广西巴马小型猪小RNA 启动子U6和7SK 的克隆及功能验证

广西巴马小型猪小RNA 启动子U6和7SK 的克隆及功能验
证
陈时锦;范晶;蒋钦杨;兰干球;郭晓萍;郭亚芬
【期刊名称】《遗传》
【年(卷),期】2012(34)4
【摘要】为了探讨巴马小型猪启动子U6 和7SK 的功能以及为生产GGTA1 基因沉默的广西巴马小型猪奠定基础,文章克隆并分析了siRNA 启动子U6 和7SK,并分别连接pMD18-shEGFP 载体,分别与PEGFP-N1 共转猪肾细胞,进行RNAi 实验.以pMD18-hU6-shEGFP 为阳性对照,无启动子的pMD18-shEGFP 载体为阴性对照,单独转染PEGFP-N1 为第一组空白对照,以ddH2O 替代质粒为第二组空白对照组,验证这两种启动子在猪细胞中的功能.结果表明:广西巴马小型猪RNA 聚合酶III 型siRNA 启动子U6 和7SK 的序列全长分别为553 bp 和437bp.成功构建了pMD18-pU6-shEGFP 和pMD18-p7SK-shEGFP 干扰载体,转染猪源PK-15 细胞,证明U6 以及7SK 两个启动子具有较高的siRNA 表达活性,可以用于α-1,3 半乳糖转移酶等猪源基因的沉默实验.%To investigate the functions of U6 and 7SK of Bama mini-pig and produce Bama mini-pig with silenced GGTA1 gene, the siRNApromoters U6 and 7SK were cloned, ligated into pMD18-shEGFP, and co-transfected with PEGFP-Nl into PK-15 kidney cells of pigs to be used in RNAi experiments. The functions of the two promoters in pig cells were verified using pMD18-hU6-shEGFP as the positive control, pMD18-shEGFP vector without promoter as the negative control, PEGFP-N1 as the first blank control, ddH2O in replacement of the plasmid as the second
blank control. The results showed that the lengths of U6 and 7SK in Bama mini-pig were 553 bp and 437 bp, respectively. Vectors pMD18-pU6-shEGFP and pMD18-p7SK-shEGFP were constructed and transfected into PK-15 cells from pigs. Promoters pU6 and p7SK proved to express high levels of siRNA activity and can be used in the experiment of silencing a-1,3galactosyltransferase gene.
【总页数】9页(P445-453)
【作者】陈时锦;范晶;蒋钦杨;兰干球;郭晓萍;郭亚芬
【作者单位】广西大学动物科学技术学院,南宁,530005;广西大学动物科学技术学院,南宁,530005;广西大学动物科学技术学院,南宁,530005;广西大学动物科学技术学院,南宁,530005;广西大学动物科学技术学院,南宁,530005;广西大学动物科学技术学院,南宁,530005
【正文语种】中文
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