耐甲氧西林金葡菌检测方法比较
合集下载
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
论 ： Ｐ ＣＲ技 术检 测 ＭＲＳ Ａ 快 速 且敏 感 性 和 特 异 性 强 ，可 作 为 首选 鉴 别 方 法 。 头 孢 西 丁纸 片扩 散 法 使 用 方 法 简 单 ，对 实验 条 件 无 特 殊 要 求 ，较 苯 唑 西林 纸 片扩 散 法结 果 更 准确 。 【 关 键 词 】 耐 甲氧 西林 金 葡 菌 ； 头孢 西 丁 纸 片 扩散 法 ； 苯唑 西 林 纸 片 扩散 法 中 图分 类 号 ： Ｒ ４ ４ ６ 文献标识码 ： Ｂ 文 章 编 号 ：２ ０ ９ ５ — ５ ２ ０ ０（ ２ ０ １ ５） ０ １ — ０ ７ ４ — ０ ２
１ ． ３ ． １ 头 孢 西 丁 纸 片扩 散 法 将 金 葡 萄 菌 样 本 调制 成 １ ． ５ ×１ ０ Ｃ Ｆ Ｕ／ ｍＬ浓 度 ，并 涂 抹 于 ４ ａｍ 厚 的 ＭＨ ｒ 琼脂 平板 上 ，将 头孢西 丁纸 片贴 于平 板上 ，３ ５ ℃温度 下孵 化 ２ ４ ｈ 。抑 菌 圈直 径 ≥ １ ３ ａｍ 为 敏感 ，≤ １ ｒ ０ ｍｍ 为 耐药 。 １ ． ３ ． ２ 苯 唑 西林 纸 片扩 散 法 金 葡 萄 菌 样 本 调制 为 １ ． ５ ×１ ０ Ｃ Ｆ Ｕ ／ ｍＬ浓 度操 作 ，将 调 制后标 本涂 抹 于 ４ ｍｍ 厚 ＭＨ琼 脂 平 板 上 ，将 苯唑 西 林 纸 片贴 于 琼脂 板 上 ，３ ５ ｃ ｃ 温度 下孵 化 ２ ４ ｈ 。抑 菌 圈直 径 ≥ ２ ０ ｍｍ 为 敏感 ，≤ １ ８ ｍｍ 为耐 药 。 １ ． ３ ． ３ 基因聚合酶链反应 （ Ｐ Ｃ Ｒ）法 将 金 葡 萄 菌 样 本 调制 成 ３ ×１ ０ Ｃ Ｆ Ｕ ／ ｍＬ浓 度 ，取 １ ０ １ ｘ Ｌ菌悬 液 ， 滴入 ５ ０ Ｉ ｘ Ｌ Ｄ ＮＡ提取液 ，操作按 Ｐ Ｃ Ｒ操作说明书进 行 。于 １ ０ ０ ℃下行 水 浴 １ ５ ｍｉ ｎ ，２ ０ ０ ０ ０ ｒ ／ ｍｉ ｎ 离 心 ，离 心 时 间为 １ ０ ｍｉ ｎ ，去 除 杂 质 ，取 ５ Ｌ上 清 液 扩 增 。 取 １ ０ １ ｚ Ｌ扩增 液置 于 ２ ． ０ ％ 琼脂 糖 的 Ｔ Ｒ Ｂ缓 冲 系统 中 电泳 ，于紫外透射下检测。出现 １ ０ ０ ０ ｂ ｐ 条带判定为
ＤＯＩ ：１ ０． １ １ ８ ７ ６ ／ ｍｉ ｍｔ ２ ０ １ ５ ０ １ ０ ２ ６
金 黄 色 葡 萄 球 菌 是 临床 常 见 的高 毒 性 细 菌 ，是 肺炎 、肠 炎 、心 包炎 、脓 毒症 以及 局部 化脓 炎症 主要
