳坤
【作者单位】江南大学;江南大学;江苏省生物活性制品加工工程技术研究中心【正文语种】中文
【中图分类】R73
【相关文献】
1.特异性鲎试剂和普通鲎试剂用于大输液中细菌内毒素检测的对比
2.重组C因子细菌内毒素检测法应用于医疗器械的建议
3.基因重组鲎试剂检测促肝细胞生长素注射液中细菌内毒素含量适用性研究
4.重组C因子法用于维生素B_(6)注射液细菌内毒素检测的研究
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。