肺血栓栓塞动物模型研究进展
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目前，通常用于制备肺血栓栓塞模型的动物有 羊、猪和犬等体型较大的动物【ｌ’２１及兔、大鼠和小鼠 等体型较小的动物Ｌ３－引。用大体型动物作模型，优势 在于操作相对方便，便于观测，模型成功率高，易于 复制。此类模型多用于血液动力学研究，但由于实 验成本昂贵、不易饲养、后期实验相关试剂选择范围 较窄等缺点而不便进一步推广。
小体型动物中，大鼠血压和人接近，对急性缺 血、低氧的耐受性强，易于饲养，适用于大规模样本 的实验研究和相关的生化指标检测。而且随着实验 水平的提高，现已经能成功测定大鼠肺动脉压，可以 对血栓栓塞引起的肺动脉高压进行很好的评价，因 此逐渐成为科学实验中较为常用的肺血栓栓塞模 型。小体型动物中，小鼠体型相对较小，费用低廉， 取材方便，无需多人合作，在大规模样本的实验研究 中，尤其是药理及药效学的研究方面更具优势。但 是小鼠对肺血栓栓塞的耐受性相对较差，实验操作 难度较高，所以有关小鼠肺血栓栓塞模型的建立与
·１４０·
国际呼吸杂志２００９年１１月第２９卷第２２期Ｉｎｔ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ ２００９．Ｖ０１．２９．Ｎｏ．２２
影像学诊断方面的研究，用此种方法建立的动物模 型生存时间相对较长，存活率较高，但是模型本身缺 乏血栓形成的易患因素，仍有不足之处［１ ７｜。
肺栓塞模型的插管主要采用经股静脉和经颈静 脉两种途径。临床上肺血栓栓塞的血栓有８０％来源 于下肢静脉［１ ８｜，从股静脉注入栓子可制备模型。近 来多选用颈静脉作为插管位置是因为靠近心脏，栓 子运行的路径短，栓子进入右心房更容易，而且破碎 的机会相对较少，提高了造模成功率，增强了实验的 可控性‘＂］。 ３不同类型小动物肺血栓栓塞模型的制备方法 ３．１小鼠肺血栓栓塞模型 ３．１．１局部诱导血栓形成法 利用血栓诱导剂注 射于体内某一血管中，造成血栓形成【１ ７｜。常采用颈 静脉注射血栓诱导剂，主要有３类血栓诱导剂：肾ｔ 腺素＋胶原（胶原１．２５ ｍｇ／ｋｇ＋肾上腺素 ０．０５ ｍｇ／ｋｇ）［１９３；二磷酸腺苷（二磷酸腺苷 ０．２５ ｍｇ／ｋｇ）［１９ ３；凝血酶（凝血酶１ ０００ Ｕ／ｋｇ）心…。 这３类血栓诱导剂均能促进哑小板的聚集并使纤维 蛋白原聚合为纤维蛋白，进而导致血栓形成１２¨。利 用胶原＋肾上腺素注射制备的肺血栓栓塞小鼠模 型，可见有近一半的肺部毛细血管内形成微血栓；而 注射二磷酸腺苷制备的肺血栓栓塞小鼠模型可在相 当于１／４的肺部毛细血管见到微血栓；注射凝血酶 的小鼠模型则肺部几乎每个毛细血管内都有微血栓 形成口引。局部诱导血栓形成法制备模型简单易行， 费用低廉，可用于大规模样本的实验研究，尤其是药 物对肺栓塞模型的影响及其保护率。其优点是可模 拟血栓形成时机体的高凝状态，但用该方法制成的 小鼠肺栓塞模型生存时Ｉ＇ｕ】短，死亡率高。原因是一 方面由于血栓诱导剂引起血管收缩导致呼吸被阻 断，易引起动物死亡或麻痹，另一方面由于循环血流 中的血小板发生聚集，聚集的血小板进一步释放一 系列活性物质如血栓素Ａｚ和前列腺索２ａ，另外血 栓诱导剂还能使肺部血管进一步收缩，加重呼吸障 碍，引起动物死亡Ⅲ。２。朋］。 ３．１．２体外栓子注入法小鼠尾静脉取血，室温下 凝固，置于６０℃水浴箱中温浴１０ ｍｉｎ。将自体血栓 凝块转移至无菌玻璃研磨器中制备成自体血凝块， 并研磨成均匀的细小颗粒备用，或尾静脉取血后离 心取血浆，加入凝血酶，制成自体栓子，行颈内静脉 注射，造成血管功能状态及血流状态的改变，模拟人
