实验参考内容

实验参考内容
下呼吸道下呼吸道常见病原菌常见病原菌常见病原菌：：
正常人体的下呼吸道是无菌的，分泌物须经上呼吸道排出时常受该处的正常菌群的污染，因此，判断下呼吸道分泌物中是否有病原菌的存在，须对上呼吸道的正常菌群有所了解。

引起下呼吸道感染的常见细菌、真菌见下表。

下呼吸道感染的常见病原菌
革兰阳性菌 革兰阴性菌 抗酸杆菌 肺炎链球菌 卡他莫拉菌 结核分枝杆菌
A群链球菌 流感嗜血杆菌 金黄色葡萄球菌
肺炎克雷伯菌 厌氧球菌 其他肠杆菌科细菌
放线菌 非发酵菌 诺卡菌 军团菌
酵母样菌 丝状真菌
痰标本的采集和运送标本的采集和运送：： 1.标本采集：
下呼吸道标本来源有多种:可经自然咳出、支气管肺泡灌洗吸出、支气管冲洗液或气管、环甲膜穿刺等。

自然咳痰法，应在医护人员指导下留取标本，告诉病人先用冷开水漱口清洗咽喉，用力自气管深处咳出痰液，置于无菌广口容器中，常规培养≦2 h 送到实验室立即接种。

对痰少或无痰等咳痰困难者，可雾化吸入45℃左右的10%氯化钠水溶液，使痰液容易排出。

对于幼儿可用压舌刺激咳痰法，促使喷出肺部和气管分泌物；气管切开者用无菌空针抽取痰液置于无菌管内立即送检；气管镜采集法用气管镜在肺内病灶处吸取标本或取支气管吸出液，支气管肺泡洗液和支气管刷液；气管或环甲膜穿刺法主要用于厌氧菌的培养。

2.标本的运送：
标本运送：及时快速运送，常规培养应在2h 内送到实验室，立即接种。

痰标本不能及时送检者，可暂存4℃冰箱。

3.标本接收筛选方案：
（1）肉眼观察并记录标本相关性状：目测黄色、灰色、血性、铁锈色，浑浊、稠厚，呈现团块状的标本为合格标本；而无色透明、有灰白片状物或黑色小点，有明显食物渣滓、纸屑灰尘的为不合格标本。

一般选取脓血性或有特殊改变的痰液用于病原学检查。

（2）显微镜下筛选：对经过目测筛选的标本，在洗涤前还须再经过显微镜下筛选：取
约0.1ml 痰液（黄豆大小）用接种环均匀涂布成2×2cm 2
大小的涂膜，行革兰染色，在显微镜10×10镜下观察白细胞和上皮细胞数目，采取ABC 三分类的标准。

4.标本拒收或重新送检：
（1）咽拭子、咳痰、吸出的分泌物厌氧菌培养无意义。

（2）申请单填写应完整无误。

标本标识必须唯一，并与申请单相符，未标采集时间、部位或检验要求等拒收。

（3）痰标本呈水样或唾液样，拒收。

（4）在显微镜10×10镜下观察全片并记录平均每个低倍镜视野下白细胞和上皮细胞数目，C 类标本拒收。

（5）标本容器必需符合规定，溢漏、无盖者拒收。

（6）送检时间超过2h 拒收。

痰标本细菌学鉴定操作流程痰标本细菌学鉴定操作流程：：
痰标本检测结果报告痰标本检测结果报告：：
由于检验结果报告的时效性，下呼吸道标本细菌学检验结果分为初步报告和最终报告。

1.初步报告 应包括标本涂片革兰染色白细胞和鳞状上皮细胞计数、细菌学镜检的描述性报告（发现有诊断价值时应及时向临床口头报告，并作相关记录）。

（1)涂片革兰染色白细胞和鳞状上皮细胞计数、细菌学镜检的描述性报告 细菌学镜检的描述性报告：如镜检见到排列成葡萄状的革兰阳性球菌，可报告“找到革兰阳性球菌，形似葡萄球菌”；如见到形成矛头状，尖端相背，成双排列，具有明显荚膜的革兰阳性球菌时，可报告“找到革兰阳性球菌，形似肺炎链球菌”；如见到不易识别的细菌时则报告“找到革兰＃性＃形细菌”；如发现其他有意义病原微生物存在时，应主动描述性报告观察结果，并与临床联系和追踪进一步检查。

