肿瘤标志物77

癌胚蛋白（carcinoembryonic antigen, CEA）
来源及分布
癌胚蛋白是从结肠癌中分离出来的一组酸性糖蛋
白，由胆管上皮细胞合成。该蛋白在胚胎期含量较高，而成 人则含量较低，小于2.5μg/L 。CEA在正常组织中的表达包 括有结肠、胃、小肠和胆囊的上皮细胞。免疫组化染色阳性 表达部位均位于表面上皮细胞的刷状缘，呈线状分布。
CA19-9：CA19-9是1979年Koprowski等用结肠癌细胞免 疫小鼠，并于骨髓瘤杂交所得116NS19-9单克隆抗体。 CA19-9是一种糖脂，正常人血清中小于37U/ml，85％-95 ％的胰腺癌患者该项指标较高。手术切除肿瘤后，CA199浓度会下降，如再上升，则可表示复发。结直肠癌、胆 囊癌、胆管癌、肝癌和胃癌的阳性率也会很高，若同时 检测CEA和AFP可进一步提高阳性检测率。
chorionic gonatotropin, HCG）免疫组化染色，以排除 其他类型的肿瘤；
一些非肝性肿瘤如肺癌、乳腺癌和胃肠癌，尤其是胃
肝样腺癌，AFP可呈阳性反应。
AFU α-L岩藻糖苷酶（α-L-fucosidase，AFU）：是一种溶酶 体酸性水解酶，是原发性肝癌的一种新的诊断标志物， 广泛分布于人体组织细胞、血液和体液中，参与体内糖 蛋白、糖脂和寡糖的代谢。原发性肝癌患者血清AFU活 力显著高于其它各类疾患（包括良、恶性肿瘤）。
清 AFP 应降至正常成人水平。正常成人血清中的含量
极低，为5.8μg/L以下，男性略高于女性。恶性肿瘤的 成人，妊娠第2-3个月或患有肝硬化、肝坏死患者血清 中AFP水平可升高。 AFP是原发性肝癌的最灵敏、最 特异的肿瘤标志，血清AFP测定结果大于500μg/L以上， 或含量有不断增高者，更应高度警惕。
主要用途 AFP主要用于原发性肝细胞癌和性腺或性腺外
某些生殖细胞肿瘤（如内胚窦瘤）的诊断和鉴别诊断。
值得注意的是 AFP 在肝癌组织中的阳性表达只占 60% 左右，部分病例则为阴性，而一些非肿瘤性肝病变
（如肝硬化和肝炎）肝细胞以及肝转移性肿瘤的癌旁
肝细胞亦有 AFP 表达。后者 AFP 的来源有三种可能性， 一是癌旁肝细胞自己合成；二是癌旁肝细胞从癌灶内 吸收AFP；三是上述两种情况都有。
2 、 PAP 法和 APAAP 法
过氧化物酶 - 抗过氧化物酶法
（PAP）和碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶法（APAAP）的 原理是：应用抗酶抗体与酶结合，形成可溶性的、稳 定的酶-抗酶抗体复合物。
3、ABC法 将亲合素（A）与生物素（B）标记的过氧化 物酶结合，形成可溶性的亲合素 - 生物素化酶复合物 （ avidin-biotin-peroxidase complex, ABC ）。当其与
肿瘤标志物及临床应用
一、基本概念
肿瘤标志物Tumor Marker是指由肿瘤细胞产生、反映肿瘤 存在和生长的一类物质。 在恶性肿瘤发生和增殖过程中，由肿瘤细胞的基因表达而 合成分泌的或是由机体对肿瘤反应而异常产生和/或升高的 物质，包括蛋白质、激素、酶（同工酶）及癌基因产物等。
肿瘤标记物的特点 1、存在于肿瘤细胞的胞核、胞质和胞膜上或分泌在 体液中； 2、有些不存在于正常成人组织而见于胚胎组织； 3、有些在肿瘤组织中的含量超过正常组织的含量。 肿瘤标志物的存在或含量的变化可以提示肿瘤的性 质并有助于了解肿瘤的组织起源和细胞分化，从而
内外分泌腺的腺泡细胞和导管上皮细胞及其分泌物均见有 CEA表达，而皮脂腺、皮肤鳞状上皮细胞和宫颈、食管及
鼻咽粘膜的鳞状上皮细胞不含CEA。CEA偶见于良性上皮
性肿瘤及癌前病变组织中，而在许多癌组织中则有大量表 达，如胃肠道及胰腺癌、肺癌及甲状腺髓样癌。
主要用途
CEA与EMA一样均可作为上皮性肿瘤的重要
1929年，Hirszfeld报道在肿瘤组织中发现了胚胎性特殊物质。
1943年，Gross论证了关于肿瘤组织的抗原性。 1952年，Bjorklund将56种肿瘤组织的提取液混合后注入马体内，产
