银屑片治疗小鼠银屑病的实验研究_韩姗姗
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采用 SPSS 17. 0 统计分析软件，实验数据均以 均数!标准差 （ x ± s） ，组间比较采用单因素方差分 析方法，以 P ＜ 0. 05 为差异有统计学意义。 5 结果 5. 1 咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样动物模型皮损 的形态学变化 图 1 可见，与正常对照组相比，咪 喹莫特模型组在咪喹莫特涂抹 1 ～ 2 d 后皮肤即出 现红斑、鳞屑及皮肤增厚现象，皮损症状在 7 ～ 8 d 最为严重，呈典型的银屑病样改变。随着时间延 长，模型组皮损日益严重： 红斑由少量淡粉色斑点 变为大面积深红偏棕褐色斑块； 鳞屑由琐碎状增多 增厚，过渡至布满裸露皮肤的层状鳞屑； 皮肤逐渐 褶皱、隆起，增厚浸润明显。银屑片高、中、低剂 量组和雷公藤多苷组皮损症状与模型组相比明显减 轻，鳞屑 较 少， 红 斑 量 少 且 色 浅， 增 厚 浸 润 程 度 较轻。 5. 2 银屑片对咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样动物 模型皮损的病理学变化的影响 HE 染色显示： 正 常对照组小鼠皮肤可见菲薄的角质层、颗粒层、棘 细胞层； 咪喹莫特模型组小鼠皮肤过度角化、角化 不全、棘层肥厚； 银屑片高、中、低剂量组小鼠皮 肤角化过度减轻、棘层变薄，表皮层厚度明显低于 模型组，见图 2。通过测量表皮层厚度发现： 模型 组小鼠表皮层增厚明显，银屑片组表皮层增厚程度 低，与模 型 组 比 较 有 显 著 差 异 （ P ＜ 0. 05 ） ， 见 表 1。
2014 年 12 月 第 36 卷 第 12 期
中成药 Chinese Traditional Patent Medicine
December 2014 Vol． 36 No． 12
银屑片治疗小鼠银屑病的实验研究
韩姗姗1 ， 李 辉1 ， 党翔吉1 ， 牛倩倩1 ， 陈梦钰1 ， 焦海胜2* （ 1． 兰州大学药学院，甘肃 兰州 730000； 2． 兰州大学第二医院药学部，甘肃 兰州 730030）
收稿日期： 2013-11-24 作者简介： 韩姗姗 （ 1989—） ，女，硕士生，从事临床药学研究工作。Tel： （ 0931） 8942753 * 通信作者： 焦海胜 （ 1962—） ，男，教授，硕士生导师，主要从事新剂型和临床药学研究工作。Tel： ldeyjhs@ sohu． com
（ 0931 ） 8942571，E-mail：
HAN Shan-shan1 ， LI Hui1 ， DANG Xiang-ji1 ， NIU Qian-qian1 ， CHEN Meng-yu1 ， JIAO Hai-sheng2*
（ 1． College of Pharmacy，Lanzhou University，Lanzhou730000，China； 2． Maternity Department，The Second Hospital of Lanzhou University，Lanzhou 730000，China）
摘要： 目的 考察银屑片 （ 萆薢、当归、红花、栀子等） 对银屑病样小鼠模型的治疗作用。方法 采用咪喹莫特诱
导的小鼠银屑病样模型及鼠尾鳞片颗粒层模型，观察银屑片对皮损形态学变化及对表皮颗粒层形成的影响。结果 咪
喹莫特模型组小鼠皮肤出现红斑、鳞屑、皮肤增厚现象，皮损组织表现为棘层增厚、角化不全。与模型组相比，银屑
制成，具 有 泻 火 除 烦、 清 热 凉 血、 活 血 驱 风 等 功 能，临床用于银屑病的治疗取得满意疗效［9-10］。本 实验采用咪喹莫特诱导的小鼠皮肤银屑病样皮损模 型和鼠尾鳞片颗粒层模型，观察银屑片的疗效，为 其临床应用提供实验依据。 1 材料 1. 1 实 验 动 物 昆 明 种 小 鼠， 体 质 量 （ 20 ± 2） g，由兰州大学动物实验中心提供，合格证书 号： SCXK （ 甘） 200806。
银屑病是一种常见且易复发的慢性炎症性皮肤 病，也是一种多基因遗传背景下发生的由 T 细胞 介导的免疫性疾病［1-3］。银屑病的基本病理特点为 表皮细胞 过 度 增 殖 和 角 化 不 全。咪 喹 莫 特 （ imiquimod，IMQ） 是 Toll 样 受 体 （ Toll-like receptor， TLＲ） -7 /8 的免疫激活剂［4］，可诱导小鼠出现银 屑病样皮损症状和组织学改变［5-8］。成年小鼠尾部 鳞片表皮呈不全角化，类似银屑病角化不全病理生 理改变。银屑片由萆薢、当归、红花、栀子等中药
