乙肝扶正排毒胶囊联合三氧对犬四氯化碳肝损伤的保护作用

第一军医大学硕士学位论文乙肝扶正排毒胶囊联合三氧对犬四氯化碳肝损伤的保护作用姓名：李莉洁申请学位级别：硕士专业：中西医结合临床医学指导教师：杨运高;郭亚兵20070510第１章研究背萦张红栓１４ｌ等通过体外抗病毒实验的形式探讨乙肝扶正排毒胶囊的抗乙肝病毒（｝ｌＢＶ）的活性及机制，从细胞水平研究葵作用枫理，期望为乙肝扶正接毒获囊瓣旗寨应弱挺餐实验蔹撂，霜对透过辩魄疆究乙翳菝委掺毒获囊糖裁蓑、大鼠含药血清和苦参索胶囊对ＨｃｐＧ２．２．１５细胞系干预ＨＢｓＡｇ、Ｉ－ＩＢｅＡｇ、ＨＢＶ－ＤＮＡ定量、核因子ＮＦ－’ｃＢ活化等方面，综合研究药物的最能有效剂量指导临床用药，同时探讨中药对ＮＦ－ｗ．Ｂ活纯磷突。

其实验缝莱鬣零该芬其毒暖显羽体井抗病毒雩＃瘸，其作蠲优于苦参豢必制剂。

谯２００５年ｌＯ月深圳第七届中国国际糍掰技术成果交易会上，多位颁导采我校浸嚣麓察，魏癸受翻多家厂家亲睐，天津药业集团袭承对此药有明确合作意向。

（图１－１）图１－１第２誉医震三氧的ｌ臻床痘震三氧（０３）是由三个氟原子组成的，在空气中不稳定，常温常压下约４５分钟转化成氧气，具有强氧化性，能杀灭多种微生物。

医用三氧魁三氧与纯氧的混合气体。

医用三氧在国外尤其在欧洲临床成熟应用已有４０余年历史，技术也疆蕊爨势，安全翁稳寡敷翔范霆逢逐渗扩袋，童要痤矮子翅伤及皮获淡疡熬治疗、撬囱由基防衰老及簸巾风、溃疡性结肠炎、风湿炎性关节炎镣疾病的治疗，疗效得别充分肯定。

Ｈａｎｓｌｅｒ等学者对三氧医学应用多年的深入研究发现其具有很强的免疫诱导和免疫杀伤作用。

借此，首先在欧洲开始对病毒性肝炎临床治疗黪磺究，获得了令入鼓舞灼结采。

近年医髑三氧在病毒性翳炎方嚣进行了尝试毪治疗，轫多确定箕其蠢邋黄、洚酶、麴戮瘸毒复制箨爆。

孛溺太陵在２００４年底歼始三氧治疗乙肝的尝试。

１５】２第１章研究背景于某些症状特别突出的病人，如出现黄疸、腹水等，利用某几味药物在这些方面的药理作用而达到减缓或消除症状的目的。

三氧就是我们平常所说的臭氧。

医用三氧即三氧与纯氧的混合气体，比纯氧具有更强的氧化性。

三氧治疗肝病具有以下优点：①三氧治疗的原理是基于对自身免疫功能的调节，达到非特异性抗病毒的目的，所以，在抗病毒治疗中可以有效地避免传统的抗病毒药物诱发的病毒变异、停药后发生暴发性反弹等弊病。

②三氧是通过其强氧化性而发挥生物活性作用的，因其不需要通过肝脏或肾脏代谢，从而避免了对肝肾的损害。

但是三氧并非完全“无毒”，在应用时需注意以下几点：①禁止直接吸入肺内，因三氧可损伤肺泡上皮细胞。

②禁用于甲状腺机能亢进患者，因三氧有激活体内新陈代谢的作用。

③禁用于葡萄糖，６．磷酸脱氢酶缺乏症（蚕豆病），因该病患者的红细胞缺乏抗氧化保护系统，与臭氧接触会导致红细胞大量破坏。

ｌｌｌ】正是因为我们看到了两者在治疗肝病方面的优势所在，如果能将两者联合起来应用，应该能起到相辅相成的效果，本课题即以此为出发点。

第４节四氯化碳致急性肝损伤的原理及模型建立一些肝毒索已经成功地应用于肝衰竭的诱导。

目前常用的肝毒素主要有Ｄ．Ｇａｌ、醋氨酚、ＣＣｈ等１１２１。

Ｄ．Ｇａｌ肝损伤模型的病理改变与人类病毒性肝炎的病理改变较为接近１１３】，肝外毒性不明显，剂量范围易控制，但有潜在的不可逆性，同时因为Ｄ．Ｇａｌ价格昂贵，大型动物猪或犬建立模型时所用剂量较大，重复率并不十分理想，也无临床相关的药物中毒，所以限制了它在大型动物造模方面的应用【１４１。