局部诱导血栓形成法是指在血管内（包括颈静 脉、股静脉、腔静脉、肺动脉等）通过不同方法刺激并 诱导原位血栓形成。主要有：①机械性损伤法，即用 微型刮匙搔刮血管内膜或用球囊剥脱血管内皮凹。１…。 ②电流损伤法，即用电刺激破坏局部血管［１¨２１。③ 结扎法，即结扎静脉后引起局部血流淤滞、低 氧［Ｉ争１４］。通过以上方法刺激局部血管内膜，造成血 管内膜的损伤及血流动力学的改变，激活凝血系统， 模拟血栓形成时机体的高凝状态，促使血小板黏附 聚集导致血栓形成。④直接注入诱导剂如凝血酶、 肾上腺素＋胶原、二磷酸腺苷等，促进纤维蛋白的形 成和血小板的凝集，释放一系列活性物质，诱导局部 血栓形成，血栓形成后通过血流阻塞肺动脉血管，形 成肺栓塞ｒ１５－ｔ６１。该模型操作步骤简单易行，费用低 廉，适用于大规模样本的实验研究，尤其是药物对肺 栓塞模型的影响及其保护率［３］。
万方数据
应用进展相对缓慢。然而小鼠具有完备的基因组数 据库和蛋白质组数据库邱］，便于今后基因序列和蛋 白质组学方面的研究，而且通过基因敲除的小鼠模 型更便于深刻探讨疾病的病因、病理和发生发展的 过程，因此小鼠模型具有相当广泛的开发与应用 前景。 ２肺血栓栓塞动物模型制备的常用方法
目前文献报道的肺血栓栓塞动物模型的常用制 备方法主要有２种，即体内局部诱导血栓形成法和 体外栓子注入法。
Ｉ）Ｏｌ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３—４３８Ｘ．２００９．０２２．０１５ 基金项目：国家自然科学基金资助项目（３０７７０９４０） 作者单位：１０００２０首都医科大学附属北京朝阳医院北京呼吸 疾病研究所（缪冉．王辰，庞宦森）；１０００６９北京，首都医科大学基 础医学院生理学教研室（王军） 通信作者：王军．Ｅｍａｉｌ：ｗａｒｇＪｕｎ＠ＣＣｌＴＩｔｌ．ｅｄｕ．ｃｎ
垦堕唑咝盘查！！！！堡！！旦箜！！鲞笙！！塑 ！！！』墨！！垡！！塑！！！巴生！！！！！！！！！：！！！盟！：；！
·继续医学教育．
肺血栓栓塞动物模型研究进展
缪冉 王军 王辰 庞宝森
肺血栓栓塞症是指深静脉系统或右心内形成的 血栓脱落堵塞于肺动脉或其分支，继而引起肺循环 和呼吸功能障碍的临床和病理生理综合征。该病发 病率、漏诊率、致死率均较高，是肺部疾患中最常见 的死亡原因，严重威胁着人类的生命和健康。为了 更好地深入研究其病理生理特点，完善诊断技术和 治疗方法，建立操作简单、成功率高、价格低廉且实 用的实验动物模型就显得十分重要。本文就近年文 献报道的较为常用的肺血栓栓塞动物模型加以 综述。 １肺血栓栓塞动物模型种类