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1. 2 药品与试剂 银屑片 （ 兰州大学第二医院制 剂室，批号 20130426） ； 雷公藤多苷片 （ 安徽新陇 海药业有限公司产品，批号 130201 ） ； 5% 咪喹莫 特乳膏 （ 湖北科益药业股份有限公司产品，批号 130303） ； 兔抗增殖细胞核抗原 （ PCNA） 多克隆 抗体 （ 武汉三鹰生物技术有限公司） ； 兔超敏二步 法免疫组化检测试剂盒 SP-9001 （ 北京中杉金乔生 物技术有限公司） 。 1. 3 实验仪器 GTZA 型精密电子天平； BX-50 奥 林巴斯显微镜； 切片机； 自动封闭式组织脱水机； 包埋机； 病理组织漂烘机。 2 方法与分组 2. 1 咪喹莫特模型分组 取 48 只昆明种小鼠背部 除毛后单笼饲养。随机分为 6 组，即正常对照组， 模型组，银屑片高、中、低剂量组和雷公藤多苷阳 性药物对照组。各组小鼠 （ 除正常对照组） 背部 每日涂抹 5% 咪喹莫特乳膏 42 mg，同时灌胃给药， 每天 2 次，连续 8 d： 正常对照组与模型组给予等 容积生理盐水； 中剂量的选择按照不同种属动物间 等效剂量的直接折算公式计算，高、中、低剂量选 择 4 ∶ 2 ∶ 1 的比例，则银屑片高、中、低剂量组分 别给予银屑片溶液 0. 68 g 生药 / （ kg·d） 、0. 34 g 生药 / （ kg·d） 、0. 17 g 生药 / （ kg·d） ； 雷公藤多 苷片 组 给 予 雷 公 藤 多 苷 片 溶 液 0. 094 g 生 药 / （ kg·d） 。 2. 2 鼠尾鳞片颗粒层模型分组 正常小鼠尾部鳞 片表皮天然缺少颗粒层，类似人类银屑病表皮分化 障碍的病理改变，故采用此模型来评价药物促进颗 粒层形成的作用。取昆明种小鼠 40 只，随机分为 5 组，分别为正常对照组，银屑片高、中、低剂量 组，雷公藤多苷片组，每组 8 只。正常对照组给予 等容积生理盐水，银屑片高、中、低剂量组分别给 药 0. 68 g 生药 / （ kg ·d） 、0. 34 g 生药 / （ kg · d） 、 0. 17 g 生药 / （ kg·d） ，雷公藤多苷片组 0. 094 g 生 药 / （ kg·d） 。每天 2 次，连续灌胃 21 d。 3 检测指标与方法 3. 1 咪喹莫特模型检测指标［11］ 3. 1. 1 小 鼠 银 屑 病 样 皮 损 面 积 和 疾 病 严 重 程 度 （ psoriasis area and severity index，PASI） 评分［5-6］ 观察各组小鼠每天的皮损变化情况，依据 PASI 评 分标准 给 予 小 鼠 皮 损 处 红 斑 （ erythema ） 、 鳞 屑 （ scales） 和浸润增厚程度 （ thickness） 0 ～ 4 的积 分： 0，无； 1，轻度； 2，中度； 3，重度； 4，极 重度。将三者积分相加得到总积分 （ 0 ～ 12 ） ，对
ABSTＲACT： AIM To evaluate the effects of Yinxie Tablets （ Angelicae sinensis Ｒadix，Carthami Flos，Gardeniae Fructus，etc． ） on mice models for psoriasis． METHODS Imiquimod-induced psoriasis-like skin inflammation and the formation of scale epidermis granular layer in mouse tail were used to study the therapeutic effects of Yinxie Tablets． ＲESULTS Compared with the model group，the cutaneous symptoms in Yinxie Tablets groups were alleviated，with psoriasis area and severity index （ PASI） scores decreased，epidermal parakeratosis and