外来动物疫病监测计划

附件2：
外来动物疫病监测计划
牛海绵状脑病监测计划
一、监测范围
重点在奶牛养殖场、肉牛养殖场、动物医院和屠宰场进行采样监测，采集对象包括具有神经症状、紧急屠宰、非正常死亡的2 岁以上牛，以及正常屠宰的4 -7岁奶牛和种牛。

二、送样时间
2009年11月1日-2010年10月31日。

三、检测机构及所负责省市
（一）国家牛海绵状脑病参考实验室
中国动物卫生与流行病学中心国家牛海绵状脑病参考实验室负责新疆、青海、甘肃、西藏、四川、陕西、山西、宁夏、河南、河北、天津、安徽、湖北、湖南、山东、江苏、浙江、上海、福建、广东、广西、贵州、重庆、江西、海南、云南等26 个省份的牛脑样品检测。

（二）中国农业大学牛海绵状脑病检测实验室
中国农业大学牛海绵状脑病检测实验室负责北京、内蒙、辽宁、黑龙江、吉林等 5 个省份的牛脑样品检测。

四、采样数量和要求
（一）采样数量。

具体见表1。

（二）采样要求。

具有神经症状的样品应80%以上为奶牛样品；紧急屠宰、死亡或 4 -7 岁正常屠宰牛的样品应50%以上为奶牛样品。

表1 2010年各省份应采集的牛脑总数量及神经症状牛数量
五、检测方法
免疫组织化学方法、酶联免疫吸附（ELISA）方法、免疫印迹方法和组织病理学方法。

ELISA 方法为筛检方法，免疫组织化学方法和免疫印迹方法为确诊方法，组织病理学方法为辅助诊断方法。

六、监测结果处理与报告
（一）各检测实验室检测完样品后应及时向送样单位出具检验报告，并保存好相关实验记录。

（二）各省份动物疫病预防控制机构在11月30日前，向农业部兽医局提交BSE 年度监测报告，并抄送国家牛海绵状脑病参考实验室。

报告内容包括：
1.检查的各种易感动物总数及其年龄结构；
2.每种易感动物总的死亡率和由神经性疾病造成的死亡率；
3.主管部门限制流通的动物类型与数量记录；
4.临床检查与流行病学调查的动物数量与结果；
5.除牛科动物以外感染传染性海绵状脑病（TSEs）的动物；
6.BSE相关知识的教育培训情况；
7.进口和饲喂肉骨粉的情况。

（三）各检测实验室发现疑似样品，应及时送国家牛海绵状脑病参考实验室确诊。

（四）中国农业大学牛海绵状脑病检测实验室在11月30日之前将年度BSE 检测结果汇总，送国家牛海绵状脑病参考实验室。

（五）国家牛海绵状脑病参考实验室汇总各方面信息后，形成年度监测报告，于12月31日前报农业部兽医局。

附录1：
牛海绵状脑病普查采样单
采样单编号：第___ 张编制：国家牛海绵状脑病参考实验室
注释：
1.采样地点相同的样品可以登记在同一张采样单上。

样品编号用地名的首字母+数字来表示，例如青岛1号写为QD -1，此号必须与样品包装编号对应起来。

2.请详细填写采样单位名称、电话、地址等信息。

3. 有些选项可以打“√”表示。

采样单位（委托采样单位）名称：（盖章）电话：
采样单位（委托采样单位）地址：邮编：
采样人（委托采样人）签名：年月日
封样单位（运送单位）名称：（盖章）电话：
封样单位（运送单位）地址：邮编：
送样人（委托送样人）签名：年月日
此单一式3联，一联随样品封存，另两联分别由采样单位和养殖单位保存。

附录2：
非正常屠宰牛登记表
样品编号：编制：国家牛海绵状脑病参考实验室
附录3：
采样与送样方案
牛羊脑样品既可以按甲醛固定处理，也可以按冷冻保存处理，然后运送至国家认定的检测实验室进行检测。