（2) 白细胞和鳞状上皮细胞计数的描述性报告：包括白细胞和鳞状上皮细胞数／低倍、细胞内是否含有细菌和胞内细菌染色及形态学特点。

2.最终结果 报告应包括送检标本肉眼观察的结果、涂片革兰染色白细胞和鳞状上皮细胞计数、细菌学镜检的描述性报告、分离致病菌的鉴定结果、药敏试验结果。

（1)痰标本涂片革兰染色后白细胞和鳞状上皮细胞计数、细菌学镜检未发现有临床诊断意义结果（可不用初步报告），细菌分离培养为正常菌群时，最终检验结果应报告“正常菌群生长”。

若无菌生长应报告“经48h 培养无细菌生长”。

有意义的培养基（巧克力平板、血平板），再置2天仍无可疑病原菌生长时可将其弃之；但对偶然分离的“优势可疑病原菌”，还需做药敏试验，并及时与临床联系，最终检验报告应包括标本肉眼观察结果、涂片革兰染色白细胞和鳞状上皮细胞计数及细菌学镜检的描述性报告、细菌鉴定的规范细菌名称和药敏试验结果。

但应提示所报告的结果请结合临床进行分析。

（2)标本涂片革兰染色白细胞和鳞状上皮细胞计数、细菌学镜检发现有诊断价值时，细菌分离培养检出优势菌，并与涂片染色镜检结果相符时，除及时初步报告外，最终检验结果应报告肉眼观察的结果、涂片革兰染色白细胞和鳞状上皮细胞计数、细菌学镜检的描述性报告、优势菌鉴定的规范细菌名称和药敏试验结果等；细菌分离培养未检出优势菌，通常提示可能厌氧菌感染、大量应用抗菌药物、培养基及培养方法或送检标本保存和运送不当等原因。

常见呼吸道感染病原菌的鉴定方法常见呼吸道感染病原菌的鉴定方法：： 一、葡萄球菌属
(1)触酶试验(过氧化氢酶试验)
试剂：3％H 2O 2溶液，置棕色瓶内于4℃阴暗处保存。

方法：先挑取固体培养基上的菌落，置于洁净的玻片上，然后滴加3％过氧化氢溶液1～2滴。

静置之，lmin 内产生大量气泡的为阳性，不产生气泡的为阴性。

表 有临床意义的8种葡萄球菌关键性鉴定
试 验
需氧下产气 菌 种
菌
落色素
葡萄球菌凝固酶
凝聚因子
耐
热D N A 酶 碱性磷酸酶 吡咯烷酮酶 鸟
氨酸脱羧酶 脲 酶 β
半
乳
糖
苷
酶
产生V | P
新生霉素耐药
多粘菌素B 耐药 D | 蕈
糖 D | 甘
露
醇 D | 甘露
糖 D | 松二
糖
D |木
糖 D | 纤维二
糖 麦芽
糖 蔗
糖
金黄色葡萄球菌
+ + + + + - -
d - + - + + + +
+
- - + + 表皮葡萄球菌 - - - - + - (d )
+ - + - + - - (+)
(d ) - - + + 溶血葡萄球菌 d - -
- - + - - - + - - + d - (d ) - - + + 里昂葡萄球菌 d - (+)
- - + + d -
+ - d + - + (d )
- - + + 施氏葡萄球菌 - - + + + + - - (+)
+ - - d - + - - - - - 腐生葡萄球菌 d - - - - - - + + + + - + d
- + - - + + 中间型葡萄球 -
+ d
+
+
+
-
+
+
-
-
-
+
(d )
+
d
-
-
±
+ 猪葡萄球菌菌
- d
- + + - - d - - - + + - + - - - - +
注意点：1．注意过氧化氢为3％，应用30％浓的H 2O 2，用时稀释10倍。