epidermal over-proliferation relieved，the expression of PCNA decreased． Compared with the normal group，the formation of scale epidermis granular layer in mouse tail in Yinxie Tablets groups was promoted． CONCLUSION Yinxie Tablets exhibit beneficial therapeutic effects on both psoriasis models． KEY WOＲDS： Yinxie Tablets； psoriasis； mice
片各剂量组小鼠银屑病样皮损症状减轻，银屑病皮损面积和疾病严重程度 （ PASI） 评分降低，角化不全和表皮增厚
现象得到改善，增殖细胞核抗原 （ PCNA） 的表达有所降低。与正常对照组相比，银屑片各剂量组对小鼠鼠尾鳞片颗
粒层的形成有促进作用。结论 银屑片对上述小鼠银屑病模型具有一定的治疗作用。
关键词： 银屑片； 银屑病； 小鼠
中图分类号： Ｒ285. 5
文献标志码： A
文章编号： 1001-1528（ 2014） 12-2463-04
doi： 10. 3969 / j． issn． 1001-1528. 2014. 12. 004
Effects of Yinxie Tablets on mice with psoriasis
中下层也有表达，着色细胞层数和数量明显增多； 银屑片高、中、低剂量组着色细胞层数较模型组 少，见图 3。经统计学分析，与模型组比较银屑片 组 PCNA 表达显著降低 （ P ＜ 0. 05） ，见表 2。
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图 1 各组小鼠皮损积分趋势 Fig. 1 PASI scores of mouse skin lesions induced by imiquimod
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各组小鼠积分取平均值后绘制趋势线。 3. 1. 2 小鼠背部皮损病理学改变 采用苏木精-伊 红 （ HE） 染色观察。剪取各组小鼠背部皮损皮肤 固定于 4% 多聚甲醛，经脱水、石蜡包埋、切片、 HE 染 色 后 观 察 皮 肤 病 理 学 改 变， 并 测 量 表 皮 厚度。 3. 1. 3 小鼠背部皮损 PCNA 的表达 剪取各组小 鼠背部皮损皮肤，进行包埋，石蜡切片经抗原热修 复、抗体孵育、DAB 显色、苏木精复染，同步设 立阴性对照。 3. 2 鼠尾鳞片颗粒层模型检测指标 3. 2. 1 鼠尾鳞片颗粒层形成情况 末次给药 24 h 后处死小鼠，在距尾根部约 2 cm 处取背面皮肤一 长条 （ 1. 5 cm × 0. 2 cm） ，4% 多聚甲醛固定，石 蜡包埋，切片，HE 染色。光镜下观察鼠尾鳞片颗 粒层形成，计数连续 100 个鳞片中有颗粒层的鳞片 数，并对各组数据进行统计学处理。 4 统计学处理
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银屑片治疗小鼠银屑病的实验研究
韩姗姗1 ， 李 辉1 ， 党翔吉1 ， 牛倩倩1 ， 陈梦钰1 ， 焦海胜2* （ 1． 兰州大学药学院，甘肃 兰州 730000； 2． 兰州大学第二医院药学部，甘肃 兰州 730030）
收稿日期： 2013-11-24 作者简介： 韩姗姗 （ 1989—） ，女，硕士生，从事临床药学研究工作。Tel： （ 0931） 8942753 * 通信作者： 焦海胜 （ 1962—） ，男，教授，硕士生导师，主要从事新剂型和临床药学研究工作。Tel： ldeyjhs@ sohu． com
（ 0931 ） 8942571，E-mail：
HAN Shan-shan1 ， LI Hui1 ， DANG Xiang-ji1 ， NIU Qian-qian1 ， CHEN Meng-yu1 ， JIAO Hai-sheng2*
（ 1． College of Pharmacy，Lanzhou University，Lanzhou730000，China； 2． Maternity Department，The Second Hospital of Lanzhou University，Lanzhou 730000，China）
