秦艽对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用

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Pomegranate peel prevent high blood glucose induced by STZ
Zhang Yanzhi1，Zhang Hong2，Wang Xuefei3，Mao Xinmin4，Li Xuejun5
（1Department of Pharmacology，2Ancillary Traditional Chinese Medical Hospital，3Functional Experiment Center，4Traditional Chinese Medical College，Xinjiang Medical University，Urumqi830011；5Department of Medicine，Beijing University，Beijing100191）
Objective：To observe the preventive effects of pomegranate peel extract（PAE）on streptozotocin induced diabetes in mice．Methods：Repeated small dose streptozotocin was introperitoneally given to KM mice after PAE was lavaged for three weeks．The blood glucose was de-tected by blood glucose monitor，blood insulin level was determined by radioimmunoassay，and pathological change of pancreatic tissue was ob-served by optical microscope．Results：PAE can improve STZ induced atrophy and vacuolar degeneration in mouse pancreatic island，promote insulin secretion，has obviously antihyperglycemic effects on STZ induced diabetes．Conclusion：Pomegranate peel extract can prevent STZ induced diabetes in mice on a certain degree．
Key words Pomegranate peel（石榴皮）；blood glucose；insulin；pancreas pathology change
秦艽对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用*
康宏杰1，张霞2，3，4＊＊，侯延辉2，3，4，吴洋2，3，4，徐力生2，3，4，孙磊2，3，4
（1宁夏启元药业公司，银川750011；2宁夏医科大学药学院，
3宁夏回药现代化工程技术研究中心，4宁夏医药研究所，银川750004）
摘要目的：研究秦艽对四氯化碳（CCl
4）所致小鼠急性肝损伤的保护作用。

方法：腹腔注射10%CCl
4
花生油溶液引起小
鼠急性肝损伤，以联苯双酯为阳性对照，灌胃给药7天，测定血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）和肝组织中超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量及脏器重量，并做病理切片，观察肝组织病理改变。

结果：同模型组相比较，秦艽水提取物高、中、低剂量（8，4，2g/kg）组均能降低CCl
4
所致急性肝损伤小鼠血清ALT、AST活性（P＜0．01，P＜0．05），降低肝脏
MDA的含量，增强SOD活性（P＜0．01，P＜0．05）；病理学切片显示，秦艽提取物能明显减轻模型动物肝脏病变程度。

结论：秦艽水
提物对CCl
4
所致小鼠急性肝损伤具有保护作用。

关键词秦艽；肝损伤；四氯化碳
89中药药理与临床2012；28（6）
*基金项目：宁夏回族自治区卫生厅重点科研计划项目（编号：2009025）宁夏自然科学基金项目（编号：NZ11101）＊＊通讯作者
秦艽的活性成分主要是龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷，药理研究表明，龙胆苦苷具有抗肝损伤作用［1，2］。

随着现代药
理及药效学研究的不断深入，秦艽的药用价值日益被现代医学界所公认，但秦艽对四氯化碳（CCl
4
）所致急性肝损伤保护作用
研究尚未见相关文献报道。

本实验研究秦艽提取物对CCl
4
所致小鼠急性肝损伤的保护作用，为临床应用秦艽治疗肝损伤提供实验数据。

1材料与方法
1．1试验药物秦艽购自宁夏明德中药饮片有限公司，经药学院中药教研室鉴定为秦艽Gentiana macrophylla Pal1．的根，并符合中国药典2010年版一部要求。

联苯双酯滴丸，北京协和制药厂。

精密称取秦艽饮片100g，加水1000ml浸泡30min后，在电热套上煮沸，文火煎煮30min，把煎煮液过滤，药渣加水1 000ml，再用同样的方法煎煮2遍，把3次的滤液混合，于旋转蒸发器中蒸发浓缩至0．5g生药/ml，4ħ冰箱保存。

1．2动物60只普通级昆明种小鼠，雄性，体质量（20ʃ2）g，由宁夏医科大学实验动物中心提供。

1．3试剂谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）测定试剂盒，均购自南京建成生物工程研究所；四氯化碳，分析纯。