2．不应在培养基上做试验。

3．每次试验时，应以阳性和阴性菌株做对照。

（2）葡萄球菌凝固酶和凝聚因子试验
葡萄球菌凝固酶试验被广泛地用于常规鉴定金黄色葡萄球菌与其他葡萄球菌。

试管法凝固酶试验称为葡萄球菌凝固酶，玻片法为检测凝聚因子。

a．凝聚因子试验：取1滴蒸馏水于洁净的玻片上，用接种环挑取待检菌一环置于蒸馏水中，制成浓的菌悬液，无自凝现象。

然后加一环家兔血浆混合，10s 内观察结果，出现明显细菌凝块为阳性，否则为阴性。

如超过 10s 可出现假阳性，有10％一15％金黄色葡萄球菌呈假阴性，因此必须用试管法验证凝聚因子试验。

操作过程中的注意点：
(1) 10s 内观察结果。

(2) 必须制备浓厚的均匀菌悬液。

(3) 用EDTA 抗凝的兔血浆为最好。

(4) 加血浆后不要再混搅，以免细菌凝块分散变小。

(5) 生长在高盐培养基上的菌落可出现自凝或假阳性。

b．葡萄球菌凝固酶试验：用生理盐水将血浆4倍稀释(已稀释)，取0.5ml。

然后挑取3～5个菌落于稀释血浆中，成浓菌悬液。

置37℃孵箱孵育，24h 后读取结果，凝固者为阳性。

若阴性，继续观察到24h，不凝固者为阴性。

试验应同时作阳性、阴性对照。

试管法葡萄球菌凝固酶试验阳性者，应见到明显的纤维蛋白凝胶块，出现羊毛状或纤维
状沉淀物并非真正凝固，应判为阴性。

中间型葡萄球菌、猪葡萄球菌需要较长时间孵育，才可出现阳性。

凝固酶试验应考虑下述情况：
① 某些金黄色葡萄球菌产生溶纤维蛋白酶，溶解纤维蛋白凝块。

② 所用血浆缺乏纤维蛋白原。

③ 试验菌株不纯。

金黄色葡萄球菌镜下形态与血平板生长情况：
二、链球菌属链球菌属：： 链球菌属内鉴别，首先观察在血液琼脂平板上的溶血环，是β溶血型，或非β溶血型，参照这二类溶血型菌种的鉴别(见后)。

（1）β溶血链球菌的鉴定：β溶血型链球菌的鉴定都是检测特异多糖抗原称为链球菌群多糖抗原来分群，可采用商业性试剂盒，当前血清学诊断方法尚未普及之前，传统的对β溶血链球菌的鉴别仍是需要的。

A、B、D、G 群细菌，一般可用杆菌肽、CAMP、胆汁七叶苷及PYR、VP 等试验区别 (见表)。

表 β溶血链球菌的鉴别特征
血清学分群 种 名
吡咯
烷酮酶
VP
CAMP
七叶苷 杆菌肽敏感 蕈糖
黄色素 山梨醇
A 化脓链球菌 + - - - + + - -
B 无乳链球菌 - + + - - + + -
C 马链球菌 - - -
D - - - - C 似马链球菌 - - - - - + - - C 兽疫链球菌 - - - D - - - + G LancefieedG 群 - - - + - - A,C,F,G 或未分群
咽峡炎链球菌
-
+
-
+
-
-
-
注：a．+，阳性；一，阴性；d，不同菌株。

b．有人认为咽峡炎链球菌与米勒链球菌是同义词。

（2）非β溶血链球菌鉴别
肺炎链球菌的鉴定：生长在血琼脂平板上的菌落细小，圆形，表面光滑、灰白色、边缘整齐，半透明，开始扁平以后中心塌陷，呈脐窝状。

菌体呈矛头状成双排列。

该菌对
Optochin
敏感和胆汁溶菌试验阳性。

（3）牛链球菌的鉴定：具有D群多糖抗原，6.5％NaCl不生长，PYR阴性，胆汁七叶苷阳性，与其他草绿色链球菌鉴别见下表。

表非β溶血型链球菌的鉴别
试验
菌种／群Optochin
敏感胆汁溶菌
胆汁
七叶苷
6.5％NaCl
肉汤
吡咯烷
酮酶
卫星现
象
CAMP
血清
群
肺炎链球菌+ + - - - - - -
牛链球菌- - + - - - - D
无乳链球菌- - - - - + B
草绿色链球菌- - - b - - - - -
营养变异链球
菌
- - - - + + - - 注：a. +，阳性反应；-，阴性反应；土，有些菌株阳性，另外菌株阴性。

b. 偶见例外。

草绿色链球菌的鉴定：革兰阳性球菌，触酶阴性，非β溶血、胆汁溶菌阴性，Optochin 阴性，不存在B、D群抗原，6.5％NaCl肉汤不生长，PYR阴性，10℃，45℃不生长，胆汁七叶苷阴性，万古霉素敏感。

