中药中黄曲霉毒素的检测汇总
黄曲霉毒素的检测
黄曲霉毒素现有检测方法介绍
免疫化学分析方法
➢ 酶联免疫吸附法：快速、简便、单一毒素、假阳性多 ➢ 免疫亲和柱-荧光分光光度法：高效、无毒、假阳性多 ➢ 微柱筛选法 ：半定量，测总量 ➢ 一步式黄曲霉毒素检测金标试纸法 ：快速、现场大批量
初筛
HPLC/MS/MS ：不衍生，灵敏度高，假阳性 少，成本高
中药中黄曲霉毒素药典检测方法详解
方法来源：《中国药典》 年版第二增补 本附录Ⅸ V 黄曲霉毒素测定法
基本步骤 提取 过柱 洗脱 测定
提取 上样
检测流程
样品前处理
过滤除杂
免疫亲和柱 纯化
洗涤
柱后衍生、 HPLC检测
稀释 洗脱
黄曲霉毒素检测主要设备
气孔操作架
免疫亲和柱
黄曲霉毒素检测主要设备
纯品为无色结晶.在紫 外光灯下，B1、B2发 蓝色荧光，G1、G2发 绿色荧光
耐高温，一般烹调 温度不能破坏，B1 的分解温度为 268℃
黄曲霉毒素现有检测方法介绍
薄层层析法：灵敏度低，定量困难 HPLC-紫外检测法：不衍生，灵敏度低，
采用UPLC可以增强灵敏度 HPLC-荧光检测法：需衍生，灵敏度高
微脾柱脏筛 和选胰法脏也：有半轻定➢度量的，病测变总慢。量 性毒性：肝脏损害，呈急性肝炎、出血性
食用干制水果及其制品 2， 急性毒性：比氰化钾大10倍，比砒霜大68倍。
黄黄曲曲霉 霉毒毒素素药的典检检测测意方义法详坏解 死、肝细胞脂肪变性和胆管增生。脾脏和
紫外线对低浓度黄曲霉毒素有一定的破坏性
胰脏也有轻度的病变。 操作中可能出现的问题及注意点
气孔操作架
免亲和柱
黄曲霉毒素检测主要设备
HPLC-荧光检测器
18批中成药黄曲霉毒素的检测
集. 东京 :广川书店 ,1989. 34 6 李玲玲 ,李敏伶 ,何金山. 复方升白灵中黄芪甲甙的薄层扫
描法测定. 药物分析杂志 ,1996 ,16 (1) :28 1998210206 收稿
18 批中成药黄曲霉毒素的检测
刘鹏 杜平华 3 苏德模 (中国药品生物制品检定所 北京 100050)
摘要 目的 :考察中成药中污染 AFB1 的情况 ,为制订标准和科学管理提供依据 。方法 :应用间接 竞争酶联免疫吸附分析法 。结果 :18 批中成药中有不同程度的 AFB1 污染 ,污染率 83 % ,AFB1 的含量 均小于 1μg/ kg。结论 :应用本法检测中成药中污染 AFB1 的方法准确 、快捷 。
3. 2 在检测 AFB1 试验中 ,其结果会受试剂 、 温度和仪器的灵敏度等条件的影响 。因此 , ① 试剂从 4 ℃取出后 ,应在室温放置 30～60min 后 ,方可进行试验 。用完后立即置 4 ℃保存 ,以
表 1 15 批中成药中 AFB1 的含量
样品
古汉养生精片 一清胶囊 桂龙咳喘宁胶囊 常春茶 西瓜霜润喉片 蝮龙抗栓丸 天使护心丹 双黄连片 肝复乐片 健脾降糖精胶囊 1 号 镇咳宁胶囊 三金片
曾试用甲醇超声提取的方法 ,但提出杂质 多 ,净化困难 ,故采用加水提取方法 。
经测定加入 10 倍溶剂量 ,超声 30min ,以
及本文所用的提取次数及洗脱用量 ,可将黄芪
甲甙提取完全 ,洗脱中没有损失 。 《中国药典》1995 年版黄芪含量测定采用
薄层扫描法 ,过大孔吸附树脂柱采用 40 %乙醇 30ml 洗脱 ,经实验发现 ,以 40 %乙醇洗脱可洗 去部分黄芪甲甙 , 故经实验选用 30 %乙醇洗 脱 ,可有效地除去杂质 ,而黄芪甲甙未受损失 。 4 参考文献
版药典中中药材特殊检查品种(农残、重金属、黄曲霉毒素).doc
一寸光阴不可轻
XXXX版药典中药材黄曲霉毒素检查品种
柏子仁、莲子、使君子、槟榔、麦芽、肉豆蔻、决明子、远志、薏苡仁、大枣、地龙、水蛭、蜈蚣、全蝎、陈皮、胖大海、僵蚕、酸枣仁、桃仁等19种中药材品种。
XXXX版药典中药材铅镉砷汞铜重金属检查品种
丹参、水蛭、甘草、白芍、牡蛎、阿胶、昆布、金银花、珍珠、枸杞子、海螵蛸、海藻、蛤壳、黄芪、蜂胶等15种中药材品种
XXXX版药典中药材农药残留检查品种
人参、西洋参等2种中药材品种有机氯农药残留量照农药残留量测定法(通则2341有机氯类农药残留量测定法一第二法)