ＣＣｈ是一种对肝细胞有严重毒性作用的化学物质。

目前认为其导致肝损伤的主要机制与四氯化碳自身和其自由基代谢产物有关，ＣＣｈ在肝内经细胞色素Ｐ４５０２Ｅｌ代谢产生毒性代谢产物１１２１。

ＣＣｈ自身的溶酶作用可导致肝细胞损伤，但这仅限于高浓度的ＣＣｈ。

ＣＣｈ的自由基导致肝损害的过程被认为是主要的机４硕士学位论文制。

榍文海ｆ１５】等报道用杂种犬，将ｃｃｈ与等量花生油混合溶液，以０．９ｍｌ／ｋｇ一次腹腔注射建立犬暴发性肝功能衰竭模型。

结果，注射ＣＣｈ后犬里进行性肝功能衰竭表现，第７２ｈ血丙氨酸转氨酶、总胆红素、血氨明显升高，凝血酶原时间延长，血糖降低，（均Ｐ＜０．０１）；脑电图检查出现异常波型。

第７ｄ病理检查显示：肝细胞大片溶解坏死，网状支架大部分存在，肝细胞轻度增生。

暴发性肝功能衰竭形成率为９３．０％。

动物４８～９６ｈ死亡率７３．Ｏ％，１４ｄ内肝损害明显恢复。

动物一般表现，实验室及组织学检查表明，整个动物染毒过程，近似于人类的急性暴发性肝功能衰竭过程。

本模型具有以下特点：①动物受损后，经充分的时间，可以恢复到用药前水平，模型具有可逆性；②受损动物以７２ｈ为死亡高峰，第５ｄ开始恢复，终点十分明确；③实验动物肝功能衰竭时间与死亡时间有一定间隔，具有适用性和可控制性；④ｃｃｈ经济可行，注意保护，对实验人员毒性不大，较为安全。

第５节观察及检测指标的选择１、丙氨酸转氨酶（Ａ班’）与天门冬氨酸转氨酶（ＡＳＴ）肝脏含有丰富的酶类，当肝脏病变时，肝细胞损伤，影响肝细胞的蛋白合成功能及肝细胞通透性增加，膜细胞内的酶释放到血液中，可以引起血清中很多酶活力的改变，因此，测定血清酶是目前临床上作为肝细胞功能的常用指标，对判断肝细胞的各种代谢功能和病理改变、评价疗效有一定价值。

