丙氨酰-谷氨酰胺二肽对仔猪小肠上皮细胞间紧密连接蛋白 occludin定位与表达的影响

丙 氨 酰 一谷 氨 酰 胺 二 肽 对 仔 猪 小 肠 上 皮 细 胞 间 紧密连 接 蛋 白 ｏ ｃ ｃ ｌ ｕ ｄ ｉ ｎ定 位 与 表 达 的 影 响
邓 宸玺 王 自蕊 游金 明 瞿 明仁 叶亚玲 辛 向荣 潘 珂
（ 江西农业 大学动物科技 学院 ， 南昌 ３ ３ ０ ０ ４ ５ ）
Ｉ Ｐ Ｅ Ｃ 一 １细胞接 种 至 ６块 ６孔 细胞 培养 板 上 ， 分 别 用含 ０ （ 对 照组 ） 、 ０ ． ２ ５ 、 ０ ． ５ ０ 、 １ ． ０ ０ 、 ２ ． ０ ０ 、
４ ． ０ ０ ｍｍｏ １ ／ Ｌ Ａ ｌ ａ — ＧＩ ｎ的 Ｄ ＭＥ Ｍ 高糖 培 养基 进 行 培 养 ， 待 细胞 生长 融合 达 ７ ０ ％以上时， 对ｏ ｃ ｃ ｌ ｕ — ｄ ｉ ｎ进 行 免 疫 荧光 定位 和 蛋 白质 印迹 （ Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｒ ｎ Ｂ ｌ ｏ ｔ ） 检 测 。结 果 表 明 ： １ ） 对 照组 细胞 可见 其 胞 质 内存在 团状 的 阳性 荧光 染 色 ， 而 细 胞 间连 接 处 阳性 荧光 染 色 不 明显 ； 随 着 Ａｌ ａ — Ｇｉ ｎ浓度 的 升 高 ， 细胞 间连 接 处 荧光 信 号逐 渐增 强 ， 细 胞 轮 廓 更 加 清晰 ， 而 胞 质 内 荧光 信 号 逐 ０ １ ４ ， ２ ６ （ ３ ） ： ６ ９ ４ — ７ ０ ０
Ｃ ｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ Ａ ｎ ｉ ｍ ａ ｌ Ｎ ｕ ｔ ｒ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ
ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ０ ０ ６ － ２ ６ ７ ｘ ． ２ ０ １ ４ ． ０ ３ ． ０ １ ９
组Ｉ Ｐ Ｅ Ｃ — ｌ 细胞间 ｏ ｃ ｃ ｌ ｕ ｄ ｉ ｎ的相对表达量均极显著高于对照组（ Ｐ＜ ０ ． ０ １ ） 。随着 Ａ ｌ ａ — Ｇ Ｉ ｎ浓度 的 升 高， ｏ ｃ ｃ ｌ ｕ ｄ ｉ ｎ的相 对 表 达 量 呈先 增后 减 的趋 势 ， 添加量为 ２ ． ０ ０ ｍｍｏ ｌ ／ Ｌ 时达 到 峰 值 ， 且 极 显 著
高 于其他 添加 量 （ Ｐ＜ ０ ． Ｏ １ ） 。 由此 可 知 ， Ａ ｌ ａ — Ｇ Ｉ ｎ可 以上 调 仔 猪 小肠 上 皮 细 胞 间 紧 密连 接 蛋 白
ｏ ｃ ｃ ｌ ｕ ｄ ｉ ｎ的表 达 ， 促进 细胞 间 紧密连 接 结 构 的形 成 ， 进 而增 强仔 猪 小 肠黏 膜 的屏 障功 能 。
子 自由出入受 阻 ， 进 而达到 屏障保 护作 用 ｊ 。仔