具体方法见“方案一：新鲜牛羊脑样品的采集与运送方案” 和“方案
二：甲醛固定的牛羊脑样品的采集与运送方案”。

参考实验室建议采用方案一的规定进行采样和运送，该方案也是当前国际上广泛采纳的方案。

方案一：新鲜牛羊脑样品的采集与运送方案
1.专用采样工具采集牛羊脑样品的特点：
国家牛海绵状脑病参考实验室根据国际上通用的牛羊脑采样工具设计出我国的牛羊脑样品采样工具。

该工具为塑料制品，呈勺子形状，前端带有锋利的齿，便于切断脑组织。

这种采样方式有着非常明显的优点，如使用简单、节约成本、工作效率高、机动性强、采样安全。

2.采样物品准备：
数码照相机（或数码摄像机）、专用的采样勺（一把勺子最多可以采集三份样品，牛脑采样勺为蓝色，羊脑采样勺为黄色）、医用剪刀（一把，长10cm 左右）、一次性手套、橡胶检查手套（即乳胶手套）、口罩、工作服、样品杯（可向参考实验室索取）、记号笔、冰袋（至少3块大号的冰袋）、大号的透明胶带、带盖泡沫箱（有厚度，无破损，大小适中）、签字笔或圆珠笔、采样单、吸水纸等。

3. 采样步骤：
A.如果有比较典型的疯牛病（BSE）疑似牛，则要拍照或摄像留下证据。

每省至少要对20%的临床疑似牛进行拍照或摄像，并且收集临床疑似牛的其他材料如档案等。

采集临床疑似牛时，采样人员还需要通过问询等方式弄清该病牛的其他情况，问询内容可以包括饲养历史、来源、流动等情况。

这些证据材料必须存档和备份，运送样品时一并寄送至检测实验室。

B.每次采样至少有两人在场，其中一人戴好一次性手套和橡胶检查手套，另外一人专门登记和开启样品杯而不需要戴手套。

通过观察牙齿检查牛羊的年龄，大于3岁的牛（第二对永久门齿长出）和大于18月龄的羊（第一对永久门齿长出）才可以采样，但如果该动物为疯牛病或痒病风险动物则没有年龄限制。