1．4方法小鼠适应性喂养3d，随机分为5组，分别为正常对照组、模型组、联苯双酯组（6．8mg/kg）、秦艽提取物低剂量组（2g/kg）、秦艽提取物中剂量组（4g/kg）、秦艽提取物高剂量组（8g/kg），每组10只。

各组ig给药，每日1次，对照组和模型组给予等体积的蒸馏水，连续给药7d。

灌胃7d后药物组及
模型组采用10%CCl
4
花生油溶液（10ml/kg）腹腔注射造成急性肝损伤模型，24h后各组小鼠摘眼球取血，采集血样，以3000 rpm离心10min分离血清，于4ħ冰箱保存。

同时立即剖取肝脏，用4ħ预冷的生理盐水冲尽表面浮血，滤纸拭干、称重，计算肝脏指数。

测定小鼠血清ALT和AST，肝组织SOD活性、MDA含量。

取肝脏左外叶，置于10%甲醛溶液中固定。

肝脏指数分别剖取肝脏，称重，按肝脏指数=［肝脏重量（g）/体重（g）］ˑ100计算。

血清生化指标的测定血清中ALT、AST的测定按试剂盒说明书的具体步骤进行。

肝组织匀浆SOD活性、MDA含量的测定按试剂盒说明书操作。

组织病理学观察肝组织于10%福尔马林固定液中固定，用水冲洗后经梯度乙醇脱水，石蜡包埋，切片厚度4μm，HE染色，光镜学观察。

2结果
2．1秦艽对CCl
4
引起的急性肝损伤小鼠肝脏指数及血清转氨酶活性的影响正常对照组血清ALT、AST水平明显低于模型对照组（P＜0．01），说明肝损伤模型造模成功。

精密称取秦艽饮片100g，加水1000ml浸泡30min后，在电热套上煮沸，文火煎煮30min，把煎煮液过滤，药渣加水1000ml，再用同样的方法煎煮2遍，把3次的滤液混合，于旋转蒸发器中蒸发浓缩至0．5g生药/ml，4ħ冰箱保存。

结果见表1。

表1秦艽对CCl4致小鼠急性肝损伤血清转氨酶及肝指数的影响（珋
xʃs，n=10）
组别
剂量
（g/kg）
AST
（U/L）
ALT
（U/L）
肝指数
正常对照67．2ʃ9．3＊＊24．0ʃ6．1＊＊1．61ʃ0．15＊＊
模型对照952．5ʃ51．31358．8ʃ70．62．57ʃ0．30
联苯双酯0．0068356．1ʃ22．1＊＊932．9ʃ75．1＊＊2．12ʃ0．19＊＊
秦艽2766．7ʃ54．8＊＊1259．9ʃ93．8*2．24ʃ0．16＊＊4588．7ʃ36．5＊＊871．2ʃ64．6＊＊2．17ʃ0．20＊＊
8240．9ʃ20．9＊＊356．8ʃ38．3＊＊2．11ʃ0．17＊＊
与模型组相比*P＜0．05，＊＊P＜0．01（下同）
2．2秦艽对急性肝损伤小鼠肝组织MDA含量、SOD活性的影响模型组与正常组比较，肝组织匀浆SOD明显降低，MDA水平明显升高；与模型组比较，联苯双酯组和秦艽提取物组SOD 升高与MDA水平降低（P＜0．01或P＜0．05），结果见表2。

表2秦艽对小鼠肝组织SOD活性和MDA含量的影响（珋
xʃs，n= 10）
组别
剂量
（g/kg）
SOD
（U/mg prot）
MDA
（nmol/mg prot）正常对照37．17ʃ4．23＊＊6．92ʃ1．20＊＊
模型对照9．17ʃ2．3178．24ʃ7．16
联苯双酯0．006828．08ʃ3．12＊＊32．64ʃ5．04＊＊
秦艽214．67ʃ4．75*53．85ʃ6．15＊＊
422．71ʃ5．52＊＊45．21ʃ5．16＊＊
826．91ʃ5．90＊＊38．78ʃ6．23＊＊
2．3秦艽对CCl
4
引起的急性肝损伤小鼠肝脏组织结构的影响空白对照组小鼠肝脏色泽暗红，具有较好的光泽，质地柔软而有弹性。