摘要： 目的 考察银屑片 （ 萆薢、当归、红花、栀子等） 对银屑病样小鼠模型的治疗作用。方法 采用咪喹莫特诱
导的小鼠银屑病样模型及鼠尾鳞片颗粒层模型，观察银屑片对皮损形态学变化及对表皮颗粒层形成的影响。结果 咪
喹莫特模型组小鼠皮肤出现红斑、鳞屑、皮肤增厚现象，皮损组织表现为棘层增厚、角化不全。与模型组相比，银屑
制成，具 有 泻 火 除 烦、 清 热 凉 血、 活 血 驱 风 等 功 能，临床用于银屑病的治疗取得满意疗效［9-10］。本 实验采用咪喹莫特诱导的小鼠皮肤银屑病样皮损模 型和鼠尾鳞片颗粒层模型，观察银屑片的疗效，为 其临床应用提供实验依据。 1 材料 1. 1 实 验 动 物 昆 明 种 小 鼠， 体 质 量 （ 20 ± 2） g，由兰州大学动物实验中心提供，合格证书 号： SCXK （ 甘） 200806。
银屑病是一种常见且易复发的慢性炎症性皮肤 病，也是一种多基因遗传背景下发生的由 T 细胞 介导的免疫性疾病［1-3］。银屑病的基本病理特点为 表皮细胞 过 度 增 殖 和 角 化 不 全。咪 喹 莫 特 （ imiquimod，IMQ） 是 Toll 样 受 体 （ Toll-like receptor， TLＲ） -7 /8 的免疫激活剂［4］，可诱导小鼠出现银 屑病样皮损症状和组织学改变［5-8］。成年小鼠尾部 鳞片表皮呈不全角化，类似银屑病角化不全病理生 理改变。银屑片由萆薢、当归、红花、栀子等中药
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1. 2 药品与试剂 银屑片 （ 兰州大学第二医院制 剂室，批号 20130426） ； 雷公藤多苷片 （ 安徽新陇 海药业有限公司产品，批号 130201 ） ； 5% 咪喹莫 特乳膏 （ 湖北科益药业股份有限公司产品，批号 130303） ； 兔抗增殖细胞核抗原 （ PCNA） 多克隆 抗体 （ 武汉三鹰生物技术有限公司） ； 兔超敏二步 法免疫组化检测试剂盒 SP-9001 （ 北京中杉金乔生 物技术有限公司） 。 1. 3 实验仪器 GTZA 型精密电子天平； BX-50 奥 林巴斯显微镜； 切片机； 自动封闭式组织脱水机； 包埋机； 病理组织漂烘机。 2 方法与分组 2. 1 咪喹莫特模型分组 取 48 只昆明种小鼠背部 除毛后单笼饲养。随机分为 6 组，即正常对照组， 模型组，银屑片高、中、低剂量组和雷公藤多苷阳 性药物对照组。各组小鼠 （ 除正常对照组） 背部 每日涂抹 5% 咪喹莫特乳膏 42 mg，同时灌胃给药， 每天 2 次，连续 8 d： 正常对照组与模型组给予等 容积生理盐水； 中剂量的选择按照不同种属动物间 等效剂量的直接折算公式计算，高、中、低剂量选 择 4 ∶ 2 ∶ 1 的比例，则银屑片高、中、低剂量组分 别给予银屑片溶液 0. 68 g 生药 / （ kg·d） 、0. 34 g 生药 / （ kg·d） 、0. 17 g 生药 / （ kg·d） ； 雷公藤多 苷片 组 给 予 雷 公 藤 多 苷 片 溶 液 0. 094 g 生 药 / （ kg·d） 。 2. 2 鼠尾鳞片颗粒层模型分组 正常小鼠尾部鳞 片表皮天然缺少颗粒层，类似人类银屑病表皮分化 障碍的病理改变，故采用此模型来评价药物促进颗 粒层形成的作用。取昆明种小鼠 40 只，随机分为 5 组，分别为正常对照组，银屑片高、中、低剂量 组，雷公藤多苷片组，每组 8 只。正常对照组给予 等容积生理盐水，银屑片高、中、低剂量组分别给 药 0. 68 g 生药 / （ kg ·d） 、0. 34 g 生药 / （ kg · d） 、 0. 17 g 生药 / （ kg·d） ，雷公藤多苷片组 0. 094 g 生 药 / （ kg·d） 。每天 2 次，连续灌胃 21 d。 3 检测指标与方法 3. 1 咪喹莫特模型检测指标［11］ 3. 1. 1 小 鼠 银 屑 病 样 皮 损 面 积 和 疾 病 严 重 程 度 （ psoriasis area and severity index，PASI） 评分［5-6］ 观察各组小鼠每天的皮损变化情况，依据 PASI 评 分标准 给 予 小 鼠 皮 损 处 红 斑 （ erythema ） 、 鳞 屑 （ scales） 和浸润增厚程度 （ thickness） 0 ～ 4 的积 分： 0，无； 1，轻度； 2，中度； 3，重度； 4，极 重度。将三者积分相加得到总积分 （ 0 ～ 12 ） ，对