体外栓子注入法是在体外制备血凝块或者其他 类型的栓子，然后将其注入静脉系统或者右心房，栓 子通过血液循环随机栓塞于肺动脉，形成肺栓塞模 型。其中制备血凝块血栓可以是来源动物自身的全 血凝固，这种栓子富含血小板、纤维蛋白和红细胞 等，符合栓塞时病理生理改变。或者取动物自身血 浆，加入凝血酶，凝固形成白色血栓，此血栓主要成 分为纤维蛋白和血小板。体外栓子注入法制备的动 物模型多用于肺栓塞的发病机制、病理生理特点及
小体型动物中，大鼠血压和人接近，对急性缺 血、低氧的耐受性强，易于饲养，适用于大规模样本 的实验研究和相关的生化指标检测。而且随着实验 水平的提高，现已经能成功测定大鼠肺动脉压，可以 对血栓栓塞引起的肺动脉高压进行很好的评价，因 此逐渐成为科学实验中较为常用的肺血栓栓塞模 型。小体型动物中，小鼠体型相对较小，费用低廉， 取材方便，无需多人合作，在大规模样本的实验研究 中，尤其是药理及药效学的研究方面更具优势。但 是小鼠对肺血栓栓塞的耐受性相对较差，实验操作 难度较高，所以有关小鼠肺血栓栓塞模型的建立与
·１４０·
国际呼吸杂志２００９年１１月第２９卷第２２期Ｉｎｔ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ ２００９．Ｖ０１．２９．Ｎｏ．２２
影像学诊断方面的研究，用此种方法建立的动物模 型生存时间相对较长，存活率较高，但是模型本身缺 乏血栓形成的易患因素，仍有不足之处［１ ７｜。
肺栓塞模型的插管主要采用经股静脉和经颈静 脉两种途径。临床上肺血栓栓塞的血栓有８０％来源 于下肢静脉［１ ８｜，从股静脉注入栓子可制备模型。近 来多选用颈静脉作为插管位置是因为靠近心脏，栓 子运行的路径短，栓子进入右心房更容易，而且破碎 的机会相对较少，提高了造模成功率，增强了实验的 可控性‘＂］。 ３不同类型小动物肺血栓栓塞模型的制备方法 ３．１小鼠肺血栓栓塞模型 ３．１．１局部诱导血栓形成法 利用血栓诱导剂注 射于体内某一血管中，造成血栓形成【１ ７｜。常采用颈 静脉注射血栓诱导剂，主要有３类血栓诱导剂：肾ｔ 腺素＋胶原（胶原１．２５ ｍｇ／ｋｇ＋肾上腺素 ０．０５ ｍｇ／ｋｇ）［１９３；二磷酸腺苷（二磷酸腺苷 ０．２５ ｍｇ／ｋｇ）［１９ ３；凝血酶（凝血酶１ ０００ Ｕ／ｋｇ）心…。 这３类血栓诱导剂均能促进哑小板的聚集并使纤维 蛋白原聚合为纤维蛋白，进而导致血栓形成１２¨。利 用胶原＋肾上腺素注射制备的肺血栓栓塞小鼠模 型，可见有近一半的肺部毛细血管内形成微血栓；而 注射二磷酸腺苷制备的肺血栓栓塞小鼠模型可在相 当于１／４的肺部毛细血管见到微血栓；注射凝血酶 的小鼠模型则肺部几乎每个毛细血管内都有微血栓 形成口引。局部诱导血栓形成法制备模型简单易行， 费用低廉，可用于大规模样本的实验研究，尤其是药 物对肺栓塞模型的影响及其保护率。其优点是可模 拟血栓形成时机体的高凝状态，但用该方法制成的 小鼠肺栓塞模型生存时Ｉ＇ｕ】短，死亡率高。原因是一 方面由于血栓诱导剂引起血管收缩导致呼吸被阻 断，易引起动物死亡或麻痹，另一方面由于循环血流 中的血小板发生聚集，聚集的血小板进一步释放一 系列活性物质如血栓素Ａｚ和前列腺索２ａ，另外血 栓诱导剂还能使肺部血管进一步收缩，加重呼吸障 碍，引起动物死亡Ⅲ。２。朋］。 ３．１．２体外栓子注入法小鼠尾静脉取血，室温下 凝固，置于６０℃水浴箱中温浴１０ ｍｉｎ。将自体血栓 凝块转移至无菌玻璃研磨器中制备成自体血凝块， 并研磨成均匀的细小颗粒备用，或尾静脉取血后离 心取血浆，加入凝血酶，制成自体栓子，行颈内静脉 注射，造成血管功能状态及血流状态的改变，模拟人
