小儿健脾开胃合剂中黄芪甲苷的含量测定

小儿健脾开胃合剂中黄芪甲苷的含量测定
唐德智;莫迎
【摘要】目的建立测定小儿健脾开胃合剂中黄芪甲苷含量的高效液相色谱-蒸发光散射检测(HPLC-ELSD)法.方法色谱柱为shim-pack VP-ODS柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水(34:66),流速为1.0 mL/min,ELSD参数为漂移管温度60℃,雾化管温度35℃.结果黄芪甲苷进样量在0.61～6.13μg范围内与峰面积线性关系良好(r=0.999 9,n=6),平均加样回收率为97.62%.RSD为1.98%(n=6).结论该方法简便、结果可靠,可作为小儿健脾开胃合剂中黄芪甲苷的含量测定方法.【期刊名称】《中国药业》
【年(卷),期】2010(019)006
【总页数】2页(P22-23)
【关键词】小儿健脾开胃合剂;黄芪甲苷;高效液相色谱-蒸发光散射检测法;含量测定
【作者】唐德智;莫迎
【作者单位】广西壮族自治区南宁食品药品检验所,广西,南宁,530001;广西壮族自治区南宁食品药品检验所,广西,南宁,530001
【正文语种】中文
【中图分类】R284.1;R286.0
小儿健脾开胃合剂由黄芪、白术、山药、大枣、山渣、莲子、枸杞子等组方，具有
益气健脾功效，用于治疗脾胃虚弱所致的小儿厌食症、消化不良，并可促进儿童对钙的吸收。

君药黄芪中的黄芪甲苷为主要有效成分之一，原质量标准采用薄层扫描法测定其含量，方法烦琐，结果重现性差。

本试验参考有关文献[1-3]采用高效液相色谱-蒸发光散射检测（HPLC-ELSD）法测定小儿健脾开胃合剂中黄芪甲苷的含量，为进一步控制产品质量提供了依据，报道如下。

1 仪器与试药
LC-2010AHT型高效液相色谱仪（日本岛津公司）；Softa Model 400型ELSD 检测器；WML色谱工作站（广西威玛龙色谱科技公司）；BP211D型电子天平（瑞士梅特勒）。

黄芪甲苷对照品（中国药
品生物制品检定所，批号为0781-200109，供含量测定用）；甲醇、乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯；小儿健脾开胃合剂（广西欢宝药业有限公司）。

2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Shim-pack VP-ODS柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-水（34 ∶66）；流速：1.0 mL/min；柱温：30℃；ELSD 参数：漂移管温度60℃，雾化管温度35℃，气体流速为2.0 mL/min；进样量：20 μL。

2.2 溶液制备
取经五氧化二磷减压干燥24 h的黄芪甲苷对照品约15 mg，精密称定，置25 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。

取样品适量，混匀，精密量取20 mL，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取5次，每次20 mL，合并正丁醇液，用氨试液洗涤3次，每次20 mL，弃去氨液，正丁醇液再用正丁醇饱和的水洗涤3次，每次20 mL，弃去水液，正丁醇液置水浴上蒸干，残渣加甲醇适量使溶解并转移至5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜
（0.45 μm）滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

按处方量称取除黄芪外的其余药材，按制备工艺制成缺黄芪的阴性样品，取适量，按供试品溶液的制备方法制得阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察
线性关系考察：分别精密吸取对照品贮备液 0.5，1，2，3，4，5 mL，置10 mL 量瓶中，加甲醇稀释成不同质量浓度的对照品溶液，按上述色谱条件分别进样20 μL，测定峰面积，以对照品进样量的常用对数值为横坐标、峰面积积分值的常用对数值为纵坐标进行线性回归，回归方程为 Y=1.567 2 X+12.711，r=0.999 6（n=6）。

结果表明，黄芪甲苷进样量在0.61～6.13 μg范围内与峰面积线性关系良好。

专属性试验：分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各20 μL，注入液相色谱仪测定。

结果供试品溶液色谱中，均有与黄芪甲苷保留时间相同的色谱峰，且与相邻杂质峰能完全分离，阴性对照品溶液色谱图中则无此峰，见图1。

图1 高效液相色谱图
精密度试验：精密吸取同一对照品溶液，依法重复进样6次，测定并记录黄芪甲苷峰面积。

结果的 RSD为1.37%（n=6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液，分别于 0，1，2，4，6，8，12，14 h时依法进样测定。

结果峰面积的 RSD为1.81%（n=8），表明供试品溶液在14 h内稳定。

重现性试验：取同一批（批号为20060702）样品6份，每份精密量取20 mL，依法制备供试品溶液并测定。

结果黄芪甲苷的平均含量为 0.045 mg/mL，RSD 为1.79%（n=6）。

加样回收试验：精密吸取已知含量的同一批（批号为20060702）样品10 mL，共6份，分别精密加入对照品溶液（0.231 mg/mL）1.0，2.0，3.0 mL，按供试
品溶液制备方法制备溶液并测定，用外标两点法对数方程计算含量。

结果见表1。

表1 黄芪甲苷加样回收试验结果（n=6）样品含量（μg）1.80 1.80 1.80 1.80
1.80 1.80加入量（μg）0.92 0.92 1.85 1.85
2.77 2.77测得量（μg）2.68 2.71
3.58 3.61
4.47 4.59回收率（%）9
5.65 98.91 9
6.22 9
7.84 96.39 100.72 X（%）RSD（%）97.621.98
2.4 样品含量测定
取6批样品依法制备供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液20 μL，注入液相色谱仪，测定，以外标两点法对数方程计算含量。

结果批号为 20050201，20060201，20060701，20060702，20060801，20060901的样品中黄芪甲苷含量分别为0.042，0.056，0.065，0.045，0.048，0.063 mg/mL（n=3）。

3 讨论
蒸发光散射检测器（ELSD）是近年来逐步应用在色谱方面的通用型质量检测器，
特别是对无紫外吸收或紫外末端吸收物质具有较高的检测灵敏度，且稳定性和重现性良好，解决了紫外检测器对于黄芪甲苷末端吸收灵敏度低、其他杂质干扰大的问题，在黄芪及其制剂的含量测定中应用日益增加。

采用HPLC-ELSD法测定小儿健脾开胃合剂中黄芪甲苷的含量，不受其他成分干扰，方法简便、快速，分离度高，重现性好，可作为该制剂的质量控制方法。

参考文献：
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：化学工业出版社，2005：212.
[2]颜晓航.黄芪及其制剂中黄芪甲苷含量测定方法研究进展[J].安徽医药，2006，
10（12）：953-954.
[3]吴玉强，罗轶.HPLC-ELSD法测定复方扶芳藤合剂中黄芪甲苷[J].中草药，
2006，37（9）：1 353-1 354.。