甘草、黄芪等2种中药材品种有机氯农药残留量照农药残留量测定法(通则2341有机氯类农药残留量测定法一第一法)
1。
2015版药典中药材及饮片需要黄曲霉毒素、重金属及有害元素、农药残留检测品种目录汇总
序号重金属及有害元素 重金属及有害元素 序号黄曲霉毒素黄曲霉毒素序号农药残留农药残留
2010版品种2015版2010版品种2015版2010版
（检测9种）
2015版
（检22种）
1黄芪黄芪1陈皮陈皮1黄芪黄芪
2甘草甘草2桃仁桃仁2甘草甘草
3白芍白芍3酸枣仁酸枣仁新增加4丹参丹参4僵蚕僵蚕3人参
5西洋参西洋参5胖大海胖大海4西洋参6金银花金银花新增加
7枸杞子枸杞子6柏子仁
8山楂山楂7莲子
新增加8使君子
9蛤壳9槟榔
10海螵蛸10麦芽
11海藻11肉豆蔻
12昆布12决明子
13牡蛎13远志
14水蛭14薏苡仁
15珍珠15大枣
16地龙
17蜈蚣
18水蛭
19全蝎。
黄曲霉毒素检测标准方法汇总
流动相的梯度变化表（GBT 5009.23-2006 食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定）
标准方法检出限（GBT 23212-2008）
次氯酸钠溶液（消毒用）：
取100g漂白粉，加入500ml水，搅拌均匀。
另将80g工业用碳酸钠（Na2CO3·10H2O）溶于500ml温水中，再将两液混合、搅拌、澄清后过滤。
此滤液含次氯酸浓度约为25g/L。
若用漂粉精制备，则碳酸钠的量可以加倍。
所得溶液的浓度约为50g/L。
污染的玻璃仪器用10g/L次氯酸钠溶液浸泡半天或用50g/L次氯酸钠溶液浸泡片刻后，即可达到去毒效果。
（GBT 5009.22-2003 食品中黄曲霉毒素B1的测定）
AFT B1标准溶液配制
1 仪器校正，测定重铬酸钾溶液的摩尔消光系数，以求出使用仪器的校正因素f
2 标准溶液配制，配制AFT B1标准溶液，用紫外分光光度计测此溶液最大吸收峰的波长及该波长的吸光度值，计算AFT B1标准液浓度，后用苯-乙腈混合液调到标准液为10.0ug/ml，并用分光光度计核对浓度。
（GBT 5009.22-2003 食品中黄曲霉毒素B1的测定）。
黄曲霉毒素测定法
黄曲霉毒素测定法第一法本法系用高效液相色谱法（附录8）测定药材、饮片及制剂中的黄曲霉毒素（以黄曲霉毒素B1黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2总量计），除另有规定外，按下列方法测定。
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-水（40:18:42）为流动相，采用柱后衍生法检测，①碘衍生法：衍生溶液为0.05%的碘溶液（取碘0.5g，加入甲醇100ml使溶解，用水稀释至1000ml制成），衍生化泵流速每分钟0.3ml，衍生化温度70℃；②以光化学衍生法：光化学衍生器（254nm）；以荧光检测器检测，激发波长λex=360nm （或365nm），发射波长λem=450nm。
两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。
混合对照品溶液的制备精密量取黄曲霉毒素混合标准品（黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2标示浓度分别为1.0μg/ml、0.3μg/ml、1.0μg/ml、0.3μg/ml）0.5ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为储备液。
精密量取储备液1ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得。