公 司生产 。电泳ຫໍສະໝຸດ 检测装 置英 国 Ｂ Ｂ Ｌ公 司生产 。
头 孢 西 丁纸 片 、苯 唑 西 林 纸 片 、抗 菌 药 物 纸 片 购 自中国生 物 制 品研 究 所 ，抗 菌 药 物纸 片 主要 包 括 ：
１ ． ４ 统 计方 法
青霉素 、 罗红霉素 、 阿奇霉素 、 头孢噻肟 、 万古霉素 、 克林 霉 素 、头孢 呋辛 、奈 替米 星 、阿 米卡 星 、培氟 沙
１ ． ３ 实验 方 法
病原菌 … 。部分金黄色葡萄球菌产生青霉素酶 ，能水 解 １ ３ ． 内酰 胺环 ，表现 为对 青 霉 素 的耐药 】 。随后研
发 出 的甲氧 西林 为耐 青霉 素酶 的半 合成 青霉 素 ，但 耐 甲氧 西林 金 葡菌 （ ＭＲ Ｓ Ａ）已成 为全世 界范 围内的重 要病 原 菌 ［ ］ ］ 。 目前对 ＭＲＳ Ａ 的 检测 主要 围绕 耐 药表 型及 基 因型进 行 ，为 此 ，我们 对美 国临床实 验室 标准 化委 员会 （ ＮＣ Ｃ Ｌ Ｓ） 推荐 鉴 定 Ｍ Ｒ Ｓ Ａ 的头 孢西 丁纸 片扩 散 法 和 苯 唑西 林 纸 片扩 散 法 与 Ｐ ＣＲ检 测 法 进行 了 比较 ，以 寻找 适 合 医 院实 验 室 检测 ＭＲＳ Ａ 的 简单 而可 靠方 法 。
２ ０ １ ５ 年
第２ １ 卷 第 １ 期
ＷＷＷ ． ｍｉ ａ ｍｔ ． ｃ ｏ ｎ ｒ
耐 甲氧西林金葡菌检 测方法 比较
黎 文君
（ 四川 广安 市人 民 医院检验科 ，四川广元
【 摘
６ ３ ８ ０ １ １ ）
要】 目的 ： 研 究 比较 不 同方 法检 测 （ ＭＲＳ Ａ）的 效果 。方法 ：将 从 临床 感 染标 本分 离获得
测定 １ ４ ８株 葡萄球 菌对青霉素 、红 霉素等 １ ０多种抗 菌药物的 药物敏 感性 。结 果 ：头孢 西丁纸片法对 ＭＲＳ Ａ 的检 测灵敏 度为 ９ ３ ． １ ８ ％， 特异度为 ９ ５ ％， 漏诊 率为 ６ ． ８ ２ ％， 误诊率为 ５ ％， Ｙ ｏ ｕ ｄ ｅ ｎ指数为 ０ ． ８ １ ８ ； 苯唑 西林纸 片法对 ＭＲ Ｓ Ａ的检 测灵敏度 为 ８ １ ． ８ ２ ％，特异度 为 ７ ６ ． ６ ７ ％，漏诊 率为 １ ８ ． １ ８ ％，误诊 率为 ２ ３ ． ３ ３ ％，Ｙ ｏ ｕ ｄ ｅ ｎ指数为 ０ ． ５ ８ ５ ，说 明苯唑西林纸片法对 ＭＲ Ｓ Ａ的检测准确性低 于头孢 西丁纸片法。结
阳性 。
１ 资 料 与 方 法
１ ． １ 菌 株来 源 本次研 究全部 １ ８ ８ 株 金黄色葡萄球菌菌株取 自 于２ ０ １ ３ 年我 院各 临床 科 室 ，其 来 源主 要为 患者 痰液 、 咽拭子 、深静 脉置 管 、患者 脓液 、血 液 、尿 液 、坏死