该类链球菌种较多，目前临床仅鉴定到群，参见下表。

表草绿色链球菌的鉴定
试验 a
种群
甘露醇山梨醇VP 精氨酸七叶苷脲酶
变异链球菌群 c + + + - + -
唾液链球菌群- - + - + 土
血液链球菌群- - b - + + -
缓症链球菌群- - - - - -
咽峡炎链球菌群- b - b + b + + - 注：a．+，阳性反应；一，阴性反应；土，有些菌株阳性而另外菌株阴性。

b．偶见例外。

c．变异链球菌群包括：仓鼠、道尼、野鼠，猕猴、鼠亲缘链球菌，唾液链球菌群包括：肠、前腔链球菌，血液链球菌群包括：戈登、H．W群链球菌，缓症链球菌群包括：温和、口腔、血链球菌生物'型链球菌，咽峡炎链球菌群包括：中间、星座、米勒链球菌。

A群链球菌镜下形态与血平板生长情况：
肺炎链球菌镜下形态与血平板生长情况：
链球菌属常用的鉴定方法：
1、溶血性检查
溶血性是鉴定球菌最常用的项目，也是鉴定过程中重要的一步。

1919年Brown对溶血性进行了描述。

α溶血：或称甲型溶血，在血平板上，菌落周围部分红细胞被破坏，呈现一个草绿色环。

β溶血：或称乙型溶血，在血平板上，菌落周围红细胞完全溶解，呈现一个清楚透明溶血环。

γ溶血：或称丙型溶血，血平板上，菌落周围无红细胞溶解，因而无溶血环。

溶血性的识别可在血平板表面菌落周围和穿刺处通过肉眼观察，也可用显微镜观察。

除在分离血平板上观察菌落周围的溶血性外，还可用以下方法确认。

材料：羊血平板。

材料
方法：将标本接种于羊血平板上，用接种针在已接种过的血平板上扎2～3处，使细菌方法
被接种到琼脂层深处，35℃孵育过夜。

观察结果：在接种针穿刺过处，羊红细胞完全溶解，形成无色透明区，为β溶血。

羊观察结果
红细胞部分溶解或不溶解呈草绿色的环，为α溶血。

不溶解无溶血环为γ溶血。

2、 Optochin敏感试验
材料：Optochin (ethylhydrocupreine HCI。

)纸片(直径6mm)，每片含5μg。

血平板。

材料
方法：挑取被检菌落，涂在血平板上，贴 Optochin纸片于接种处，35℃，烛缸孵育18h。

方法
观察结果：抑菌环直径≥14mm为敏感，推断肺炎链球菌。

观察结果
抑菌环直径≤14mm时参照胆汁溶菌，或为其他草绿色链球菌。

3、 杆菌肽敏感试验
材料：含0.04U／片的杆菌肽纸片，血平板。

材料
方法：挑取被检菌落，密涂于血平板上，接种量应大，以免出假阳性。

贴上杆菌肽纸片，方法
35℃过夜。

观察结果：形成抑菌环为敏感，则被检菌推断为A群链球菌。

观察结果
肠杆菌科：
：
三、肠杆菌科
1.氧化酶：纸片法最方便，试剂易保存
材料：直径6mm左右定性滤纸片；1％盐酸四甲基对苯二胺水溶液。

材料
方法：取氧化酶纸片1张，对折刮取平板上的菌落，10s内观察颜色变化，变紫黑色为阳性，不变为阴性。

对照：阳性菌株：铜绿假单胞菌ATCC27853
对照
阴性菌株：大肠埃希菌ATCC25922
2.硝酸盐还原试验
试剂：
试剂
试剂
A 液： 对氨基苯磺酸 0.8g 5N 醋酸 100ml
B 液： α-萘胺 0.5g 5N 醋酸 l00ml 方法
方法：将待检菌接种硝酸盐培养基中，孵育过夜，加入等量A、B 液1滴，观察结果。

