软枣猕猴桃“桓优1号”组培繁殖技术研究

软枣猕猴桃“桓优1号”组培繁殖技术研究
邓践
【摘要】以“桓优1号”软枣猕猴桃嫩茎段为外植体,研究了外植体诱导扩繁的最佳条件.结果表明,消毒处理以75％酒精20 s+0.1％ HgCI22 min+75％酒精20
s+0.1％ HgCl2 2 min为好,污染率2.8％;最佳初代培养基为MS+6-BA l.5 mg· L-1+NAA 0.1 mg· L-1;最佳增殖培养基为MS+6-BA0.5 mg·L-1+IBA 0.05 mg·L-1,增殖系数5.0.最佳生根培养基为1/2MS+IBA 0.2 mg· L-1,生根率为93.3％.
【期刊名称】《辽宁林业科技》
【年(卷),期】2016(000)003
【总页数】4页(P12-14,42)
【关键词】软枣猕猴桃;“桓优1号”;初代培养;增殖培养
【作者】邓践
【作者单位】丹东市林业科学研究院,辽宁丹东118000
【正文语种】中文
【中图分类】S722.37
软枣猕猴桃（Actinidia arguta）为猕猴桃科猕猴桃属落叶藤本，分布于东北、华北、西北及长江流域，喜凉爽湿润气候，常着生于阴坡的针阔混交林和杂木林内，或阳坡水分充足的山沟溪流旁；多攀缘在阔叶树上，枝蔓健壮，萌芽力、成枝力强，丰产性好，具有较强的抗寒性和抗病性。

软枣猕猴桃因其潜在的营养价值和商用价值而具有广阔的国内外市场，是极具开发前景的第三代水果之一。

刘小刚等采用软
枣猕猴桃外植体的叶片、茎段及试管苗的叶片等器官进行了组织培养技术研究[1-4]；而栽培品种“桓优1号”采用组培技术快速繁殖的报道较少。

本研究选择软
枣猕猴桃“桓优1号”为试材，对“桓优1号”软枣猕猴桃组织培养诱导扩繁技
术进行了深入研究，为该品种组培快繁及推广应用奠定基础。

1.1 试验材料
11月中旬，选取生长健壮的“桓优1号”软枣猕猴桃健壮休眠枝条，剪成约50 cm长的茎段，包扎成捆，用沙子埋于-4～4℃的地窖中，沙子以握之成团、松之
分散为宜。

60 d后取出，用清水洗净，去除基部较老和顶梢细弱部分，放入罐中
水培催芽，温度控制在16～20℃，15 d左右腋芽陆续萌发。

待腋芽萌发至5 cm，剪取进行试验。

1.2 消毒方法
腋芽萌发5 cm后，将嫩茎段剪成1.5 cm的带芽茎段，放入小烧杯中罩纱布后，
流水冲洗30min左右。

在超净工作台上，用75%酒精和0.1%HgCl2灭菌，最后用无菌水冲洗5～7次。

1.3 培养方法
初代培养、增殖培养以MS为基本培养基，添加不同浓度的细胞分裂素和生长素，蔗糖30 g·L-1，琼脂7.5 g·L-1，pH值调至6.0。

1.3.1 诱导培养
将消毒灭菌的带嫩芽茎段剪去两端多余部分，即1.5 cm左右1芽1段，在无菌条件下将其接种于初代培养基中。

每个处理3次重复，每个重复接种6瓶，每瓶接
种2个。

25 d后观察腋芽萌发及生长情况，统计污染率、褐化率和萌发率。

1.3.2 增殖培养
待茎段腋芽伸长生长至4～5 cm，将其从基部剪下，剪成长1.5 cm左右的1芽1叶1段，分别转接于增殖培养基，每个处理3次重复，每重复接种6瓶，每瓶接
种4～6个。

25 d后观察芽苗增殖情况。

1.3.3 生根培养
将5 cm以上的健壮新梢苗转接到添加IBA（0.1、0.2、0.3、0.5、0.6mg·L-1）
的1/2MS培养基中。

每个处理3次重复，每重复接种6瓶，每瓶接种2个。

1.3.4 培养条件
白天温度25±1℃，夜间温度20±1℃，每天光照16 h，光强2 000～3 000 lx。

1.4 炼苗移栽
移栽前，将生根后的试管苗培养瓶移入到温室内，增加光照，并逐渐打开培养瓶盖，降低瓶内湿度。

7 d左右取出健壮的生根苗，用清水洗净培养基，在温室内移栽到1∶4的珍珠岩和草炭土中。

2.1 不同灭菌处理对外植体的影响
接种后第6天，灭菌不彻底的茎段开始出现污染现象。

从表1可以看出，75%酒
精30 s+0.1% HgCl28m in没有污染，75%酒精20 s+0.1%HgCl22 m in+75%
酒精20 s+0.1%HgCl22 min次之；而75%酒精30 s+0.1%HgCl28m in出现褐化现象，其它几个处理均没有褐化。