供试品溶液的制备取供试品粉末约15g(过二号筛)，精密称定，置于均质瓶中，加入氯化钠3g，精密加入70%甲醇溶液75ml，高速搅拌2分钟（搅拌速度1100转/分钟），离心5分钟（离心速度2500转/分钟），精密量取上清液15ml，置50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，量取续滤液20.0ml，通过免疫亲合柱（AflaT-est@P）,流速每分钟3ml，用水20ml洗脱，洗脱液弃去，使空气进入柱子，将水挤出柱子，再用适量甲醇洗脱，收集洗脱液，置2ml量瓶中，并用水稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法分别精密吸取上述混合对照品溶液5μl、10μl、15μl、20μl、25μl，注入液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线。
中药中黄曲霉毒素的测定
• 1962年，研究发现花生粉中含有一种荧光物质是导致 火鸡死亡的病因，后被证实为黄曲霉的代谢产物， 故命名为“黄曲霉毒素”。
黄曲霉毒素的化学结构
• 黄曲霉毒素是一组化学结构类似的化合物，已 分离鉴定出12种包括B1，B2，G1，G2，M1，
黄曲霉毒素的理化性质
• 稳定性： 对热稳定，分解温度300℃； 紫外线对黄曲霉毒素有一定的破坏作用； 中性和酸性溶液中很稳定， 在强碱（pH9-10）溶液中可迅速分解， 5%的次氯酸钠溶液可瞬时破坏毒素
黄曲霉毒素的危害
• 毒性极强
黄曲霉毒素被世界卫生组织划定为1类致癌 物，毒性比砒霜大68倍，仅次于肉毒霉素， 是目前已知霉菌中毒性最强的。
免疫亲和柱
泵ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ操作架
全自动固相萃取仪 光化学衍生器
HPLC—荧光检测器
四、我国现行法定检测方法
•提取
高速搅拌2分钟 （>11000r/min）
样品+NaCl 3g 70%甲醇75ml
离心5分钟 （2500r/min）
取上清液15ml，置 50ml量瓶中，用水 稀释至刻度
0.45μm滤膜滤 过，取续滤液 20.0ml
陈皮、大枣、柏子仁、、薏苡仁 胖大海、莲子、桃仁、槟榔、麦芽 • 动物类：僵蚕、水蛭、地龙、全蝎、蜈蚣 • 共19种
三、黄曲霉毒素现有检测方法
• 薄层色谱法（TLC）：对仪器要求低， 但前处理繁琐，有机试剂使用量大，灵 敏度低，定量困难；
• 酶联免疫吸附法( ELlSA)：方便快捷，但 部分中药具有与黄曲霉毒素相似的化学 成分，易产生假阳性、假阴性结果。
二、黄曲霉毒素检测药典收载情况
中药材中黄曲霉毒素的测定方法优化及验证（HPLC-FLD）
中药材中黄曲霉毒素的测定方法优化及验证（ HPLC-FLD）2云南白药集团股份有限公司，云南昆明 650500摘要：目的：建立一个用液相色谱法测定中药材中黄曲霉毒素含量的方法。
方法：色谱柱：Agilent XDB-C18(5μm，4.6×250mm)；流动相: 甲醇-乙腈-水（30:16:54）；流量: 0.8 ml/min；荧光检测波长:激发波长360nm,发射波长450nm；柱温:30 ℃。
结果：根据药材基质的不同，优化得出相应满足方法要求的前处理方法并进行了验证。
结论：优化后方法可用于中药材中黄曲霉毒素含量的测定。
关键词：黄曲霉毒素；基质效应；FLD检测器；方法确认黄曲霉毒素（aflatoxins，AFTs）是黄曲霉和寄生曲霉等菌种产生的次生代谢产物[1]，毒性极强，可对肝脏造成不可逆的损害，还严重损害其他多种组织器官，并能致癌、致畸、致细胞突变[2]。
中药的基质背景复杂，色素黏液质及中药中不同有效成分都会给AFTs检测带来不同程度的影响，检测中容易出现假阳性结果，故亟需建立适用于中药检测的特殊前处理方式及结果校正曲线等新的AFTs 检测方法研究。
1仪器与材料1.1 样品：陈皮、肉豆蔻、延胡索、地龙、僵蚕、全蝎、水蛭、蜈蚣、土鳖虫、九香虫、槟榔、莲子、胖大海、大枣、麦芽、远志、马钱子、薏苡仁、柏子仁、桃仁、酸枣仁、使君子、决明子1.2 仪器：美国Agilent液相色谱仪1260(FLD检测器)。
1.3试剂乙腈、甲醇：色谱级；去离子水；氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钾：分析纯。
黄曲霉毒素混合对照品：中国食品药品检定研究院。
2方法与结果2.1色谱条件以C18键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-水（40:18:42）为流动相；采用柱后衍生法检测，光化学衍生法：光化学衍生器（254nm）；检测器为FLD，λex =360nm，λem=450nm。