C.在平整地面倒置牛/羊头，即牛/羊头的两角和鼻子靠地放置。

同时，另外一人开始填写采样单，并且在样品杯上标记上对应的样品编号（以县/市名+序号，如青岛1号）。

一个样品杯只能装一个脑样品。

D.在枕骨大孔处用剪刀剪开脑硬膜，目的是便于插入采样勺。

然后用一个手指伸入枕骨大孔中，沿着延脑（延髓）转一周，目的是切断延脑与头骨之间相连的神经和血管，以便于脑组织顺利挖出。

E.从延脑腹侧（也即勺子从枕骨大孔的上面进入）将采样勺插入枕骨大孔中，插入时采样勺要紧贴枕骨大孔的腔壁，以免损坏延脑组织。

采样勺插入的深度约为5-7cm（采羊脑时插入深度约为4 cm），然后向上一扳勺子手柄，同时往外抠出脑组织和勺子，延脑便可完整取出。

注意：尽量保护好延脑“三叉口”处（脑闩部）的组织的完整性。

F.将脑组织放入编好号的样品杯中，拧紧杯盖，然后放置在盛有冰袋的泡沫箱中，用透明胶带将泡沫箱的盖子绑紧。

注意：采好的样品必须在5小时之内放入冰柜中冷冻上，以防腐败；样品至少要冷冻24 小时才能往疯牛病检测实验室运送。

G.各地送来的样品要先在省动物疫病预防控制机构统一清理，如果没有冷冻好的样品，则必须及时放入冰柜中冷冻，然后由省动物疫病预防控制机构统一将样品发送至检测实验室。

4. 样品运送：
准备好带盖的结实的泡沫箱，该泡沫箱必须无任何破损，并且大小适中（根据样品的量来决定）。

先在泡沫箱的底部铺上一层吸水纸，之后放入冷冻好的样品，然后在侧面放入几
块冷冻好的冰袋，最后在样品的上面放入几块冷冻好的冰袋，盖紧箱盖。

用大号的透明胶带封好箱口，再横向打好包，箱子外面用记号笔写上“易碎勿压” 以及向上的“箭头” 等字样，然后由省动物疫病预防控制机构统一运送。

打好包的样品必须及时发送，并确保 4 天之内运送至检测实验室。

提示：一、这种包裹最好通过航空途径运送或由专人运送，并切记要注明“易碎勿压”。

二、切记在采样单上写明送样人及其联系方式，样品检测完后实验室要出具检验报告并寄给送样人。

方案二：甲醛固定的牛羊脑样品采集与运送方案
1.材料
A.数码照相机（或数码摄像机）、采样单、复写纸和圆珠笔或铅笔
B.医用胶布（用于捆装有样品的纱布，并在其上写上样品编号）
C.电动骨锯或采样勺、骨钳、斧头
D.解剖刀、剪刀、乳胶手套
E.纱布、棉线、密封塑料桶（容积不少于5000ml）
F.固定液：即10%福尔马林（甲醛）生理盐水氯化钠8.5g；水900ml；40%福尔马林（甲醛）100ml
2. 采样步骤
A. 如果有比较典型的BSE疑似牛，则要拍照或摄像留下证据。

每省至少要对20%的临床疑似牛进行拍照或摄像，并且收集临床疑似牛的其他材料如档案等。

采集临床疑似牛时，采样人员还需要通过问询等方式弄清该病牛的其他情况，问询内容可以包括饲养历史、来源、流动等情况。

这些证据材料必须存档和备份，运送样品时一并寄送至检测实验室。

B.填写采样单
根据实际情况，按采样单要求认真填写。

采样地点相同的样品可以登记在同一张采样单上。

C.取样
（I）电锯采样法
a.用电锯沿两牛角根部到枕骨大孔上边缘的方向将牛颅腔打开。

b.用手术刀将脑膜切开，骨钳打开颅腔，然后把脑神经和脑血管切断。

c.取出整个脑组织包括大脑、小脑和脑干（间脑、中脑、脑桥和延脑）；注意千万不要把脑干损坏。

d.将每头牛的脑组织用纱布松松地裹住（纱布容易透水），千万不能紧，一定要松，然后将写有编号名称的医用胶布（用圆珠笔或铅笔将编号写在上面，编号：地名+序号+样品类别名，如“青岛市10号牛”）用棉线栓在纱布口处，注意不让胶布脱落。

