蜂胶柠檬酸蜂王幼虫保鲜液的最佳配比

蜂胶柠檬酸蜂王幼虫保鲜液的最佳配比
刘彩珍
【摘要】以蜂胶提取物(Propolis)、柠檬酸(Citric acid)、乙醇(Alcohol)为主要成分,研制蜂王幼虫保鲜液;采用正交实验设计法探究蜂胶提取物、柠檬酸、乙醇三个因素的最佳配比.实验结果表明,此蜂王幼虫保鲜液的最佳配比为:乙醇75％、蜂胶提取物0.15％、柠檬酸0.75％;在此条件下,蜂王幼虫在30℃,湿度80％的环境下可以保鲜9.90 d,蜂王幼虫虫体的挥发性盐基氮值(TVB-N)仍然小于150 mg/kg,保持一级新鲜度.该天数基本可以满足蜂王幼虫从生产到加工环节的需要.
【期刊名称】《蜜蜂杂志》
【年(卷),期】2017(037)002
【总页数】3页(P8-10)
【关键词】蜂王幼虫;保鲜液;蜂胶提取物;柠檬酸;挥发性盐基氮
【作者】刘彩珍
【作者单位】福建农业职业技术学院,福建福州350000
【正文语种】中文
【中图分类】S896.6
蜂王幼虫是蜂王浆生产的副产品，又称蜂王胎或王胎。

蜂王幼虫是一类高蛋白、低脂肪、低糖且富含多种维生素的天然高级营养品，营养成分丰富而且全面。

它是继蜂王浆、蜂花粉之后的又一种食疗佳品，有巨大的市场发展前景。

但不加处理的蜂王幼虫在常温条件下极易腐烂变质，震动、光、热、化学气体等外界因素也可使其
变质。

此外，蜂王幼虫也易滋生微生物而腐败。

为此，研制一种既方便又安全的保鲜液，对蜂王幼虫的开发利用必不可少。

本文以蜂胶提取物、乙醇、柠檬酸作为蜂王幼虫保鲜液的主要成分，采用正交实验法找出三者的最佳配比，研制出蜂王幼虫保鲜液。

设备与器具：恒温培养箱、微量扩散皿、微量滴定管、电子天平、三角锥形瓶（200 m L）、研钵、常规玻璃器皿等。

主要化学药品及试剂：0.01 mol·L-1的盐酸标准溶液（滴定液），体积分数为2%的H3BO4溶液（吸收液），饱和K2C O3溶液，甲基红—次甲基蓝混合指示剂，阿拉伯胶液，无氨蒸馏水、柠檬酸（食品级）、体积分数为95%的乙醇（化学纯）。

实验材料：蜂王幼虫取自福建农林大学蜂学学院意蜂场；蜂胶提取物由实验室购自浙江蜂场的酒精浸体。

采用L9（34）正交表进行实验设计。

实验流程：试剂准备→试剂调配→蜂王幼虫处理→保存→指标测量→每日重复测量→数据整理→统计分析→验证。

1.2.1 各因素水平的确定
参照有关文献，在预实验的基础上确定乙醇、蜂胶提取物、柠檬酸等因素的三个水平，见表1。

1.2.2 实验材料的分组及准备
按L9（34）正交实验表安排，据表1各因素水平，配制出1-9号蜂王幼虫保鲜液备用。

分别称取9份蜂王幼虫，每份40.0 g，分别装入编有1-9编号的200 mL三角瓶中，依次倒入上述1-9号保鲜液60 mL至各三角瓶中，用玻璃棒轻轻搅动，使蜂王幼虫完全浸润。

将各组三角瓶放入温度30℃、湿度80%培养箱中培养，备测。

1.2.3 挥发性盐基氮值的测定
每天上午9∶00按1-9依次取出3 g左右的虫体测定挥发性盐基氮值（TVB-N），每次用约1 g幼虫，重复3次。

每次取出1 g左右蜂王幼虫沥干乙醇并用滤纸吸干虫体表面乙醇，准确称重后研
磨均匀，加入虫体重量10倍的无氨蒸馏水搅拌浸提30 min，过滤，取滤液备测。

取干燥洁净的微量扩散皿，在皿内室加入1 mL 2%的硼酸吸收液，并加入甲基红—次甲基蓝混合指示剂1滴；在皿外室一侧加上述滤液1 mL【空白对照加1 mL （蒸馏水）】，另一侧加饱和碳酸钾溶液1 mL，将阿拉伯胶液涂于微量扩散皿的边缘，立即盖上玻片盖，轻轻转动皿让皿外室的两溶液混合；随后放置于37℃恒
温培养箱2 h后取出微量培养皿，小心开启玻片盖，用0.01 mol·L-1盐酸标准溶
液小心滴定皿内室的吸收液至蓝紫色，30 s内不变色，视为终点。

同时按上述步
骤做空白实验，记录各实验数据，按式计算TVB-N值：
TVB-N值/mg·kg-1=（V1-V2）/W×0.14×1000
式中，V1是样品所消耗的0.01 mol·L-1盐酸标准溶液的量（mL）；V2是空白实验所消耗的0.01 mol·L-1盐酸标准溶液的量（mL）；W是样品的质量（g）；
0.14是0.01 mol·L-1盐酸标准溶液的量（mL）相当于N的量（mg）。