生了抗血清，从而进一步发现了肿瘤组织比正常组织具有更强的
抗原性。 1957年，他将这些最初广泛应用的肿瘤标志物定义为组织多肽抗原。
Ziler（1958年）在胎儿组织中发现了甲胎蛋白（AFP）。 Goldt 和 Freedman （ 1965 年）从结肠癌的提取液中发现了癌胚抗原 （CEA）。
1975年，Kohler和Milstein用细胞融合法成功地制备了单克隆抗体，
这就为研究肿瘤标志物提供了更有意义的手段。 80年代以后，用于肿瘤细胞抗原分析的单克隆抗体（ Mab）大量涌 现，高敏感的免疫组化技术（IH）应运而生。 生物化学、免疫学及分子生物学等方法的建立加速了肿瘤标志物研 究的发展。
可以帮助肿瘤的病理诊断、组织学分类、判断预后 及指导临床治疗。
二、肿瘤标志物的发展简史
早在1845年，英国的 Maclntire首先发现了肿瘤标志物，并于1847年 由 Bence Jones 称 之 为 “ 白 蛋 白 样 物 质 ” （ Albumin-like substance）。
1889年，Kahler将其分类为“复合骨髓瘤”的一种分解产物。
免疫组化结果的判断原则 ①必须设染色对照 ②抗原表达必须在特定部位 不在抗原所在部位的阳性表达一概不能视为阳性 ③阴性结果不能视为抗原不表达 ④对免疫组化标记结果的意义不能绝对化
假阴性结果的原因主要是 ①抗体已失活或浓度不当或抗体本身达不到应有的敏感 度； ②由于组织自溶，抗原扩散而导致抗原消失，特别在长
CA125：CA125是1983年Bast等从上皮性卵巢癌监测出可被
单克隆抗体OC125结合的一种糖蛋白。
CA125是上皮性卵巢癌和子宫内膜癌的标志物，正常人血 清中小于35U/ml。胰腺癌、肝癌、乳腺癌和子宫内膜炎， 急性胰腺炎、腹膜炎、肝炎、肝硬化腹水也可使CA-125升 高，CA-125升高还与肿瘤复发有关。
应用中的注意事项 AFP阴性不能排除肝细胞癌的诊断，
应进一步作丙氨酸转氨酶（alannine aminotransferase, ATT）免疫组化或结合血清学检查结果加以判断； 发生在骶尾部、腹膜后、纵隔或松果体的一些生殖细 胞肿瘤，在常规HE染色中常常诊断为未分化癌，因此
有 必 要 作 AFP 或 人 绒 毛 膜 促 性 腺 激 素 （ human
期固定的标本中因抗原漏出而致假阴性，因此多用新
鲜固定之标本； ③操作步骤不当，如反应时间不够或过久、洗脱不够或 温度过高； ④组织或细胞中抗原的含量过低，所用方法难以检测到， 如用直接法检测为阴性，但改用间接法时则为阳性。
假阳性结果的主要原因是 ①所用的抗体与其他无关的抗原有交叉反应，特异性差， 特别在应用多克隆抗血清时更易出现； ②所用的抗体浓度过高或染色过程中切片干燥导致抗体 与组织产生非特异性结合； ③组织或细胞中有内源性过氧化物酶、碱性磷酸酶及生 物素等产生非特异性显色； ④组织中含有残存的正常组织，如软组织肿瘤浸润至骨 骼肌或神经组织，当用抗 myoglobin 抗体或抗 S-100 蛋 白抗体时，易误诊为横纹肌肉瘤或来源于神经的肿瘤； ⑤由于肿瘤侵犯正常组织与细胞，导致其胞质内可溶性 蛋白质释放于组织间隙中，并为肿瘤细胞非特异性吸 收或吞噬。
三、肿瘤标志物检测的意义
1、确定肿瘤的组织发生
2、异位肿瘤和转移性肿瘤的鉴别
3、辅助识别肿瘤的良恶性，癌前病变与癌
4、对肿瘤细胞增生程度的评价
5、辅助肿瘤分期： 在判断肿瘤是原位还是有浸润发生以及有无血管、淋巴管的侵 袭是与肿瘤分期密切相关的。 例如用层粘连蛋白（laminin）和Ⅳ型胶原的单克隆抗体可清楚显 示基底膜的主要成分。一旦证实癌细胞突破了基底膜，就不是原 位癌，而是浸润癌了，其预后意义是不同的。
动态观察；及时发现癌肿的复发与转移。
当CEA高于20μg/L时，则意味着可能有消化道肿瘤。 应用时的注意事项： CEA阳性不能作为确认肿瘤的组织来源标记； CEA不能用作良、恶性上皮性肿瘤的鉴别诊断； 不论是单克隆还是多克隆抗CEA抗体，在某些肿瘤组织 中可表现有非特异性染色，应注意鉴别。