ABSTＲACT： AIM To evaluate the effects of Yinxie Tablets （ Angelicae sinensis Ｒadix，Carthami Flos，Gardeniae Fructus，etc． ） on mice models for psoriasis． METHODS Imiquimod-induced psoriasis-like skin inflammation and the formation of scale epidermis granular layer in mouse tail were used to study the therapeutic effects of Yinxie Tablets． ＲESULTS Compared with the model group，the cutaneous symptoms in Yinxie Tablets groups were alleviated，with psoriasis area and severity index （ PASI） scores decreased，epidermal parakeratosis and epidermal over-proliferation relieved，the expression of PCNA decreased． Compared with the normal group，the formation of scale epidermis granular layer in mouse tail in Yinxie Tablets groups was promoted． CONCLUSION Yinxie Tablets exhibit beneficial therapeutic effects on both psoriasis models． KEY WOＲDS： Yinxie Tablets； psoriasis； mice
片各剂量组小鼠银屑病样皮损症状减轻，银屑病皮损面积和疾病严重程度 （ PASI） 评分降低，角化不全和表皮增厚
现象得到改善，增殖细胞核抗原 （ PCNA） 的表达有所降低。与正常对照组相比，银屑片各剂量组对小鼠鼠尾鳞片颗
粒层的形成有促进作用。结论 银屑片对上述小鼠银屑病模型具有一定的治疗作用。
关键词： 银屑片； 银屑病； 小鼠
中图分类号： Ｒ285. 5
文献标志码： A
文章编号： 1001-1528（ 2014） 12-2463-04
doi： 10. 3969 / j． issn． 1001-1528. 2014. 12. 004
Effects of Yinxie Tablets on mice with psoriasis
中下层也有表达，着色细胞层数和数量明显增多； 银屑片高、中、低剂量组着色细胞层数较模型组 少，见图 3。经统计学分析，与模型组比较银屑片 组 PCNA 表达显著降低 （ P ＜ 0. 05） ，见表 2。
2014 年 12 月 第 36 卷 第 12 期
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图 1 各组小鼠皮损积分趋势 Fig. 1 PASI scores of mouse skin lesions induced by imiquimod
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各组小鼠积分取平均值后绘制趋势线。 3. 1. 2 小鼠背部皮损病理学改变 采用苏木精-伊 红 （ HE） 染色观察。剪取各组小鼠背部皮损皮肤 固定于 4% 多聚甲醛，经脱水、石蜡包埋、切片、 HE 染 色 后 观 察 皮 肤 病 理 学 改 变， 并 测 量 表 皮 厚度。 3. 1. 3 小鼠背部皮损 PCNA 的表达 剪取各组小 鼠背部皮损皮肤，进行包埋，石蜡切片经抗原热修 复、抗体孵育、DAB 显色、苏木精复染，同步设 立阴性对照。 3. 2 鼠尾鳞片颗粒层模型检测指标 3. 2. 1 鼠尾鳞片颗粒层形成情况 末次给药 24 h 后处死小鼠，在距尾根部约 2 cm 处取背面皮肤一 长条 （ 1. 5 cm × 0. 2 cm） ，4% 多聚甲醛固定，石 蜡包埋，切片，HE 染色。光镜下观察鼠尾鳞片颗 粒层形成，计数连续 100 个鳞片中有颗粒层的鳞片 数，并对各组数据进行统计学处理。 4 统计学处理