处理好后放入10-20倍体积10%福尔马林生理盐水中固定一周。

注意标签编号与采样单的编号相对应。

e.用新的福尔马林生理盐水更换旧的固定液，密封在塑料桶中，桶外贴上桶中所有牛脑的编号，以便我们处理牛脑时不开桶盖便可知桶中的牛脑情况。

每个塑料桶可根据大小放置相应数量的牛脑。

（II）采样勺采集法
a.准备专用的采样勺（一把或二把便可）、医用剪刀（一把）、一次性手套、橡胶检查手套（即乳胶手套）以及其他采样用品如采样单等。

b.戴好一次性手套和橡胶检查手套，专门登记的人员不需要戴手套。

通过观察牙齿检查牛的年龄。

c.在平整地面倒置牛头，即牛头的两角和鼻子靠地放置。

d.在枕骨大孔处用剪刀剪开脑硬膜，目的是便于插入采样勺。

然后用一个食指伸入枕骨大孔中，沿着延脑转一周，目的是切断延脑与头骨之间相连的神经和血管，以便于延脑的取出。

e.从延脑腹侧（也即勺子从枕骨大孔的上面进入）将采样勺插入枕骨大孔中，插入时采样勺要紧贴枕骨大孔的腔壁，以避免损坏延脑组织。

采样勺插入的深度约为5-7cm（采羊脑时插入深度约为4 cm），然后向上一扳勺子手柄，同时往外抠出脑组织和勺子，延脑便可完整取出。

f.其余步骤见（I）中的d和e。

注：对于临床疑似牛羊，采下脑后，从脑中线一分为二，一份用于甲醛固定，另一份用于-20℃冷冻并在低温下运送至参考实验室。

3. 样品的包装与运送
A.独将采样单邮寄给检测实验室，切不可与样品一起邮寄，目的是防止采样单被污染。

B.将固定好的牛脑放在几个大的带内盖的塑料桶中密封，注意每个牛脑都随身带有一个唯一的编号，桶外壁上也标明桶内的所有牛脑编号。

运送时桶里的固定液可以不按10-20倍体积的量，而保留适当的量便可，适当的量是以浸没牛脑为准，不过运送时必须更换成新的固定液。

C.运输时，将装有样品的塑料桶用木架子固定好，以防运输途中颠倒。

D.在木架子外面加两张不干胶标签，一张注明样品名称、采样单位与地址及联系电话，另一张注明放置方向、小心、易碎和切勿倒置等字样。

E.样品由专人或经航空运至检测实验室。

痒病监测计划
一、监测范围
重点对放牧羊群、种羊养殖场以及屠宰场进行采样监测，采集对象为瘙痒、神经症状、共济失调、倒地不起、失明、死亡或其他症状的1岁以上绵羊和山羊。

二、送样时间
2009年11月1日-2010 年10月31日。

三、检测机构及所负责省市
（一）国家牛海绵状脑病参考实验室
中国动物卫生与流行病学中心国家牛海绵状脑病参考实验室负责新疆、青海、甘肃、西藏、四川、陕西、山西、宁夏、河南、河北、天津、安徽、湖北、湖南、山东、江苏、浙江、上海、福建、广东、广西、贵州、重庆、江西、海南、云南等26个省市自治区的羊痒病样品检测。

（二）中国农业大学牛海绵状脑病检测实验室
中国农业大学牛海绵状脑病检测实验室负责北京、内蒙、辽宁、黑龙江、吉林等 5 个省市自治区的羊痒病样品检测。

四、采样数量
2010年各省份应采集的羊脑数量
五、检测方法
免疫组织化学方法、酶联免疫吸附（ELISA）方法、免疫印迹方法和组织病理学方法，其中ELISA 方法为筛检方法，免疫组织化学方法和免疫印迹方法为确诊方法，组织病理学方法为辅助诊断方法。

六、监测结果处理与报告
（一）各检测实验室检测完样品后应及时向送样单位出具检验报告，并保存好相关实验记录。

（二）各检测实验室发现疑似样品，应及时送国家牛海绵状脑病参考实验室确诊。

（三）中国农业大学牛海绵状脑病检测实验室在11月30日之前将年度羊痒病检测结果汇总，送国家牛海绵状脑病参考实验室。

（四）国家牛海绵状脑病参考实验室汇总各方面信息后，形成年度监测报告，于12月31日前报农业部兽医局。

附录1：
羊痒病普查采样单
采样单编号：第张编制：国家牛海绵状脑病参考实验室
注释：采样地点相同的样品可以登记在同一张采样单上。

样品编号用地名的首字母+ 数字来表示，例如青岛1号写为QD-1，此号必须与样品包装编号对应起来。

有些选项可以打“√”。

采样单位（委托采样单位）名称：（盖章）电话：
采样单位（委托采样单位）地址：邮编：
采样人（委托采样人）签名：年月日封样单位（运送单位）名称：（盖章）电话：
封样单位（运送单位）地址：（盖章）邮编：
送样人（委托送样人）签名：年月日此单一式3联，一联随样品封存，另二联分别由采样单位和养殖单位保存。