模型组小鼠肝脏颜色变暗，肿胀，质地较硬，弹性差。

肝组织病理学检查镜下可见：正常组小鼠的肝小叶结构完整，肝细胞索结构清晰可辨，核膜清晰、核大而圆；模型组动物肝细胞大片坏死，肝组织充血、肝小叶结构被破坏，炎症细胞浸润较明显。

而联苯双酯能明显改善CC l4对肝细胞的毒害作用，使肝细胞基本恢复正常。

秦艽提取物高剂量组，与阳性组相比，效果更好，低、中剂量组可以使绝大多数肝细胞恢复正常。

3讨论
CCl
4
进入体内后，在肝细胞内质网中经细胞色素P450α依赖性混合功能氧化酶的代谢，生成活泼的三氯甲基自由基和氯自由基，这些自由基可与细胞内和细胞膜的大分子共价结合，使酶的功能丧失，细胞膜脂质过氧化，胞浆Ca2+浓度升高，导致肝
细胞损伤。

在活体动物上应用CCl
4
复制急性肝损伤模型是一个经典方法［3，4］。

中医认为秦艽具有祛风湿、清湿热、止痹痛、退黄疸的功效。

《本草纲目》用单味秦艽来治疗黄疸，古方也有秦艽三两、牛乳一升，煮成七合，作两次服来治疗黄疸的记载。

基于上述情况，
实验观察了秦艽提取物对CCl
4
所致小鼠急性肝损伤的影响。

结果表明秦艽提取物有显著降低肝损伤诱发的血清ALT、AST 水平的升高，降低肝脏指数，减轻肝脏损伤的作用，可使肝组织中SOD恢复，MDA含量明显下降，表明秦艽提取物可提高机体的抗氧化能力，抑制自由基和脂质过氧化物的产生。

本研究为秦艽临床用药提供了实验依据。

但是，其治疗作用除了保肝降酶作用外是否还具有抗病毒作用、其抗肝损伤作用的机理及秦艽抗肝损伤的有效部位，还有待进一步研究，这为我们提出了新的研究课题。

99
中药药理与临床2012；28（6）
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Protective effect of Radix Gentiana Macrophylla on acute liver injury induced by CCl
4
in mice
Kang Hongjie1，Zhang Xia2，Hou Yanhui2，Wu Yang2，Xu Lisheng2，Sun Lei2
（1Ningxia Qiyuan Pharmaceutical Co．，Ltd，Yinchuan750004；2College of Pharmacy，Ningxia Medical University，Ningxia750004）
Objective：To observe the protective effect of Radix Gentiana Macrophylla Pall on acute liver injury induced by CCl
4
in mice．Methods：60mice were randomly divided into six groups：control group，model group，positive group（bifendate），and Radix Gentiana Macrophylla Pall extract high，medium and low dose treatment group．They were administered with NS，and three doses of Radix Gentiana Macrophylla Pall ex-tract were ig administrated to the models once daily for seven days．Acute hepatic in jury was induced by injecting10ml/kg10%peanut oil
solution of carbon tetrachloride．After the last administration，all groups except the normal group were injected with10%CCl
4
（10ml/kg）peanut oil solution to induce acute liver injury model．Four biochemical indexes were detected，including ALT，AST，MDA and SOD．Patho-logical changes in liver were also investigated．Result：Compared with model group，serum AST，ALT in Radix Gentiana Macrophylla Pall extract high，medium and low dose（8，4，2g/kg）groups reduced significantly（P＜0．01or P＜0．05），as well as MDA content decreased significantly，SOD increased（P＜0．01or P＜0．05）；Histopathological study showed that the Radix Gentiana Macrophylla Pall extract have a good protective effect for the liver of mice．Conclusion：Radix Gentiana Macrophylla Pall extract has a protective effect on the carbon tetra-chloride induced acute liver injury in mice．
Key words Radix Gentiana macrophylla（秦艽）；carbon tetrachloride；acute liver injury
001中药药理与临床2012；28（6）。