2.2样品处理取样品粉末15g，精密称定，置于离心管中，加氯化钠3g，精密加入75ml 70%甲醇溶液[3]，11000r/min均质2分钟，离心5分钟，取上清液15ml，置50ml量瓶中加水定容，摇匀，离心，用玻璃纤维滤纸过滤[3]，量取续滤液20ml，通过免疫亲合柱，用淋洗缓冲液20ml洗脱，洗脱液弃去，使柱子暴露在空气中5min，将水吹尽并用快速滤纸擦干亲和柱内壁，加1.5ml甲醇洗脱并收集于2ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液，即得。
中药制剂黄曲霉毒素的检查
０ 引 言
黄 曲霉毒 素 （ ａ ｔ ｆ ｔ 。 ｉ ） 是 黄 曲霉 和寄生 曲霉 的代谢 产物 ， 具 有 极 强 的毒 性 和 致 癌 性 ，其 最 敏 感 的动 物 是 鸭 雏 ，其 Ｌ Ｄ ５ ０为 ０ ． ２ ４ ｍｇ ／ ｋ ｇ 。 此 － － 应还 能 外 。 弓 起 多种动 物发生癌症
，
馏水中充分摇匀） ， 加塞后在６ ５ ℃ 水浴中 反应 ８ 分钟，即得
ｌ ｍｇ ， ／ Ｌ衍生 标样 （ Ｂ 一 、Ｇ ｌ 被 转化 成 Ｂ ２ ａ和 Ｇ ／ ａ ） ，使 用前 根 据 需要 稀释 。 １ ． ２ ． ３ 样 品提 取 ： 称 取 样 品粉 末 １ ０ ｇ ，加 到 ２ ５ ０ ｍＬ具 ４ ５ ） ，在振 荡器 上振 荡提 取 ３ ０分 钟 以上 ，然后 以铺有 ０ ． ５ ｃ ｍ 厚 的助 滤剂 （ ｃ ｅ ｌ ｉ ｔ ｅ ５ ４ ５ ） 的布 氏漏斗 抽滤 ，１ ５ ｍＬ甲醇 一水溶 剂 洗 两 次锥 形 瓶 滤 渣 ，滤 液 一并 转 入 １ ２ ５ ｍＬ分 液漏 斗 中 ， 待 分层后 分 出甲醇 一水层 ，取其 一半体 积 （ ４ ０ ｍＬ ） ，以 ２ ０ ｍＬ 氯仿 萃取 ２次 ，氯仿 层经 装有无水硫 酸 的小漏斗 滤去水分 。 １ ． ２ ． ４ 样 品净 化 ： 用ｌ ｃ ｍ 内径 的玻璃 色谱 柱 ，下 塞脱 脂 棉 ，关 闭活 塞 ，加 入 １ ０ ｍ Ｌ氯仿 ，依次 加 ５ ｇ无水 硫酸钠 ， ０ ． ７ ｇ 弗 罗里硅 土 ， １ ｇ 无水 硫酸钠 ， 打开活塞 ， 使 液面 降至界 面 ， 注入 氯仿萃 取液 ， 控 制每分钟 ６ ０ 滴左右 ，待液 面降至界 面 ， 依次加 ３ ０ ｍＬ氯 仿 一己 烷 （ １： １ ） ，２ ０ ｍＬ氯 仿 一 甲醇 （ ９： １ ）
版药典黄曲霉毒素测定法
2351 黄曲霉毒素测定法第一法1 本法系用高效液相色谱法(通则 0512)测定药材、饮片及制剂中的黄曲霉毒素(以黄曲霉 毒素 B1、黄曲霉毒素 B2、黄曲霉毒素 G1 和黄曲霉毒素 G2 总量计)，除另有规定外，按下 列方法测定。
当测定结果不符合规定时，以第二法测定结果为准。
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-水 (40∶18∶42)为流动相；采用柱后衍生法检测，（1）碘衍生法：衍生溶液为 0.05％的碘溶液 (取碘 0.5g，加入甲醇 100ml 使溶解，用水稀释至 1000ml 制成)，衍生化泵流速每分钟 0.3ml， 衍生化温度 70℃；（2）光化学衍生法：光化学衍生器（254nm）；以荧光检测器检测，激发 波长 λex=360nm(或 365nm)，发射波长 λem=450nm。
两个相邻色谱峰的分离度应大于 1.5。
混合对照品溶液的制备 精密量取黄曲霉毒素混合标准品(黄曲霉毒素 B1、黄曲霉毒素 B2、黄曲霉毒素 G1、黄曲霉毒素 G2 标示浓度分别为 1.0μg／ml、0.3μg／ml、1.0μg／ml、 0.3μg／m1)0.5ml，置 10ml 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为储备液。
精密量取储备液 1ml， 置 25ml 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得。