肿瘤抗原（carcinomic antigen，CA，也可以写作cancer
皮细胞内、分子量为40-70kD的一组蛋白质。 主要用途 角蛋白是上皮细胞及其肿瘤的最佳标记物之一，综合肿
瘤组织形态学，可用于癌与其他恶性肿瘤如未分化癌与淋巴瘤、 上皮性肿瘤与恶性黑色素瘤、胸腺瘤与胸腺淋巴瘤及转移肿瘤等 的鉴别。
上皮膜抗原 来源及分布 上皮膜抗原（epithelial membrane antigen ,EMA）是上 皮细胞分泌的一种人乳中脂肪球膜上提纯的一种糖蛋白，它广泛 存在于各种上皮细胞膜系结构，其分布与细胞角蛋白极为相似， 但对内脏腺上皮优于细胞角蛋白。上皮膜抗原广泛存在于正常上 皮细胞及其肿瘤组织中，也存在于间皮细胞、浆细胞、组织细胞 和 T细胞淋巴瘤中，尤其是分化较差的癌上皮膜抗原有时可呈强 阳性表达。 主要用途 EMA可作为上皮源性肿瘤的常用标记物。EMA阳性表达
生物素标记的抗体（直接法）或抗抗体（间接法）作
用时， ABC中亲合素尚未饱和的位点可与抗体分子上 标记的生物素结合，从而形成一个多级放大体系，有 效提高了酶反应的敏感性。
4、分子生物学方法 PCR PAGE
五、有关肿瘤标志物 （一）上皮组织及其标记物
角蛋白
来源及分布 角蛋白（keratin）属中间丝细胞骨架蛋白，是存在于上
antigen）是肿瘤细胞膜的结构成分，各不相同，为糖蛋 白或糖脂，也叫糖类抗原（carbohydrate antigen， CA）。这类抗原是用单克隆抗体技术从肿瘤细胞系 （株）中鉴定出来的，所以在特定肿瘤的诊断方面具有 较高的准确性。
CA242 CA242是一种唾液酸化的黏蛋白类型的糖抗原，其单克
标记，尤其是它不受肿瘤分化程度的影响，即使是诊断上可与 EMA 、 CK 联合使用，以提 高诊断正确率。 由于 CEA 是一种分泌性抗原，该抗原可由肿瘤细胞分 泌于血液中，可以在血清中测得其抗原水平，故临床 可用于：胃肠道癌的粗筛普查；术前术后的 CEA水平
的肿瘤有鳞状细胞癌、胃肠道腺癌、乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、 间皮瘤、滑膜肉瘤、甲状腺乳头状腺癌、上皮样肉瘤等。
甲胎蛋白（alpha-fetoprotein, AFP） 来源 甲胎蛋白是由胚胎卵黄囊细胞、胚胎肝细胞和胎儿 肠道细胞所合成的一种糖蛋白，分子量为69kD。在妊 娠 5个月时达高峰，出生时下降。胎儿出生后 1 年，血
四、检测方法
1、肿瘤免疫组织化学标记 阳性标记色度特征 肿瘤免疫组织化学标记着色程度取决于抗原含量、分布密度和标记 方法及其敏感性。 淡黄色，提示为弱抗原； 棕黄色，提示为中等度抗原； 棕黑色，提示为强抗原。
胞膜型 胞核型 胞质型 微绒毛型 抗原颗粒主要分布于腺癌细胞的微绒毛。 复合型 在常规免疫组化标记中，同一种抗原可以同时 表达于胞膜和胞质、胞核和胞质、微绒毛和胞质，但 很少发现胞膜和胞核同时表达。
隆抗体是Lindholm 等于1985年通过杂交瘤技术用人结肠 癌细胞株COLO205免疫鼠而得，免疫组化研究发现 CA242在恶性组织如胰腺癌和结肠癌中有明显表达，而 在其他器官的腺癌中亦有轻度表达。
CEA与糖类抗原242（CA242）联合应用目前被认为 是对结肠癌的最佳标志搭配。
CA15-3：CA15-3是1984年Hilkens等从人乳脂肪球膜上 糖蛋白MAM-6制成的小鼠单克隆抗体（115-DB）； 1984年Kufu等自肝转移乳腺癌细胞膜制成单克隆抗体 （DF-3），故命名CA15-3。 由分泌性上皮细胞（如乳腺、肺、胃肠道、子宫的） 分泌，正常人排泄物中也可检出。此抗原虽然没有器 官和肿瘤特异性，在乳腺癌、肺癌、前列腺癌、卵巢 癌和胃肠道癌中指标均有升高（大于30U/ml）。 但可作为监测乳腺癌患者术后复发的最佳指标。在其 它乳腺疾病和部分孕妇（约8%）中CA15-3也有升高。