高中生物课件-动物细胞培养和核移植技术 课件 (25张)

■原代培养：
■传代培养：
■细胞株：原代细胞一般传至10代左 右细胞生长停 滞，大部分细胞衰 老死亡，少数细胞存活到50代这种 传代细胞为细胞株。 ■细胞系：50代以后大部分死亡， 部分细胞细胞核型（遗传物质）发 生变化，获得不死性，朝着等同于 癌细胞的方向发展，无限繁殖。
5.动物细胞培养要经过脱分化的过程吗？为什么？
（5）人核移植胚胎干细胞诱导分 化后提供组织、器官用于移植。 （6）研究克隆动物和克隆细胞，可使人 类更深入了解胚胎发育及衰老过程。 （7）用克隆动物做疾病模型。
4.体细胞核移植技术存在的问题
（1）成功率比较低。 （2）克隆技术有待改进。 （3）大多存在健康问题，许多克隆 动物表现出遗传和生理缺陷，如体 型过大，异常肥胖，发育困难，免 疫失调等。 （4）克隆动物食品安全存有争议。
50代细胞
无限传代
细胞系
遗传物质 未改变
遗传物质 已改变
强调一：细胞贴壁过程
■细胞贴壁：
■培养瓶或培养皿壁要 求： 动物细胞培养瓶内表面 要光滑、无毒
■ 强调二：接触抑制
瓶壁上的细 胞层数是：
一层 （或单层）！
■用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理的原因：
解除由于接触抑制对细胞生长和繁殖的抑制。
1.进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞，说明 细胞间的物质主要是什么成分？用胃蛋白酶行吗？
主要用于作为受体细胞 （3）检测有毒物质，判断某种物质的毒性 （4）细胞的生理、药理、病理研究
如用于筛选抗癌药物
植物组织培养和动物细胞培养的比较
比较项目 植物组织培养 动物细胞培养
★ 原理
细胞的全能性 细胞增殖
★ 培养基性质 固体培养基 液体培养基
★培养基特有成分
蔗糖、植物激素
葡萄糖、动物血清、 促生长因子
早期重组胚胎
3、多利面部毛色是： 白色
.
根据遗传学原理说明判断ห้องสมุดไป่ตู้据。
b
另一头绵羊的子宫
多利全部的核基因都来自白面绵羊
妊娠、出生
4、若黑面绵羊的基因型为AA，白面绵羊 克隆羊多利
的基因型为aa，则克隆羊的基因型为：
aa
试管动物（婴儿）培养过程
卵细胞 精子
体外受精
受精卵
胚胎
母体子宫内
孕育、产出 新个体
动物体细胞分化程 度高，恢复其全能
性十分困难。
2、体细胞核移植过程
供体体细胞 （供核）
卵巢卵母细胞 （供质）
细胞培养
MⅡ中期
去核
体细胞
注入
细胞融合
发育
重组细胞
无核卵母细胞
生出与供
胚胎移植 代孕
重组胚胎
母体
体遗传物 质基本相
共分成两大阶段：核移植和胚胎移植。 同的个体
(1)：你认为用上述体细胞核移植方法生产的克隆动物， 是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？
专题2 细胞工程
2.2.1 动物细胞培养和核移植技术
复习回顾：植物细胞工程的技术有哪些？ 其理论基础是什么？
两技术的原理?
植 物 细 通常采用的 胞 技术手段 工 程
植物组织培养技术 植物体细胞杂交技术
其它动物细胞工程的基础
动物 细胞 工程 常用 技术
动物细胞培养 动物细胞核移植 动物细胞融合 单克隆抗体技术
培养结果
新的个体或细 胞产品
细胞或细胞 产品
培养目的 快速繁殖、培育
无病毒植株等
获得细胞 或细胞产物
二、动物体细胞核移植技术和克隆动物
1.动物核移植
（1）概念： （2）结果：得到克隆动物
（用核移植的方法得到的动物）
（3）原理：动物细胞核具有全能性
（4）分类：胚胎细胞核移植、体细胞核移植。
胚胎细胞分化程 度低，恢复其全 能性相对容易。
C．都要在无菌条件下进行 D．都可体现细胞的全
能性
6.下列与动物细胞培养有关的表述中,不正确的是 （ ）
A.培养基为液体培养基，通常含有葡萄糖、氨基酸、无 机盐、维 生素和动物血清
B.原代培养的细胞一般传至10代左右便会出现生长停滞
C.动物细胞培养一般能够传到40～50代，但其遗传物质 发生了改变
D.动物细胞培养可用于检测有毒物质或获得大量的自身 健康细胞
(6).诱导方法： 物理法： 电脉冲 ；
化学法： 钙离子载体 、乙醇、蛋白酶合成 抑制剂等处理。 (7).应用的技术：
动物细胞培养 技术、 细胞核移植 技术、 胚胎移植 技术。
3.体细胞核移植技术的应用前景
（1）加速家畜遗传改良的进程 （2）保护濒危物种
（3）生产医用蛋白质
（4）转基因克隆动物作为 异种移植的供体
D 胚胎或幼龄动物的器官和组织细胞
4 、为了使用于培养 的动物组织细胞分散开以便配成
一定浓度的细胞悬浮液，选取来的动物组织应选用下列哪种
物质处理（
）