供试品溶液的制备 取供试品粉末约 15g(过二号筛)，精密称定，加入氯化钠 3g，置于 均质瓶中，精密加入 70％甲醇溶液 75ml，高速搅拌 2 分钟(搅拌速度大于 11000 转／分钟)， 离心 5 分钟(离心速度 2500 转／分钟)，精密量取上清液 15ml，置 50ml 量瓶中，用水稀释至 刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，量取续滤液 20.0ml，通过免疫亲合柱，流速每分钟 3ml，用水 20ml 洗脱，洗脱液弃去，使空气进入柱子，将水挤出柱子，再用适量甲醇洗脱， 收集洗脱液，置 2ml 量瓶中，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
黄曲霉毒素检测方法国标
黄曲霉毒素检测方法国标【原创实用版3篇】目录（篇1）1.黄曲霉毒素的危害性2.黄曲霉毒素的检测方法2.1 薄层分析法2.2 酶联免疫法2.3 液相色谱法2.4 生物鉴定法2.5 试剂盒法正文（篇1）黄曲霉毒素是一种致癌物质，长期接触可使人的抵抗力下降，急性中毒可引起恶心、呕吐，发烧、黄疸等肝炎症状，长期接触可引起致癌、致畸。
致癌的话主要导致消化道肿瘤，比如食道癌、胆管癌。
因此，对黄曲霉毒素的检测显得尤为重要。
目前，黄曲霉毒素的检测方法主要有以下几种：1.薄层分析法：此方法操作简单、费用低廉，是国内外用的最多的一种测量方法。
2.酶联免疫法：这是近年来研发出了一种新颖的测量方法。
3.液相色谱法：可准确分离黄曲霉素的各种毒素，检测准确度高。
4.生物鉴定法：其特点是待检样品不需很纯，主要用于定性，共有 10 种。
5.试剂盒法：现在检测粮食，饲料里面霉菌毒素主要就是试剂盒（ELISA) 法。
目录（篇2）1.黄曲霉毒素的危害性2.黄曲霉毒素的检测方法2.1 薄层分析法2.2 酶联免疫法2.3 液相色谱法2.4 生物鉴定法2.5 试剂盒法正文（篇2）黄曲霉毒素是一种致癌物质，长期接触可以使人的抵抗力下降，急性中毒可引起恶心、呕吐，发烧、黄疸等肝炎症状，长期接触可引起致癌、致畸。
致癌的话主要导致消化道肿瘤，比如食道癌、胆管癌。
因此，对黄曲霉毒素的检测显得尤为重要。
目前，黄曲霉毒素的检测方法主要有以下几种：1.薄层分析法：此方法操作简单、费用低廉，是国内外用的最多的一种测量方法。
2.酶联免疫法：这是近年来研发出了一种新颖的测量方法。
3.液相色谱法：可准确分离黄曲霉素的各种毒素，检测准确度高。
4.生物鉴定法：其特点是待检样品不需很纯，主要用于定性，共有 10 种。
5.试剂盒法：这是目前检测粮食，饲料里面霉菌毒素主要采用的方法。
目录（篇3）1.黄曲霉毒素的危害性2.黄曲霉毒素的检测方法2.1 薄层分析法2.2 酶联免疫法2.3 液相色谱法2.4 生物鉴定法2.5 试剂盒法3.检测黄曲霉毒素的重要性正文（篇3）黄曲霉毒素是一种致癌物质，长期接触可以使人的抵抗力下降，急性中毒可引起恶心、呕吐，发烧、黄疸等肝炎症状，长期接触可引起致癌、致畸。
中药中黄曲霉毒素的检测汇总43页PPT
25、学习是劳动，是充满思想的劳动。——乌申斯基
谢谢！
1
0
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倚
南
窗
以
寄
傲
，
审
容
膝之易ຫໍສະໝຸດ 安。21、要知道对好事的称颂过于夸大，也会招来人们的反感轻蔑和嫉妒。——培根 22、业精于勤，荒于嬉；行成于思，毁于随。——韩愈
23、一切节省，归根到底都归结为时间的节省。——马克思 24、意志命运往往背道而驰，决心到最后会全部推倒。——莎士比亚
中药中黄曲霉毒素的检测汇总
6
、
露
凝
无
游
氛
，
天
高
风
景
澈
。
7、翩翩新 来燕，双双入我庐 ，先巢故尚在，相 将还旧居。
8
、
吁
嗟
身
后
名
，
于
我
若
浮
烟
。
9、 陶渊 明（ 约 365年 —427年 ），字 元亮， （又 一说名 潜，字 渊明 ）号五 柳先生 ，私 谥“靖 节”， 东晋 末期南 朝宋初 期诗 人、文 学家、 辞赋 家、散
(整理)中药材中黄曲霉毒素检测方案.
