使用流式细胞仪检测活细胞内的ROS

使用流式细胞仪检测活细胞内的ROS
细胞内的反应性氧化物（reactive oxygen species，ROS）是一类包
括超氧阴离子（superoxide anion，O2·-）、过氧化氢（hydrogen peroxide，H2O2）、羟基自由基（hydroxyl radical，·OH）等氧化性分
子的集合体。

ROS在细胞内起着重要的生物学作用，包括参与细胞信号传导、调节细胞生长和增殖、与细胞凋亡等。

然而，当ROS在细胞内积累过
多时，会引发氧化应激，导致细胞损伤和疾病的发生。

因此，准确检测细
胞内ROS的水平对于理解ROS的生理和病理过程具有重要意义。

流式细胞仪是一种高效、高通量的细胞分析技术，被广泛应用于生物
学和医学研究中。

流式细胞仪可以同时测量上千个细胞的多个特征参数，
包括细胞大小、形态、表面标记物的表达、细胞内或细胞间分子的含量等。

在检测细胞内ROS水平方面，流式细胞仪结合了荧光探针和细胞分析技术，能够定量测量活细胞内ROS的水平，并提供单细胞分析的功能。

下面将介
绍如何使用流式细胞仪检测活细胞内ROS。

首先，选择合适的荧光探针来标记细胞内ROS。

常用的ROS探针有
2',7'-二氯二羟苯基四氮唑（dichlorodihydrofluorescein diacetate，DCFH-DA）、二氯荧光二硫腙（dichlorofluorescin diacetate，DCFDA）等。

这些探针可透过细胞膜进入细胞内，并被ROS氧化为荧光物质。

选择
适当浓度的探针，加入到细胞培养基中，使其与细胞共同孵育一段时间。

荧光探针的浓度和孵育时间需要根据细胞类型及实验需求进行优化。

接下来，通过流式细胞仪进行细胞的收集和分析。

首先，将孵育后的
细胞进行离心，去除细胞培养基，并用含有相应细胞培养液（如PBS）的
管子洗涤细胞。

然后，将细胞上物理方法（如磁珠排序）或化学方法（如
凋亡细胞的排除）进行单个细胞分散，以获得单个细胞的悬浮状态。

将荧
光探针染色的细胞以单个细胞的形式通过流式细胞仪的微细管道输送至检
测点。

在测量过程中，利用激光器激发荧光探针，收集荧光探针发出的荧
光信号。

根据荧光信号的强度可以定量测量细胞内ROS的水平。

荧光信号的强
度与细胞内ROS的含量成正比。

流式细胞仪通过检测荧光探针发出的信号
进行定量分析，可以提供多种参数，如正常细胞的平均荧光强度、细胞内ROS的分布等。

此外，结合其他细胞标记物的共染技术，还可以进一步分
析特定细胞亚群内ROS的水平差异。

需要注意的是，流式细胞仪检测ROS的结果可能受到荧光探针自身的
性质和实验条件的影响。

选择合适的探针和浓度是确保测量结果准确可靠
的关键。

此外，荧光探针的选择还应尽量避免其他细胞内荧光物质的干扰，同时要保证其对ROS的选择性和敏感性。

实验条件包括细胞培养条件、探
针孵育时间和温度、光源和流式细胞仪的设置等，也会对测量结果产生一
定影响。

因此，在使用流式细胞仪进行ROS检测时，需根据实验的具体目
的和要求进行优化和标准化。

综上所述，流式细胞仪是一种可靠有效的检测方法，用于测量活细胞
内ROS水平。

该方法具有高通量、高灵敏度和高精度的特点，可以为研究ROS与细胞生物学、疾病相关的分子机制提供重要的实验手段。