1.2.4 蜂王幼虫保鲜期的计算
根据各组所测得的TVB-N值，用Excel拟合出曲线方程。

参照有关文献，通常当TVB-N值小于等于150 mg·kg-1时为一级保鲜度。

据此求出各方程TVB-N值为150时的x值即为蜂王幼虫的保鲜天数。

以实验天数为横坐标，以测得的TVB-N值为纵坐标作图，如图1所示。

用Excel对各曲线进行方程拟合，结果如下：
第一组：y=0.424 8x3-3.310 3x2+16.476x+5.813 R=0.997 3
第二组：y=0.516 9x3-5.332x2+19.609x+4.154 R=0.994 7
第三组：y=0.2454x3-1.9263x2+8.6012x+12.769 R=0.990 2
第四组：y=0.762 1x3-5.971 3x2+16.496x+10.254 R=0.998 7
第五组：y=0.254 3x3-1.095 5x2+3.6591x+20.139 R=0.997
第六组：y=0.8517x3-9.4146x2+34.965x-7.9551 R=0.9938
第七组：y=0.208x3-0.379 9x2+1.646 6x+21.975 R=0.999 3
第八组：y=0.505 4x3-3.390 6x2+10.431x+13.28 R=0.996 1
第九组：y=0.146 5x3-0.054 3x2+1.423 2x+22.219 R=0.998
根据上述拟合出的曲线方程，计算出y=150的x的解，即为TVB-N达150 mg·kg-1时蜂王幼虫的贮藏天数。

将各方程计算出的天数记入正交实验表中，如
表2所示。

由表2可见，三因素中蜂胶提取物浓度对蜂王幼虫保鲜液保鲜效果影响最大，乙
醇浓度、蜂胶提取物浓度、柠檬酸浓度三者的最优水平依次是1、3、3。

以k值为纵坐标，k1、k2、k3为横坐标作图，如图2所示：
由图2可见，随着乙醇浓度的提高，对保鲜液的保鲜效果先降低再增大，其中以
k1（对应乙醇浓度为75%）为最大，这与日常中乙醇最强杀菌浓度相一致。

乙醇
浓度的级差值为0.59，在三因素中最小，综合考虑选取75%为乙醇的最适浓度。

随着蜂胶提取物浓度的提升，蜂王幼虫保鲜效果提升，但趋势有所减缓。

考虑到随着蜂胶提取物浓度的进一步提高，保鲜液颜色加深，对蜂王幼虫表观有一定的影响，且实验中在此浓度下达一级保鲜度的天数可达8 d以上，综合考虑其成本等因素
我们选取蜂胶提取物为0.15%为最佳浓度。

随着柠檬酸浓度的提升，蜂王幼虫保鲜效果也不断提升，但提升趋势明显变缓。

柠檬酸的级差值为0.89，在三因素中排列第二。

考虑到随着柠檬酸浓度的进一步提升，使保鲜液酸度增大，会影响到蜂王幼虫的口感，进而影响蜂王幼虫的进一步加
工中的处理难度，综合考虑我们选取0.75%为柠檬酸的最佳配比浓度。

根据正交实验确定最优保鲜液配比：乙醇75%，蜂胶提取物0.15%，柠檬酸
0.75%，按照1.2的方法进行保鲜操作，测定蜂王幼虫的TVB-N值，以实验天数
为横坐标，以测得的TVB-N值为纵坐标作图，如图3所示。

据拟合方程计算出TVB-N为150 mg/kg的保鲜天数为9.90 d，该结果与正交实验最大保鲜天数基本一致，可见本实验所确定的最佳保鲜液配比较为可靠。

实验结果表明蜂王幼虫保鲜液的最佳配比为：乙醇75%、蜂胶提取物0.15%、柠
檬酸0.75%，在此条件下蜂王幼虫在30℃、湿度80%的环境下可以保鲜9.90 d。

该天数基本可以满足蜂王幼虫从生产到加工环节的需要。

本实验是在实验室恒温恒湿箱中进行，恒温箱内湿度控制在80%，但实验中幼虫
是浸泡在封闭的三角瓶中，环境湿度对蜂王幼虫保鲜的影响难以体现。

生产实践中的环境条件与实验室环境有着诸多不同，该保鲜液保鲜效果还有待逐级放大，在实际应用中进一步验证。

【相关文献】
[1] 陈崇羔,刘后贵，赵斌，蒋小光.蜂胶提取物柠檬酸保鲜液对蜂王幼虫的保鲜效果[J].福建农林大
学学报(自然科学版)，2000，29(1)：99-102.
[2] 袁泽良，冯峰.蜂产品加工与保健[M].北京：科学技术文献出版社，2002.
[3] 黄坚.开发蜂蛹产品前景广阔[J].中国养蜂,2002，53(3)：17.
[4] 许喜兰.蜂王幼虫的营养与医疗保健作用[J].养蜂科技，2003(5)：37.
[5] 翟爱华，黄明海，贾建，刘恒芝.蜂幼虫分离蛋白提取研究[J].食品信息与技术，2004，12(2)：40.
[6] H ERRM ANNM，KANBARG，ENGELSW.Survival of honey bee(A pis mellifera)pupae after trypan blue staining of wounds caused by Varroa destructor mites or artificial perforation[J].A pidologie，2005，36(1)：107-111.
[7] 潘秋月，洪伯铿，孟祥河.蜂胶提取物在食品保鲜中的应用[J].中国食品添加剂，2004(1)：81-82.
[8] 钟业俊.有机酸对水果的保鲜作用[D].南昌：南昌大学，2007.
[9] ZHOUB，YEM，ZHANGK.Studies on the Artificial Feeding Conditions of Queen Bee Larvae[J].Journal of Biological Sciences，2008，8(5)：950-953.
[10] 潘丽军，陈锦权.实验设计与数据处理[M].南京：东南大学出版社，2008.
[11] 殷客卿，杨寒冰，陈晶，谈军，王悦，段钟平，孔明.蜂王幼虫的营养成分分析[J].蜜蜂杂志，2010，30(7)：3-6.
[12] 饶波.蜂王幼虫的研究进展[J].江西化工，2012(4)：39-41.。