中药材中黄曲霉毒素检测方案黄曲霉毒素介绍黄曲霉毒素是一类真菌(如黄曲霉和寄生曲霉)的有毒的代谢产物，它们具有很强的致癌性，主要存在于药材、谷物、坚果、棉籽以及动物饲料相关的产品中。
其毒性远远高于氰化物、砷化物和有机农药的毒性，其中以B1毒性最大。
当人摄入量大时，可发生急性中毒，出现急性肝炎、出血性坏死、肝细胞脂肪变性和胆管增生。
当微量持续摄入，可造成慢性中毒，生长障碍，引起纤维性病变，致使纤维组织增生。
背景各级食品药品监管部门不断加大中药生产流通监管力度，努力保持中药质量总体稳定。
国家食品药品监督管理局关于规范中药生产经营秩序严厉查处违法违规行为的通知(国食药监安[2012]187号中，要求加强对重金属及有害元素、农药残留、黄曲霉毒素等安全性指标的检测和控制，切实保证中药材质量和安全，另要求企业具备与生产品种相适应的检验设备和能力，严把质量检验关。
《国家药品安全“十二五”规划》，规划中明确提出“开展药品快速检验技术研究，搭建检验技术共享平台”、“加快推进药品快速检验技术在基层的应用，配置快速检验设备”、“加强县级机构快速检验能力建设”的要求。
中药中黄曲霉毒素的检测方法2010版《药典》附录IX V 黄曲霉毒素测定采用高效液相色谱法，另外增补药典描述该法检测建立增加柱后光化学衍生法。
原理样品经甲醇-水提取，提取液经过滤、稀释，滤液经过含有黄曲霉毒素特异抗体的免疫亲和柱层析净化，黄曲霉毒素交联在层析介质中的抗体上，此抗体对黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2具有专一性，用水将免疫亲和柱上杂质除去，以甲醇通过免疫亲和柱洗脱，再经光化学衍生器柱后衍生，以提高检测准确性。
主要试剂及耗材气控操作架：含气泵黄曲霉毒素免疫亲和柱1ml或3ml光化学衍生器玻璃微纤维滤纸：直径11cm、孔径1.5µm玻璃试管：直径12mm，长75mm，无荧光特性注射器：10ml、20ml检测步骤样品粉碎——提取——洗脱液进样、亲和柱净化——化学衍生——检测数值气控操作架的使用说明：在样品粉碎后需要过亲和柱净化，也就是怎么方便亲和柱使用操作的问题，气控操作架能有效地提高这个环节的工作效率：1.连接组装好的气控操作架，将免疫亲和柱、注射器针筒与气控操作架连接;2.将处理后的溶液上样;3.调节空气泵旋钮以控制流速，使样液以1-2d/s的速度流出;4.待样液完全排干，用去离子水或蒸馏水以2-3d/s的流速洗涤两次，每次10ml;5.待液体完全排干，将样品瓶置于亲和柱下方，上样1ml甲醇以1d/s的速度流出至完全排干。
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根据在紫外线照射下产生荧光颜色的不同，
分为B族和G族两大类及其衍生物
B族
蓝色荧光
G族
黄绿色荧光
化学结构
基本结构：是一组化学结构类似的二呋
喃香豆素的衍生化合物 目前发现约20余种，已分离鉴定出12种： B1、B2、G1、G2、M1、M2、P1、Q、 H1、GM、B2a和毒醇。 B1：最常见、毒性及致癌性最强
衍生方式：柱后碘衍生、柱后光化学衍生 混合对照品溶液的制备：液体标液
（B1\B2\G1\G2=1\0.3\1\0.3 ug/ml）梯度稀释500倍
供试品溶液的制备：15g粉末，3gNaCl，70%
甲醇提取，免疫亲和柱纯化
测定： 吸取混合对照品溶液5μl、10μl、15μl