结果结果：红色为“+”，即还原硝酸盐。

注意
注意： 1．培养基不应含亚硝酸盐，以避免假阳性。

2．某些肠杆菌还原硝酸盐的能力很强，还原硝酸盐为亚硝酸盐后，进一步将亚硝酸盐分解为氨、氮、氧化氮，造成假阴性。

所以，观察结果时，如无红色出现，应加少量锌粉，仍无色，说明亚硝酸盐进一步分解，硝酸盐反应为阳性。

若加锌粉后出现红色，说明锌使硝酸盐还原为亚硝酸盐，而待检菌无还原硝酸盐的能力，即硝酸盐还原试验阴性。

3.MIU 培养基(动力-靛基质-尿素) 培养基培养基：
胰蛋白胨 1g NaCl 0.75g 磷酸氢二钾 0.2g 葡萄糖 0.1g 琼脂 0.4g 蒸馏水 l00ml 0.4％酚红 适量 20％尿素 10ml
将上述成分(尿素除外)溶于蒸馏水，加适量0.4％酚红，高压灭菌116℃20min，20％尿素过滤除菌，加入灭菌后的培养基中，分装、备用。

方法
方法：将待检菌穿刺接种于MIU 培养基中，37℃孵育过夜，观察结果。

结果结果观察顺序观察顺序观察顺序（（不能颠倒不能颠倒））
：动力“十”，穿刺线变模糊，细菌周围扩散生长。

培养基变红为尿素阳性。

加靛基质试剂变红为吲哚阳性。

4.双糖铁琼脂(KIA)：常用于观察微生物发酵葡萄糖和乳糖的能力，只用KIA 一种就可以把肠杆菌科细菌和其他科细菌区别出来。

KIA 成分中含有葡萄糖和乳糖，二者比例为 1：10， 指示剂为酚红，其在PH<6.8时变为黄色，而KIA 的PH 为7.4，产少量的酸就可导致颜色变化。

斜面部分暴露于空气中，为有氧环境。

而下部与空气隔绝是相对厌氧的环境。

因此配KIA 时，最重要的是斜面部分和管下部琼脂的长度，两者均为3cm ，以保证两部分相对应的有氧或厌氧环境。

方法
方法：用针穿刺，取单个菌落，穿刺至底部3-5mm 处，然后在斜面上往复划线。

放35度培养18-24小时。

结果结果：：见微生物实验SOP。

肺炎克雷伯菌镜下形态与血平板生长情况：
如何判定痰标本培养物的可疑致病菌与非致病菌如何判定痰标本培养物的可疑致病菌与非致病菌：：
临床通常将正常人喉以上部位称之为上呼吸道，上呼吸道定植有大量的正常菌群，而气管以下包括气管、支气管和肺泡称下呼吸道，通常无菌。

因此健康人痰标本会培养出正常菌群，它们以需氧和兼性厌氧菌为主，由甲型链球菌、奈瑟菌、棒状杆菌、葡萄球菌和白假丝酵母菌等组成。

在判断标本经培养后，哪种为可疑致病菌哪种为非致病菌时，我们主要考虑以下几个方面：1、痰标本为合格的痰标本，这是保证微生物学检验质量的基础。

2、培养物中存在接近纯培养或优势生长的形态一致的菌落，此时高度怀疑为致病菌生长。

3、对可疑致病菌进行革兰染色，与筛选合格痰标本时的镜下观察结果进行对比，观察是否有相关性。

4、同一患者多次检测到相同细菌。

5、同一患者其他的标本类型如血液、胸液也检测到同一细菌。

而培养物中只见正常菌群生长，或多种病原菌少量生长，可认为是无致病菌生长或标本有污染。

抗菌药物敏感性试验 （AST ）：
体外抗菌药物敏感性试验可以①可预测抗菌治疗的效果， “敏感”治疗可能有效； “耐药” 肯定失败；②指导医生选择使用抗生素，AST 的结果为“耐药”，即应更换药物；③提供所选择药物的依据；④监测耐药性，分析耐药菌变迁，掌握耐药菌感染病流行病学，控制和预防耐药菌感染发生和流行。