猪早 期 断 奶 后 ， 肠道通透性增加 、 肠屏 障 功 能 破 坏 可 能归 因 于 肠 上 皮 细 胞 间 紧 密 连 接 蛋 白 ｏ ｃ ｃ ｌ ｕ ｄ ｉ ｎ ｍＲ Ｎ Ａ 表 达 量 的 下 降 Ｊ 。在 应 激 状 态 下 ， 仔 猪 肠 道 几乎 完 全 依 赖 谷 氨 酰 胺 （ ｇ ｌ ｕ ｔ ａ ｍｉ ｎ ｅ ， Ｇｉ ｎ ） 来 支 持 黏 膜 细胞 和 巨 噬 细胞 的 生 理 代 谢 以维 持 肠 黏 膜 结 构 和 功 能 的完 整 。在 断 奶 期 间 ， 由 于 无 法 获 得 母 源性 Ｇ ｉ ｎ ， 仔 猪 容 易 发 生 Ｇｉ ｎ缺 乏 。 因此 ， 通 过 补 充外 源 性 Ｇｉ ｎ对 防 止 仔 猪 断奶 应 激 具 有 十 分 重 要 的意 义 。然 而 ， 目前 人 工 合 成 的 Ｇ ｌ ｎ水 溶 性 差 ， 易 转 化 为有 害 的焦 谷 氨 酸 和 氨 ， 且吸收率低 ， 限制 了其 在 生 产 中 的 广 泛 应 用 ， 而 以 丙 胺 酰 一谷 氨
连接可封 闭细胞旁 间隙 ， 使 得 上 皮 细 胞 仅 仅 对 离
子和氨基 酸类 营养物质 选择 性通 过。研 究表 明，
紧 密连 接 是依 靠 一 系列 跨 膜 及 外 周 蛋 白相 互 作 用 形 成 的复合 体， 包括 ｏ ｃ ｃ ｌ ｕ ｄ ｉ ｎ 、 ｃ ｌ ａ ｕ ｄ ｉ ｎ 、 Ｚ Ｏ一 １和 Ｊ Ａ Ｍ 等 多 种 蛋 白。 其 中 ｏ ｃ ｃ ｌ ｕ ｄ ｉ ｎ最 早 被 发 现 ， 是 紧 密连 接 中 最 重 要 的 结 构 蛋 白之 一 ， 其 分 子 质 量 为６ ４— ８ ２ ｋ ｕ ， 含 有 ４个跨 膜 结 构域 、 ２个 细胞 外 环 和 １个 细 胞 内 环 ， 可与 Ｚ Ｏ一 １等 蛋 白结 合 ， 共 同 构 成 紧 密 连 接 的 骨 架 部 分 。ｏ ｃ ｃ ｌ ｕ ｄ ｉ ｎ一 旦 进 入 紧 密
摘 要 ：本 试验 以分 离 自仔 猪 空 肠 上 皮 的 Ｉ Ｐ Ｅ Ｃ — ｌ细 胞 为模 型 ， 探 讨 丙氨 酰 一谷 氨 酰 胺 二 肽
（ Ａｌ ａ － Ｇ ｌ ｎ ） 对仔 猪 小 肠 上 皮 细 胞 间 紧 密 连 接 蛋 白 ｏ ｃ ｃ ｌ ｕ ｄ ｉ ｎ定 位 与 表 达 的 影 响 。 试 验 选 取 同 代
关 键 词 ：仔 猪 ； 小肠 上 皮 细胞 ； 紧 密连接 ； ｏ ｃ ｃ ｌ ｕ ｄ ｉ ｎ； 丙氨 酰 一谷 氨 酰胺 二 肽 中 图分 类 号 ： ￥ ８ １ ６ 文 献标 识 码 ： Ａ 文章 编 号 ： １ ０ ０ ６ － ２ ６ ７ Ｘ（ ２ ０ １ ４ ） ０ ３ － ０ ６ ９ ４ － ０ ７
仔 猪小 肠 具 有 完 整 的黏 膜 屏 障 功 能 是 保 证 其 肠 道 健 康 的重 要 基 础 ， 而 小 肠 上 皮 细 胞 问 良好 的 紧密 连 接结 构 是 维 持 小 肠 黏 膜 发 挥 正 常屏 障 功 能
和 吸收 功 能 的前 提 。小 肠 上 皮 细 胞 间 的这 种 紧 密