局部诱导血栓形成法是指在血管内（包括颈静 脉、股静脉、腔静脉、肺动脉等）通过不同方法刺激并 诱导原位血栓形成。主要有：①机械性损伤法，即用 微型刮匙搔刮血管内膜或用球囊剥脱血管内皮凹。１…。 ②电流损伤法，即用电刺激破坏局部血管［１¨２１。③ 结扎法，即结扎静脉后引起局部血流淤滞、低 氧［Ｉ争１４］。通过以上方法刺激局部血管内膜，造成血 管内膜的损伤及血流动力学的改变，激活凝血系统， 模拟血栓形成时机体的高凝状态，促使血小板黏附 聚集导致血栓形成。④直接注入诱导剂如凝血酶、 肾上腺素＋胶原、二磷酸腺苷等，促进纤维蛋白的形 成和血小板的凝集，释放一系列活性物质，诱导局部 血栓形成，血栓形成后通过血流阻塞肺动脉血管，形 成肺栓塞ｒ１５－ｔ６１。该模型操作步骤简单易行，费用低 廉，适用于大规模样本的实验研究，尤其是药物对肺 栓塞模型的影响及其保护率［３］。
万方数据
应用进展相对缓慢。然而小鼠具有完备的基因组数 据库和蛋白质组数据库邱］，便于今后基因序列和蛋 白质组学方面的研究，而且通过基因敲除的小鼠模 型更便于深刻探讨疾病的病因、病理和发生发展的 过程，因此小鼠模型具有相当广泛的开发与应用 前景。 ２肺血栓栓塞动物模型制备的常用方法
目前文献报道的肺血栓栓塞动物模型的常用制 备方法主要有２种，即体内局部诱导血栓形成法和 体外栓子注入法。
Ｉ）Ｏｌ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３—４３８Ｘ．２００９．０２２．０１５ 基金项目：国家自然科学基金资助项目（３０７７０９４０） 作者单位：１０００２０首都医科大学附属北京朝阳医院北京呼吸 疾病研究所（缪冉．王辰，庞宦森）；１０００６９北京，首都医科大学基 础医学院生理学教研室（王军） 通信作者：王军．Ｅｍａｉｌ：ｗａｒｇＪｕｎ＠ＣＣｌＴＩｔｌ．ｅｄｕ．ｃｎ
垦堕唑咝盘查！！！！堡！！旦箜！！鲞笙！！塑 ！！！』墨！！垡！！塑！！！巴生！！！！！！！！！：！！！盟！：；！
·继续医学教育．
肺血栓栓塞动物模型研究进展
缪冉 王军 王辰 庞宝森
肺血栓栓塞症是指深静脉系统或右心内形成的 血栓脱落堵塞于肺动脉或其分支，继而引起肺循环 和呼吸功能障碍的临床和病理生理综合征。该病发 病率、漏诊率、致死率均较高，是肺部疾患中最常见 的死亡原因，严重威胁着人类的生命和健康。为了 更好地深入研究其病理生理特点，完善诊断技术和 治疗方法，建立操作简单、成功率高、价格低廉且实 用的实验动物模型就显得十分重要。本文就近年文 献报道的较为常用的肺血栓栓塞动物模型加以 综述。 １肺血栓栓塞动物模型种类
体外栓子注入法是在体外制备血凝块或者其他 类型的栓子，然后将其注入静脉系统或者右心房，栓 子通过血液循环随机栓塞于肺动脉，形成肺栓塞模 型。其中制备血凝块血栓可以是来源动物自身的全 血凝固，这种栓子富含血小板、纤维蛋白和红细胞 等，符合栓塞时病理生理改变。或者取动物自身血 浆，加入凝血酶，凝固形成白色血栓，此血栓主要成 分为纤维蛋白和血小板。体外栓子注入法制备的动 物模型多用于肺栓塞的发病机制、病理生理特点及