主要包括K-B 纸片扩散法、稀释法和E 试验。

1、K-B 纸片琼脂扩散法
（1）原理：将含有定量抗菌药物的纸片贴在测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸收琼脂中的水分溶解后不断地向纸片周围扩散，形成递减的浓度梯度。

在纸片周围可抑菌浓度范围内测定菌的生长被抑制，从而形成无菌生长的透明圈即抑菌圈。

抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感性。

（2） 抗菌药物纸片：专用药敏纸片，用加样或浸泡的方法使每片的药量达到一定的规定量，冷冻干燥后密封，-20°C 保存备用。

（3）培养基：水解酪蛋白（Mueller-Hinton MH ）琼脂是对生长较快的需氧和兼性厌氧菌进行药敏试验的标准培养基，pH7.2-7.4，琼脂厚度为4mm 。

对营养要求较高的细菌进行药敏试验时，应在MH 琼脂中加入相应的营养添加剂。

（4）细菌接种：接种物的准备可采用生长法或直接菌落悬液法。

为使药敏试验的接种浓度标准化,应使用0.5麦氏比浊标准的菌液浓度，制备好的菌液应在15min 内接种完毕。

置35℃孵育16-18h 后读取结果，苛养菌应孵育在含CO2的环境中，葡萄球菌和肠球菌必须孵育24h，以检测对苯唑西林和万古霉素的耐药性。

（5）结果解释和报告：用游标卡尺或直尺量取抑菌圈直径，参照CLSI 标准判断结果。

常分为以下三级：敏感（susceptible）：表示测试菌可被测定药物常规剂量给药后的所达到的血药浓度所抑制或杀灭。

中介（intermediate）：指测试菌对常规剂量用药后体液或组织中的药物浓度的反应性低于敏感株，但在测定药物浓集部位的体液（如尿液）或使用高于正常给药量（如β-内酰胺类）临床上使用有效。

耐药（resistant）：指测试菌不能被在体内感染部位能达到的抗菌药物浓度所抑制。

（7）纸片法药敏结果的因素： 培养基的质量对结果的准确性有直接影响，如PH、硬度、湿度和深度等；药敏纸片的含药量是影响抑菌圈大小的重要因素；接种菌量正确与否是影响结果的重要因素之一；试验操作质量；孵育条件和温度、时间；抑菌圈测量工具的精确度；质控菌株本身的药敏特性是否合格，有无变异。

（8）质量控制： 采用标准菌株是进行药敏试验质量控制的主要措施。

常用的临床药敏质控标准菌株有：金黄色葡萄球菌ATCC25923，大肠杆菌ATCC25922，铜绿假单胞菌ATCC27853 等。

2、稀释法
稀释法是定量测定抗菌药物抑制细菌生长作用的体外方法，分为琼脂稀释法和肉汤稀释法。

稀释法所测得的某抗菌药物能抑制待测菌肉眼可见生长的最低药物浓度称为最小抑菌浓度（minimal inhibitory concentration，MIC）。

（1）肉汤稀释法：常量稀释法(macrodilution)和微量稀释法(microdilution)。

原理是 用MH 肉汤将抗菌药物作不同浓度的稀释后,再接种待测菌，定量测定抗菌药物抑制或杀灭待测细菌的最低抑菌浓度或最低杀菌浓度（minimal bactericidal concentration MBC）。

对于需氧菌、兼性厌氧菌推荐使用M-H 肉汤；而对于流感嗜血杆菌、链球菌则需在该培养液中加入补充营养成分。

（2）琼脂稀释法：琼脂稀释法是将不同浓度抗菌药物分别混匀于琼脂培养基中，配制出含各种浓度药物的平板，使用微量多头接种仪接种细菌，孵育后观察细菌在含不同浓度药物的平板上的生长情况，以抑制细菌生长的平板所含的药物浓度测得最低抑菌浓度（MIC）。

