实时荧光PCR检测瓜类蔓枯病菌的方法研究

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ｔｙｗａｓｔｅｎｔｉｍｅｓｔｈａｎｔｈａｔｏｆｇｅｎｅｒａｌＰＣＲ．【Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ】ｈｅＴｐｉｒｍｅｒｓａｎｄＴａｑｍａｎｐｒｏｂｅｗｅｒｅｓｐｅｃｉｉｆｃｂｙｄｅ．
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ｓｉｔｙ，ＳｈｉｈｅｚｉＸｉｎｊｉａｎｇ８３２０００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：【Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ】ＲｅａｌｔｉｍｅＰＣＲｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｉｎＤｉｄｙｍｅｌｌａｂｒｙｏｎｉａｅ．【Ｍｅｔｈｏｄ】Ａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏ
ｒａｑＭａｎ探针的特异性。关键词：实时荧光ＰＣＲ；检测；瓜蔓枯病菌
中图分类号：Ｓ４１— ３Ｏ文献标识码：Ａ文章编号：１００１— ４３３０（２０１５）０８ —１４７２— ０５
ＳｔｕｄｙｏｎｔｈｅＭｅｔｈｏｄｏｆＤｅｔｅｃｔｉｎｇｔｈｅＤｉｄｙｍｅｌｌａ
ＺＨＡＮＧｙｕ，ＬＩＹａ—ｗｅｉ，ＳＵＮＹａｎ—ｆｅｉ
（１．ＸｉｎｉｆａｎｇＥｎｔｒｙ＆ＥｘｉｔＩｎｓｐｅｃｔｉｏｎａｎｄＱｕａｒａｎｔｉｎｅＢｕｒｅａｕ，Ｕｒｕｍｑｉ８３００６３，Ｃｈｉｎａ；２．ＳｈｉｈｅｚｉＵｎｉｖｅｒ－
新疆农业科学
２０１５，５２（８）：１４７２—１４７６
Fra Baidu bibliotek
ＸｉｎｊｉａｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ
ｄｏｉ：１０．６０４８／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１ — ４３３０．２０１５．０８．０１６
实时荧光ＰＣＲ检测瓜类蔓枯病菌的方法研究
王种，张小菊，张祥林，张伟，张瑜，李亚伟，孙燕飞
（１．新疆出入境检验检疫局，鸟鲁木齐８３００６３；２．石河子大学。新疆石河子８３２０００）
摘
要：【目的】建立瓜蔓枯病菌（Ｄｉｄｙｍｅｌｌａｂｒｙｏｎｉａｅ）的实时荧光ＰＣＲ方法，为瓜蔓枯病菌快速分子检测奠定
探针对瓜上的其他菌株及近似菌株进行检测，该引物和探针可高度灵敏地检测到瓜蔓枯病菌。采用实时荧光ＰＣＲ方法，２５Ｌ体系中只要有８．９Ｐｇ的核酸量就可以被检测到，检测灵敏度达到３５６ｆｇ／ｔ￣Ｌ，比普通ＰＣＲ灵
敏度高１Ｏ倍。【结论】采用研究所设计的引物和探针对田间采集的病株和未知样品的检测，验证了引物和
ｓｔｒａｉｎｓｉｎｍｅｌｏｎａｎｄｓｉｍｉｌａｒｓｔｒａｉｎｓ．Ｔｈｅｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｃｏｕｌｄｒｅａｃｈｔｏ３５６ｆｇ／ｌ￣ＬｂｙｒｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ．Ｔｈｅｓｅｎｓｉｔｉｖｉ —
基础。【方法】通过Ｇｅｎｅｂａｎｋ网上已公布序列，选取瓜蔓枯病菌ｂｅｔａ — ｔｕｂｕｔｉｎ（ｔｕｂ２）基因作为目的基因，设计
了特异性引物和ＴａｑＭａｎ探针，并对该引物和探针的反应条件进行优化。【结果】采用研究所设计的引物和
ＢｒｙｏｎｉａｅｂｙＲｅａｌ— — ＴｉｍｅＰＣＲ
ＷＡＮＧＣｈｏｎｇ，ＺＨＡＮＧＸｉａｏ－ｉｎ，ＺＨＡＮＧＸｉａｎｇ— ｌｉｎ，ＺＨＡＮＧｗｅｉ，