A 胃蛋白酶 B 胰蛋白酶 C 盐酸 D 胰脂肪酶
5．用动植物成体的体细胞进行离体培养，下列叙述正
确的 是（ ）
A．都需用CO2培养箱
B．都需用液体培养基
胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白质外，长时间的作用也 会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤作用，因此必须控制好胰 蛋白酶的消化时间。
■选动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细
胞培养材料的原因：
因为其细胞生命力旺盛，分裂能力强， 分化程度低。容易培养
■目前使用的或冷冻保存的正常细胞通常在10代
以内的原因： 以保持正常二倍体核型
细胞间的成分主要是蛋白质。胃蛋白酶适宜的PH约为2，当 PH>6时，胃蛋白酶就会失去活性，而胰蛋白酶作用的适宜环 境PH为7.2----8.4，多数动物细胞培养的适宜PH为7.2----7.4， 胃蛋白酶在此环境中没有活性。胰蛋白酶在此环境中活性较 高，因此胰蛋白酶适宜用于细胞培养时的消化。
2.胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？
培养的动物细胞一般当传代至50代左右时，部分细胞核 型可能会发生变化，其细胞遗传物质可能会发生突变，而10 代以内的细胞一般能保持正常的二倍体核型。因此，在体细 胞核移植中，为了保证供体细胞正常的遗传基础，通常采用 传代10代以内的细胞。
(4).常用的去核方法： 显微操作法 。
(5).重组细胞发育成一个新个体，体 现了 动__物__细__胞__核___ 的全能性，而非动物细胞的全能性。
（或10代以内的细胞遗传物质不改变）。
4.动物细胞培养的条件:教材46页
（1）无菌无毒的环境： （2）营 养： （3）温度和pH：
（4）气体环境：
培养器皿
动物细胞培养瓶内表面为什么要光滑、无毒？
5.动物细胞培养技术的应用:
（1）蛋白质生物制品的生产 如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体 （2）应用于基因工程
绝大部分DNA来自于供体细胞核，但其核外还有少量的 DNA，即线粒体中的DNA是来自于受体卵母细胞。
(2),用卵母细胞做受体细胞原因：
a．卵母细胞体积 大 ，便于操作 ； b．卵黄 多 ， 营养物质 丰富； c．易激发 细胞核 全能性的表达。
(3).用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内 的细胞，这是为什么？
一、动物细胞培养 1、概念：教材44页
★2、原理： 细胞增殖
注意关键词: 细胞贴壁 接触抑制 原代培养 传代培养
★3、过程 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官
剪碎、用胰蛋白酶处理（或胶原蛋白酶）
单个细胞
加培养液
细胞悬液
原代培养
细胞贴壁，出现接触抑制
传代培养
用胰蛋白酶处理 分瓶传代培养 10代细胞
细胞株
人耳鼠培养过程简介
“人耳鼠”是先使用可降解材 料经过耳形压模，聚乳酸（PLA） 溶液浸泡使其强度增强，制成耳 廓支架材料，然后让细胞在支架 上繁殖生长。然后将细胞接种于 支架材料，经过1-2周体外培养， 在裸鼠背上割开一个口子，植入 “人耳”。随后，“人耳”的支 架会自己降解消失，“长”在老 鼠的背上。
教学反馈
1、动物细胞工程技术的基础是 ----- （ ）
A.动物细胞融合 B.单克隆抗体
C.胚胎移植
D.动物细胞培养
2、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞（
）
A．细胞系 B．细胞株 C．原代细胞 D．传代细胞
3 、动物细胞培养的细胞来自于（ ）
A 任何个体细胞
B 只能取自动物胚胎细胞
C 只能取自幼龄动物的组织细胞
动物细胞培养不需经过脱分化过程。因高度分化 的动物细胞发育潜能变窄，失去了发育成完整个 体的能力，所以，动物细胞也就没有类似植物组 织或细胞培养时的脱分化过程了。要想使培养的 动物细胞定向分化，通常采用定向诱导动物干细 胞，使其分化成所需要的组织或器官。
1.人耳鼠的培育属于哪个范畴
的生物技术？ 2.人耳鼠的培养过程利用了
什么技术手段？
1、写出AB所代表细胞工程名称： 黑面绵羊
白面绵羊
a表示： 核移植
. 去核卵母
乳腺细胞
b表示: 胚胎移植
. 细胞
核
a
2、实施细胞工程时，所需受体细胞
重组细胞
大多采用卵母细胞的原因：
电脉冲刺激
体积大，易操作。含有促使细胞核 表达全能性的物质和营养条件。