组织。 １ ． ２ 材 料
的 １ ４ ８株 金 葡 菌 菌 株 分 别 采 用 头 孢 西 丁 、 苯 唑 西林 纸 片扩 散 法 、基 因 聚 合 酶 链 反 应 （ Ｐ ＣＲ）法检 测 ＭＲＳ Ａ 菌株 ， 以采 用基 因聚 合 酶 链 反 应 （ Ｐ ＣＲ）法 作 为判 断 ＭＲＳ Ａ的 “ 金 ” 标 准 。 并 用 琼 脂 稀 释 法
１ ． ３ ． １ 头 孢 西 丁 纸 片扩 散 法 将 金 葡 萄 菌 样 本 调制 成 １ ． ５ ×１ ０ Ｃ Ｆ Ｕ／ ｍＬ浓 度 ，并 涂 抹 于 ４ ａｍ 厚 的 ＭＨ ｒ 琼脂 平板 上 ，将 头孢西 丁纸 片贴 于平 板上 ，３ ５ ℃温度 下孵 化 ２ ４ ｈ 。抑 菌 圈直 径 ≥ １ ３ ａｍ 为 敏感 ，≤ １ ｒ ０ ｍｍ 为 耐药 。 １ ． ３ ． ２ 苯 唑 西林 纸 片扩 散 法 金 葡 萄 菌 样 本 调制 为 １ ． ５ ×１ ０ Ｃ Ｆ Ｕ ／ ｍＬ浓 度操 作 ，将 调 制后标 本涂 抹 于 ４ ｍｍ 厚 ＭＨ琼 脂 平 板 上 ，将 苯唑 西 林 纸 片贴 于 琼脂 板 上 ，３ ５ ｃ ｃ 温度 下孵 化 ２ ４ ｈ 。抑 菌 圈直 径 ≥ ２ ０ ｍｍ 为 敏感 ，≤ １ ８ ｍｍ 为耐 药 。 １ ． ３ ． ３ 基因聚合酶链反应 （ Ｐ Ｃ Ｒ）法 将 金 葡 萄 菌 样 本 调制 成 ３ ×１ ０ Ｃ Ｆ Ｕ ／ ｍＬ浓 度 ，取 １ ０ １ ｘ Ｌ菌悬 液 ， 滴入 ５ ０ Ｉ ｘ Ｌ Ｄ ＮＡ提取液 ，操作按 Ｐ Ｃ Ｒ操作说明书进 行 。于 １ ０ ０ ℃下行 水 浴 １ ５ ｍｉ ｎ ，２ ０ ０ ０ ０ ｒ ／ ｍｉ ｎ 离 心 ，离 心 时 间为 １ ０ ｍｉ ｎ ，去 除 杂 质 ，取 ５ Ｌ上 清 液 扩 增 。 取 １ ０ １ ｚ Ｌ扩增 液置 于 ２ ． ０ ％ 琼脂 糖 的 Ｔ Ｒ Ｂ缓 冲 系统 中 电泳 ，于紫外透射下检测。出现 １ ０ ０ ０ ｂ ｐ 条带判定为
ＤＯＩ ：１ ０． １ １ ８ ７ ６ ／ ｍｉ ｍｔ ２ ０ １ ５ ０ １ ０ ２ ６
金 黄 色 葡 萄 球 菌 是 临床 常 见 的高 毒 性 细 菌 ，是 肺炎 、肠 炎 、心 包炎 、脓 毒症 以及 局部 化脓 炎症 主要
公 司生产 。电泳ຫໍສະໝຸດ 检测装 置英 国 Ｂ Ｂ Ｌ公 司生产 。
头 孢 西 丁纸 片 、苯 唑 西 林 纸 片 、抗 菌 药 物 纸 片 购 自中国生 物 制 品研 究 所 ，抗 菌 药 物纸 片 主要 包 括 ：
１ ． ４ 统 计方 法
青霉素 、 罗红霉素 、 阿奇霉素 、 头孢噻肟 、 万古霉素 、 克林 霉 素 、头孢 呋辛 、奈 替米 星 、阿 米卡 星 、培氟 沙