、20μl、25μl，注入色谱仪，绘制标准曲线。 吸取供试品溶液20-25μl，测定
《中国药典》2015年版正文收载品种
根及根茎类：远志
果实种子类：大枣、肉豆蔻、决明子、麦芽、陈
皮、使君子、柏子仁、胖大海、莲子、桃仁、槟 郎、酸枣仁、薏苡仁 动物类：僵蚕、水蛭、地龙、全蝎、蜈蚣
共19种，较2010年版药典增加14种
黄曲霉毒素药典检测方法详解
液相条件：C18，甲醇-乙腈-水（40:18:42）
中药中黄曲霉毒素的测定
目录
真菌毒素简介 黄曲霉毒素概述 黄曲霉毒素现有检测方法介绍
黄曲霉毒素检测药典收载情况
药典检测方法详解
注意事项及实验室建议
真菌毒素简介
真菌毒素：由产毒真菌在适宜的环境条件下产
生的有毒代谢产物，由真菌菌核产生。
Mycotoxin：源于希腊语（Mykes）和拉丁语
醇定量将黄曲霉毒素洗
脱，达到分离化目的
黄曲霉毒素 单克隆抗体
杂质
黄曲霉毒素的衍生化
衍生原因
黄曲霉毒素B1、G1荧光遇水要淬灭，检测前需要 衍生化
药典附录收载的两种衍生方法
•碘衍生法：碘作为衍生剂，对衍生温度有要 求，试剂对仪器有腐蚀性，需要冲洗 •光化学衍生法：紫外光灯（254nm ）照射， 操作简单，对衍生温度无要求，不需要其他 衍生剂，无需冲洗 对黄曲霉毒素B1和G1进行衍生，黄曲霉毒素 B2和G2不受该衍生步骤的影响
（Toxicum）
常见真菌毒素分类
真菌种类 曲霉属 所产毒素 黄曲霉毒素、赭曲霉毒素A
镰刀菌属
玉米赤霉烯酮、T-2毒素、呕 吐毒素、伏马毒素
展青霉素、桔青霉素
青霉属
真菌毒素监控意义
真菌毒素对食品安全的危害
真菌毒素对种、养殖业的危害
真菌毒素对制药行业的危害（中药） 国际贸易中作为技术壁垒 在国际反恐和战争中，真菌毒素可作为大规模
方法来源：《中国药典》2015年版四部通则2351
黄曲霉毒素测定法
基本步骤
•提取 •净化（活化、上样、洗杂、洗脱） •测定 •随行质量控制（质控样、随行加样回收）
泵流操作架
自动固相萃取仪
免疫亲和柱
HPLC-荧光检测器 光化学衍生器
净化步骤
取15ml（离心后的提取液），加水至50ml
化学结构式
理化性质
黄曲霉毒素相对分子量312～346 难溶于水，易溶于油、甲醇、丙酮和氯仿等有机
溶剂，但不溶于石油醚、己烷和乙醚
在中性及酸性溶液中较稳定，但在pH为1～3的强
酸性溶液中稍有分解，在pH为9～10的碱性溶液 中分解迅速
纯品为无色结晶
耐高温，黄曲霉毒素B1的分解温度为268℃
•酶联免疫吸附法：快速、简便、单一毒素、假 阳多 •免疫亲和柱-荧光分光光度法：高效、无毒、 假阳多 •微柱筛选法：半定量，测总量 •一步式黄曲霉毒素检测金标试纸法：快速、现 场大批量初筛
黄曲霉毒素检测药典收载情况
2005年增补本附录
第一次增加了黄曲霉毒素测定法
2010年版一部
•正文：僵蚕、陈皮、酸枣仁、桃仁、胖大海品 种项下增加了黄曲霉毒素残留量检查 •附录：继续收载了黄曲霉毒素测定法
2010年版一部第二增补本修订了附录方法
•删除了流速规定 •增订了另一种衍生方法：即光化学衍生法 •取消了免疫亲和柱的品牌规定
2015年版四部通则2351黄曲霉毒素测定法
•增加了第二法：高效液相色谱-串联质谱法 •增加附注：“当测定结果超出限度时，采用第二 法进行确认”
2015年版四部通则增加中药中真菌毒素测定指导
紫外线对低浓度黄曲霉毒素有一定的破坏性
黄曲霉毒素现有检测方法介绍