痒病监测采样送样方案，同牛海绵状脑病监测采样送样方案。

牛传染性胸膜肺炎监测计划
一、监测范围
重点监测边境省份不同年龄黄牛、奶牛、水牛、牦牛。

重点对新疆、吉林、黑龙江、内蒙、甘肃、四川等省份的规模屠宰场进行肉品监测。

二、监测时间
各省份在6月底之前将采集的血清样品送至指定实验室。

肉品监测样品在8月底之前送至指定实验室。

发现可疑病例，随时采样，及时送至指定实验室。

三、监测数量
广西、云南、西藏、新疆、甘肃、内蒙古、黑龙江等省区各送检2000 头份牛血清样品；新疆、吉林、黑龙江、内蒙古、甘肃、四川等省区各选择2-3个规模屠宰场进行肉品监测，共计12-18个规模屠宰场。

每个屠宰场应采集有眼观肺炎变化的牛肺脏20-30个。

四、检测方法与结果判定
（一）血清抗体检测方法及判定标准：（1）方法：OIE推荐的补体结合试验和竞争ELISA 试验。

（2）判定：补体结合试验，+ + ++（100% 抑制溶血）为阳性；+，+ +，+ + +（25%，50%，75% 抑制溶血）为疑似。

当出现疑似结果时应重新再做。

竞争ELISA试验，抑制率等于或大于50%为阳性，抑制率在40% -50%之间为疑似，抑制率等于或低于40% 为阴性。

对于疑似样品需重新采集血清进行复检，如果仍为疑似，则应做病理学和病原学检查。

（二）病原学检测方法及判定标准：对疑似肺脏样品或血清阳性样品对应牛应进行病原学检测。

可以使用病原分离或病原PCR方法（具体方法参照相应的农业行业标准）。

五、牛传染性胸膜肺炎与牛支原体肺炎的鉴别诊断与宣传教育
利用血清学和病原学检测方法对牛传染性胸膜肺炎与牛支原体肺炎进行鉴别诊断；同时加强两种疫病区别的宣传教育，消除由于牛支原体肺炎发生而带来的疑惑。

鼓励基层兽医对疑似病例上报，及时送检病料确诊。

六、监测结果处理
（一）血清学阳性样品应进行溯源追踪，采集鼻、咽部拭子进行病原学检查，同时限制同群牛移动，必要时应做剖杀检查；
（二）屠宰场肺肺脏样品病原学检查为阳性应追踪来源，对同群牛进行流行病学调查；
（三）疑似肺脏样品病原检查为阳性应追踪样品来源，对同群牛开展流行病学调查；
（四）对病原检查为阳性牛进行扑杀，必要时对同群牛进行扑杀，并作无害化处理。