１ ． ３ 实验 方 法
病原菌 … 。部分金黄色葡萄球菌产生青霉素酶 ，能水 解 １ ３ ． 内酰 胺环 ，表现 为对 青 霉 素 的耐药 】 。随后研
发 出 的甲氧 西林 为耐 青霉 素酶 的半 合成 青霉 素 ，但 耐 甲氧 西林 金 葡菌 （ ＭＲ Ｓ Ａ）已成 为全世 界范 围内的重 要病 原 菌 ［ ］ ］ 。 目前对 ＭＲＳ Ａ 的 检测 主要 围绕 耐 药表 型及 基 因型进 行 ，为 此 ，我们 对美 国临床实 验室 标准 化委 员会 （ ＮＣ Ｃ Ｌ Ｓ） 推荐 鉴 定 Ｍ Ｒ Ｓ Ａ 的头 孢西 丁纸 片扩 散 法 和 苯 唑西 林 纸 片扩 散 法 与 Ｐ ＣＲ检 测 法 进行 了 比较 ，以 寻找 适 合 医 院实 验 室 检测 ＭＲＳ Ａ 的 简单 而可 靠方 法 。
２ ０ １ ５ 年
第２ １ 卷 第 １ 期
ＷＷＷ ． ｍｉ ａ ｍｔ ． ｃ ｏ ｎ ｒ
耐 甲氧西林金葡菌检 测方法 比较
黎 文君
（ 四川 广安 市人 民 医院检验科 ，四川广元
【 摘
６ ３ ８ ０ １ １ ）
要】 目的 ： 研 究 比较 不 同方 法检 测 （ ＭＲＳ Ａ）的 效果 。方法 ：将 从 临床 感 染标 本分 离获得
测定 １ ４ ８株 葡萄球 菌对青霉素 、红 霉素等 １ ０多种抗 菌药物的 药物敏 感性 。结 果 ：头孢 西丁纸片法对 ＭＲＳ Ａ 的检 测灵敏 度为 ９ ３ ． １ ８ ％， 特异度为 ９ ５ ％， 漏诊 率为 ６ ． ８ ２ ％， 误诊率为 ５ ％， Ｙ ｏ ｕ ｄ ｅ ｎ指数为 ０ ． ８ １ ８ ； 苯唑 西林纸 片法对 ＭＲ Ｓ Ａ的检 测灵敏度 为 ８ １ ． ８ ２ ％，特异度 为 ７ ６ ． ６ ７ ％，漏诊 率为 １ ８ ． １ ８ ％，误诊 率为 ２ ３ ． ３ ３ ％，Ｙ ｏ ｕ ｄ ｅ ｎ指数为 ０ ． ５ ８ ５ ，说 明苯唑西林纸片法对 ＭＲ Ｓ Ａ的检测准确性低 于头孢 西丁纸片法。结
阳性 。
１ 资 料 与 方 法
１ ． １ 菌 株来 源 本次研 究全部 １ ８ ８ 株 金黄色葡萄球菌菌株取 自 于２ ０ １ ３ 年我 院各 临床 科 室 ，其 来 源主 要为 患者 痰液 、 咽拭子 、深静 脉置 管 、患者 脓液 、血 液 、尿 液 、坏死
组织。 １ ． ２ 材 料
的 １ ４ ８株 金 葡 菌 菌 株 分 别 采 用 头 孢 西 丁 、 苯 唑 西林 纸 片扩 散 法 、基 因 聚 合 酶 链 反 应 （ Ｐ ＣＲ）法检 测 ＭＲＳ Ａ 菌株 ， 以采 用基 因聚 合 酶 链 反 应 （ Ｐ ＣＲ）法 作 为判 断 ＭＲＳ Ａ的 “ 金 ” 标 准 。 并 用 琼 脂 稀 释 法