因此75%酒精20 s+0.1% HgCl22m in+75%酒精20 s+0.1%HgCl22min为“桓优1号”软枣猕猴桃最适消毒方法。

2.2 诱导培养
外植体在芽诱导培养基上培养第3天腋芽部位开始变红，1周后腋芽萌发；约14
d茎段长出绿色小叶。

从表2可以看出，不同浓度的6-BA、NAA均能诱导外植体腋芽萌发，其中6-BA 1.5mg·L-1、NAA 0.1mg·L-1的萌发率达到92%，平均株高2.6 cm，显著优于
其它处理，所以“桓优1号”软枣猕猴桃腋芽萌发的最适诱导培养基为MS+6-BA
1.5mg·L-1+ NAA 0.1mg·L-1。

2.3 增殖培养
增殖培养1周后，腋芽开始萌发，第25天观察记录生长情况，每个激素组合随机抽取6瓶测量株高，计算增殖系数，结果见表3、4。

由表3、表4可以看出，不同浓度的6-BA和NAA、IBA均能诱导出丛生芽。

当
6-BA浓度低于0.5mg·L-1时，植株矮小、长势缓慢；6-BA浓度高于0.5mg·L-1时，长势较快，6-BA为0.5mg·L-1时，其组培苗生长显著优于其它处理。

NAA较IBA组培苗根量多，叶片大，木质化程度高，长有较多白色茸毛的无效根；IBA较NAA长势快、植株高，叶片趋于正常，所以IBA是芽苗增殖的最佳生长素，且浓度为0.05mg·L-1时，平均株高3.2 cm，增殖系数5.0，显著优于其它处理。

综上所述，“桓优1号”软枣猕猴桃增殖的最佳增殖培养基是MS+6-BA
0.5mg·L-1+IBA 0.05mg·L-1。

2.4 生根培养
生根培养1周后，芽苗基部陆续出现根状突起，呈放射性状，部分发红。

30 d后，发现IBA质量浓度大于0.3mg·L-1时，出现愈伤组织，且随IBA浓度增大愈伤组
织增多，而愈伤组织上长出的根较长且细弱，根系生长情况见表5。

由表5可以看出，IBA浓度为0.2mg·L-1时生根率最高，达93.3%，且无愈伤组
织产生，产生的根较壮且多，所以“桓优1号”软枣猕猴桃最佳生根的培养基为
1/2MS+IBA 0.2mg·L-1。

2.5 炼苗
将组培苗移栽至1∶4的珍珠岩和草炭土中，用塑料膜覆盖1周以增加空气湿度，棚内温度控制在15～28℃，湿度控制在70%以上，定期浇施营养液。

15 d后成
活率90%以上，且成活的“桓优1号”长势良好，生长健壮。

以“桓优1号”软枣猕猴桃嫩茎段为外植体，研究外植体诱导的消毒处理及不同
激素种类、浓度对外植体初代培养、增殖培养的影响。

结果表明：“桓优1号”
软枣猕猴桃的嫩茎段对HgCl2较为敏感，灭菌时间要求较严格，容易出现褐化现
象，最佳消毒处理为75%酒精20 s+0.1%HgCl22min+75%酒精20
s+0.1%HgCl22m in。

外植体最佳诱导培养基为MS+6-BA 1.5mg·L-1+NAA 0.1mg·L-1。

最佳增殖培养基MS+6-BA 0.5mg·L-1+IBA 0.05mg·L-1，增殖系数5.0。

最佳生根培养基为1/2MS+IBA 0.2mg·L-1，生根率达93.3%。

我国野生猕猴桃资源丰富，目前国内外已有许多软枣猕猴桃优良品种的人工繁殖获得成功[5-8]，虽然市场上已有一些人工繁殖并开发利用的品种，但是仍满足不了市场需求。

本试验研究“桓优1号”软枣猕猴桃的组培诱导扩繁技术，为软枣猕猴桃及其优良品种的开发利用和工厂化育苗奠定了基础。

【相关文献】
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