（五）将扑杀和处理情况按快报要求向主管部门报告。

牛瘟监测计划
一、监测范围
西藏、云南、广西。

二、监测时间
2010年1-6月。

三、监测数量
3 省区集中采集牛血清样品，具体数量：西藏牦牛血清200份、云南、广西水牛血清各200份。

采样以乡镇或者规模养殖场为采样单位，每个采样单位采集25-30份牛血清。

四、检测方法
采用C-ELISA方法。

五、监测结果处理
由云南热带亚热带动物病毒病重点实验室负责牛瘟血清实验室检测、检测结果分析。

小反刍兽疫监测计划
一、监测范围
（一）动物种类：山羊、绵羊、岩羊、黄羊和其他非正常死亡的野羊。

种羊样品数应在10% 以上。

（二）动物群体：老疫区、受威胁区或边境地区的动物群体。

（三）省份：西藏、新疆、云南、广西、四川、贵州、青海、内蒙古、黑龙江等省份。

二、监测时间
同时进行血清学监测和病原学监测。

7～9月份安排一次集中监测。

发现可疑病例，随时采样，及时检测。

三、监测数量
西藏、新疆、云南、青海4省份，每省份不低于20个群体；广西、四川、贵州、内蒙古和黑龙江5省份，每省份不低于10个群体。

每个群体采样数量不低于30份。

最低采样数量见附表。

风险较大的区域可根据实际情况增加采样量。

发现高热、眼鼻分泌物增多及腹泻的易感动物，应及时将组织样品和血清送中国动物卫生与流行病学中心国家外来动物疫病诊断中心。

四、检测实验室
以上所有样品送国家外来动物疫病诊断中心进行检测。

在牛瘟和蓝舌病监测中采集的血清样品，应同时进行小反刍兽疫检测，此任务由云南热带亚热带动物病毒病重点实验室负责。

五、检测方法
（一）血清学检测：竞争ELISA方法或者间接ELISA方法。

（二）病原学检测：荧光RT - PCR或者RT - PCR方法。

六、监测结果处理
云南热带亚热带动物病毒病重点实验室每年10月31日之前将小反刍兽疫的检测结果送国家外来动物疫病诊断中心汇总，国家外来动物疫病诊断中心于12月31日之前形成总报告提交农业部兽医局。

非洲猪瘟监测计划
一、监测范围
1.动物种类：家猪、野猪。

2.动物群体：边境地区的动物群体，包括养殖场、用野猪改良的饲养场、可能与野猪有接触史的家猪饲养户、野猪分布地区的野猪。

3.省份：黑龙江省和内蒙古自治区的边境地区。

二、监测方法
临床监视与实验室检测相结合。

实验室检测采用血清学和病原学方法，其中血清学检测：ELISA方法；病原学检测：荧光PCR或者PCR方法，或病原检测ELISA 方法。

三、监测时间
3～5月份安排一次集中监测。

发现可疑病例，随时采样，及时检测。

四、样品种类与数量
每省份不低于15个群体，每个群体采集血液样品数量不低20头份。

每省采集血清样品和抗凝血样品各300份。

发现高热、网状内皮系统出血的死亡动物随机采集脾脏、淋巴结和肺脏等组织样品。

五、检测实验室
以上所有样品送中国动物卫生与流行病学中心国家外来动物疫病诊断中心进行检测。

六、监测结果处理
国家外来动物疫病诊断中心分别于2010年6月和年底前汇总检测结果，并将检测报告提交农业部兽医局。

附表：
样品采集登记单
备注：“样品类别”指血清样品、抗凝血、组织或棉拭子。

蓝舌病（欧洲8 型）监测计划
一、监测范围
云南、广西、内蒙古、新疆、湖北、四川、重庆、西藏、安徽、湖南、贵州、山西、河北、黑龙江、吉林、辽宁等16个省份为血清学监测范围。

监测家畜包括绵羊、山羊和牛。

云南、广西、安徽、新疆、内蒙古和重庆等6个省份为监控群监测范围。

二、监测时间
血清学监测每年监测1次，采样在11-12月完成。

监控群监测每年监测4次，分别于1月、4月、7月和10月进行采样监测。

疑似病例实验室检测全年进行。

三、监测数量
（一）血清学监测：在血清学监测范围内各省份集中采集血清样品，每个省、自治区采集血清1200份，其中，绵羊600份、山羊300份、牛300份。

采样时，以乡镇或规模养殖场为采样单位，每个采样单位在规定的时间内采集60份绵羊、山羊、牛血清。

（二）监控群监测：上述设立监控群的省份各设立一个监控群，每个监控群10头牛，每年采集监控群内的动物血清 4 次，每个省份每次采集血清10份，年采集40份。

（三）传播媒介监测：根据各省份血清学监测和监控群监测结果，协助相关实验室进行传播媒介库蠓捕获、收集和种鉴定。

（四）疑似病例实验室检测：上述监测范围内16个省份发现临床疑似病例，采抗凝血和血清送检测实验室完成检测，数量不定。

四、检测方法
血清学检测采用AGID、C- ELISA方法；病原学检测采用PCR病毒分离和序列测定。

五、监测结果处理
由云南热带亚热带动物病毒病重点实验室负责蓝舌病血清学、病原检测，以及检测结果汇总、分析、报告和风险评估。