从１９９５年Ｋａｒｍａｎ等发现急性肝炎患者在黄疸前期血清转氨酶活性明显增高以来，用于诊断肝脏疾病的酶不下几十种。

ＡＬＴ与ＡＳＴ是了解肝脏疾病较为重要的酶。

ＡＬＴ主要存在于各种组织细胞中，以肝细胞中含量最多，大部分存在于肝细胞浆中。

正常时，只有极少量释放入血液中，故血清该酶活性很低。

当肝炎的急性期或药物中毒性肝病时肝细胞性坏死，肝细胞酶大量释放入血中，使血清ＡＬＴ活性显著增高。

因此它是诊５硕士学位论文１７硕士擘住论文４、肝脏组织学检查翻２－３动物野黢；豳２－３Ａ、图２－３Ｂ模魁组动物肝脏；图２－３ＣＯＡＴ和ＹＣ组动物野脏（因舞缝动物驿簸蘩凝穗毅，溪鞋灵剜遗一瞩毽劳）；鹜２－３１）ＹＣ＋０３维魂翦瑟整ｇｒｏｕｐｓ．Ｓ酶２－３ＡａｎｄＳｉ昏２－３ＢａｎｉｍａｔｒｉｖｅｒｓｏｆｇｒｏｕｐＭｏｄｅｌ．Ｓｉｇ．２－３ａｎｉｍａｌｒｉｖｅｒｓｏｆｄｅｆｅｒｅｎｔＳ喀２－３ＣａｎｉｍａｌｌｉｖｅｒｏｆｇｒｏｕｐＯＡＴａｎｄｇｒｏｕｐＹＣ（ｏｎｌｙＯｌｌｅｐｉｅｃｅｏｆｐｈｏｔｏｗａｓｓｈｏｗｅｄｂｅｃａｕｓｅｔｈｅｌｉｖｅｒｓｏｆｔｗｏｇｒｏｕｐｓｗｅ诧ｓ．盥ｉ蛐．Ｓｉｇ．２－３Ｄａｎｉｍａｌｌｉｖｅｒｏｆｇｒｏｕｐ・ＹＣ＋０３．１９第２章实验方法与结果ＡＨＥｘｌ００（ｘ４００）ＢＧｏｍｏｒｉｓｉｌｖｅｒｓｔａｉｎｉｎｇｘｌ００（ｘ４００）图２－４正常肝组织矾ｇ．２－４Ｎｏｒｍａｌｈｅｐｆｉｃｔｉｓｓｕｅ．Ｔｈｅｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓｏｆｈｅｐａｔｉｃｃｏｒｄｓ，ｈｅｐａｔｉｃｓｉｎｕｓｏｉｄａｎｄｈｅｐａｔｉｃｌｏｂｕｌｅｗｅｒ℃ｃｌｅａｒ．Ｔｈｅｒｅｗａｓｎｏｔａｎｙｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ，ｎｅｃｒｏｓｉｓｏｒｏｔｈｅｒｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｎｇｅｉｎｔｈｅｌｉｖｅｒｔｉｓｓｕｅｓ．ＴｈｅｓｔｎｌｃｔｕｒｅｏｆｒｅｔｉｃｕｌａｒｆｉｂｅｒｓｅｘｉｓｔｅｄｎｏｒｍａｌｌｙＡＨＥｘｌ００（ｘ４００）ＢＧｏｍｏｒｉｓｉｌｖｅｒｓｔａｉｎｉｎｇｘｌ００ＣＨＥｘｌ００（ｘ４００）２０ＤＧｏｍｏｒｉｓｉｌｖｅｒｓｔａｉｎｉｎｇｘｌ００硕士学位论文Ｅ耻×枷Ｆ衄×４００图２－ｓ模型组动物肝组织Ｓｉｇ．２－５ＨｅｐａｔｉｃｔｉｓｓｕｅｓｏｆｇｒｏｕｐＭｏｄｅｌｓｉｇ．２－５Ａａｎｄｓｉｇ．２－５ＢＨｅｐａｔｏｅｅｌｌｕｌａｒｎｅｃｒｏｓｉｓａｎｄｈｅｍｏｒｒｈａｇｅｏｃｃｕｒｒｅｄｉｎｃｅｎｔｒｉｌｏｂｕｌａｒａｎｄｍｉｄｉｏｂｕｌａｒｚｏｎｅｓｗｉ血ｍａｎｙｄｉｆｆｃｒｅｎｔｆａｔｖａｃｕｏｌｅｓｉｎａｎｄａｒｏｕｎｄｔｈｅｍａｐｐｅａｒｉｎｇｍｅｄｉｕｍｏｒｓｅｒｉｏｕｓｓｔｅａｔｏｓｉｓ．Ｔｈｅｒｅｗｆｆｆｅｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｏｎｏｆｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｃｅｌｌｓｉｎｎｅｃｒｏｓｉｓｚｏｎｅｓ．ＲｅｔａｉｎｅｄｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓｉｎｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｚｏｎｅｆｏｒｍｅｄＰｓｅｕｄｏｌｏｂｕｌｅｓｉｍｉｌａｒｉｔｉｅｓ．ＴｈｅｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓｏｆｒｅｔｉｃｕｌａｒｆｉｂｅｒｓｉｎｎｅｃｒｏｓｉｓｚｏｎｅｓｈａｄｃｏＵａｐｓｅｄ．Ｓｉｇ．２－５ＣａｎｄＳｊｇ．２－５ＤＴｈｅｒｅｗｅＴｅｈｅｐａｔｏｅｅｌｌｕｌａｒｂｒｉｄｇｅｄｎｅｃｒｏｓｉｓａｎｄｈｅｍｏｒｒｈａｇｅ．ＩｎＣｅｌｌｔｒｉｌｏｂｕｌａｒｚｏｎｅ山ｅｒ℃ｗｅｒｅｓｏＲｌｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｅｄｂｉｌｅｃａｎａｌｉｅｌｌｌｉ．ｂｉｌｅｅｍｂｏｌｉｓｍａｎｄｂｉｌｅｐｉｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ．Ｉｎｐｏｒｔａｌａｒｅａｔｈｅｒｅｗａｓｅｈｏｌｅｓｔａｓｉｓ．Ｔｈｅｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓｏｆｒｅｔｉｅｕｌａｔ＂ｆｉｂｅｒｓｉｎｎｅｃｒｏｓｉｓｚｏｎｅｓｈａｄｃｏｌｌａｐｓｅｄ．Ｓｊｇ．２－５ＥＩ＂１１０ｒｅｗｅｒｅｈｅｐａｔｏｅｅｌｌｕｌａｒｖａｃｕｏｌａｒｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎａｎｄｈｅｐａｔｏｅｅｌｌｕｌａｒｐｔｍｅｔｉｆｏｒｍｎｅｃｒｏｓｉｓｉｎｆｉｖｅｒ．ｓｌｇ．２．５ＦＴｈｅｒｅｗｅｒｅｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｐｉｅｃｅｍｅａｌｎｅｃｒｏｓｉｓｉｎｐｏｒｔａｌａｒｅａｗｈｅｒｅｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｅｅｌｌｓｓｐｌａｓｈｅｄｏｕｔ，ａｎｄｓｏｌｎｅｃｏｕｎｃｉｌｍａｎｂｏｄｉｅＳａｒｏｕｎｄｔｈｅｐｃｒｉｌｎｅｔｃｒｏｆｈｅｐａｔｉｃｌｏｂｕｌｅｓ．ＡＨＥｘ４００２ｌＢＧｏｍｏｒｉｓｉｌｖｅｒｓｔａｉｎｉｎｇｘｌ００第２章实验方法与结果ＤＨＥｘ４００ＣＨＥ×４００图６０ＡＴ组和ＹＣ组肝组织Ｓ喀２－６ＨｅｐａｔｉｃｔｉｓｓｕｅｓｏｆｇｒｏｕｐＯＡＴａｎｄｇｒｏｕｐＹＣ．ＳＪｇ．２－６Ａａｎｄｓｉ昏２－６ＢＴｈｅｒｅｗｅｒｅｃｏｌｌａｐｓｅｄ．％２－６（２Ｔｈｅｒｅｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｆｏｃａｌｎｅｃｒｏｓｉｓ，ｗｈｅｒｅｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓｏｆｒｅｔｉｃｕｌａｒｆｉｂｅｒｓｈａｄｗｅｒｅｈｅｐａｔｏｃｅｌｈｄａｒｐｉｅｃｅｍｅａｌｎｅｃｒｏｓｉｓｉｎｐｏｒｔａｌａｒｅａｗｈｅｒｅｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｃｅｌｌｓｓｐｌａｓｈｅｄｏｕｔ．ｓｉｇ．２－６ＤＴｈｅｒｅｗｅｒｅｆａｔｔｙｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｓｏｃｃｕｒｒｅｄｉｎｍｏｓｔａｒｅａｓｏｆｌｉｖｅ．ＨＥ×４００ｓＪｇ．２－７ＨｅｐａｔｉｃｔｉｓｓｕｅｓｏｆｇｒｏｕｐＹＣ＋０３．Ｔｈｅｒｅｗｅｒｅａｆｅｗｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｐｕｎｃｔｉｆｏｒｍｎｅｃｒｏｓｉｓａｎｄｆａｔｔｙｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｓｉｎｒｉｖｅｒｓ．正常肝组织镜下可见肝细胞索结构清晰，肝小叶结构正常，未见肝细胞变性、。