薄层层析法：灵敏度低，定量困难 HPLC-紫外检测法：不衍生，灵敏度低，采用
UPLC可以增强灵敏度
HPLC-荧光检测法：需衍生，灵敏度高
高效液相色谱-串联质谱法：不需衍生，灵敏度
高，假阳性少，成本高
免疫化学分析方法
黄曲霉毒素的衍生化
AFB1
AFG1
黄曲霉毒素的衍生化
结果报告
未检出
限度内
限度外
低于检测限 （标出检测限）
报告具体值
报告具体值
方法难点
痕量分析——ppb级，要求高灵敏度 毒性强，具有一定的风险性——安全防护措施
基质复杂
注意事项及实验室建议
注意事项
取样的代表性
黄曲霉毒素在样品中分布不均匀
杀伤性生化武器
黄曲霉毒素概述
黄曲霉毒素是黄曲霉和寄生曲霉等菌种产生的
次生代谢产物
黄曲霉毒素的发现
1960年，在英国东南部一些农场中，有大约10
万只火鸡不明原由地突然死亡。 1961年发现火鸡饲料中混有的花生粉能够使大 鼠诱发肝癌。 1962年，研究发现花生粉中含有一种荧光物质 是导致。火鸡死亡的病因，这种荧光物质被证 实为黄曲霉的代谢产物，故命名为“黄曲霉毒 素(Aflatoxins)”。
原则 •基本原则（中药中真菌毒素的分类、监控品种、 测定方法、限值拟定） •基本内容（高效液相色谱法、高效液相色谱-质 谱联用法）
2015年版四部通则9302 中药有害残留物限量制
定指导原则中关于黄曲霉毒素的规定 “由于黄曲霉毒素毒性强，目前国际上不建议 设定黄曲霉毒素的安全耐受量和无毒作用剂量 ，也无最大限量理论值计算公式，限量越低越 好”。
滤过，取20ml，通过免疫亲和柱，流速
3ml/min 加水洗涤两次，每次10ml 过空气10秒，将水挤出柱子 分次加甲醇1.5ml，自然洗脱，过空气，定容至 2ml
免疫亲和柱的原理
利用抗原－抗体免疫反 应的原理，使用大剂量 的单克隆抗体，选择性 的将样品提取液中的黄 曲霉毒素吸附，用水将 杂质洗脱除去，再用甲
存在极其广泛
主要存在于土壤，动植物及各种坚果中。家庭
自制发酵食品等也经常发现黄曲霉毒素。
一般在热带和亚热带地区，食品中黄曲霉毒素
的检出率比较高。
未能及时晒干或储藏不当的粮食容易产生，在
农作物正常的生长期中也可以形成。
毒性极强
1993年黄曲霉毒素被世界卫生组织（WHO）
的癌症研究机构（IARC）划定为Ⅰ类致癌物， 是一种毒性极强的剧毒物质，仅次肉毒毒素， 是目前已知霉菌中毒性最强的。
免疫亲和柱的使用
储存、使用温度（使用说明书）
安全防护
操作人员专门培训，全程穿工作服佩戴手套
对照品的使用
使用黄曲霉毒素混合对照品，不使用黄曲霉毒 素固体纯品自行配置 对照品贮备液避光、低温、密闭保存，工作液 现配现用
试验废弃物处理
残留有黄曲霉毒素的废液或废渣的玻璃器皿， 应泡在专用贮存容器（含10%次氯酸钠溶液内 ，浸泡24小时以上，再用清水将玻璃器皿冲洗 干净） 流动相单独收集，先用次氯酸钠灭毒，再按常 规处理
实验室的建议
专门的仪器设备和场所
安全措施 废弃物
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急性毒性：比氰化钾大10倍，比砒霜大68倍 慢性毒性：肝脏损害，呈急性肝炎、出血性坏
死、肝细胞脂肪变性和胆管增生。脾脏和胰脏 也有轻度的病变。
中药中容易产生黄曲霉毒素的品种
种子、果实、粮谷类中药材 发酵类中药材 动物类中药材
油性成分多的中药材
含上述种类药材的中成药
黄曲霉毒素的种类及性质