该法的特点时可同时做多株细菌的MIC 测定，结果重复性优于肉汤稀释法，且易于发现耐药突变株或污染，是验证新药体外抗菌活性时常用的参照标准。

3、E 试验：E 试验是一种结合了稀释法和扩散法的原理和特点测定微生物对抗菌药物的敏感度的定量技术。

其他检测技术其他检测技术：：
一、细菌感染免疫学检测
细菌感染后宿主体内抗体的检测方法有：辅助诊断肠热症的肥达试验，辅助诊断立克次体病的外斐试验，诊断钩端螺旋体感染的显微镜凝集试验等直接凝集试验。

酶联免疫吸附试验，胶乳凝集试验。

细菌抗原的测定方法有：凝集试验：玻片法凝集试验、胶乳凝集法、协同凝集试验、反向间接血凝试验。

免疫荧光技术：直接法、间接法。

荚膜肿胀试验。

酶联免疫吸附试验。

非特异性凝集素的测定有：与原发性非典型性肺炎相关的冷凝集试验；用于诊断传染性单核细胞增多症的嗜异性凝集试验。

二、 细菌感染的分子生物学检测 （一）常用的分子生物学技术
1.核酸杂交 常用的杂交技术有：斑点杂交、southern 印迹、原位杂交、Northern 印迹等。

探针的种类有全染色体DNA 探针、染色体克隆片段DNA 探针、质粒DNA 探针、rRNA 基因探针、寡核苷酸探针等。

2.核酸扩增技术 核酸扩增技术是分子生物学中最具有重大意义的技术之一。

对核酸进行扩增的方法很多，如聚合酶链反应（polymerase chain reaction ,PCR）、连接酶链反应、自保留序列扩增及Q-beta扩增等。

以聚合酶链反应最为广泛应用。

PCR 技术在细菌的快速检测、细菌的毒素基因检测、细菌的耐药性检测及感染细菌的流行病学调查中得到日益广泛的应用。

生物芯片是新近发展的一项对基因、蛋白质、细胞及其他生物组分进行大信息量分析的检测技术。

常用的有基因芯片（gene chips ）和蛋白芯片(protein chips)。

目前正在研制和评价中。

（二）鉴定感染细菌种属的方法
1.细菌种属的鉴定
DNA 碱基组成的测定 G+C mol%含量不同的细菌，为不同种细菌；含量相同的可能为不同种的细菌。

细菌的G+C mol%相当稳定，不受培养条件、菌龄和其他外界因素影响。

最常用的方法是热变性法。

DNA-DNA杂交DNA杂交可得出DNA之间核苷酸顺序的互补程度，从而推断不同细菌基因组间的同源性。

16S rRNA同源性分析 rRNA-DNA杂交、16S rRNA序列测定、16S-23S rRNA序列测定此外限制性内切酶长度多态性分析（RFLP）、脉冲场凝胶电泳（PFGE）、随机引物扩增法（RAPD）等技术常用于菌株间的差异比较。

2.细菌种属特异基因
某些基因为细菌种特有或属共有，通过对这些基因的检测可以鉴定细菌的种或属。

如编码吸附和侵袭上皮细胞表面蛋白的inv基因：invA、invB、invC、invD、invE等是一组只存在于致病性沙门菌中的独特的保守基因序列。

鞭毛蛋白dlh基因通常只存在于伤寒沙门菌；IS6110、IS986插入片段为结核分枝杆菌复合群所拥有等。

3.细菌毒力基因
可以测定霍乱弧菌的霍乱毒素基因、产肠毒素大肠埃希菌的耐热（ST）和不耐热肠毒素（LT）以及白喉棒状杆菌的外毒素基因以示相应的细菌存在。

（三）细菌耐药性的分子生物学检测
1.β内酰胺类抗生素的耐药基因
青霉素结合蛋白（PBP）基因耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌是由mec A基因介导的耐药，肺炎链球菌对青霉素耐药是由于PBP基因突变而致。

革兰阴性菌产生的β内酰胺酶由质粒介导的β内酰胺酶种类繁多，可以用PCR或基因探针的方法检测和分类，如TEM、SHV、OXA、ROB型等。

2.糖肽类抗生素耐药基因肠球菌对糖肽类抗生素的耐药基因由Van A、Van B、Van C 等介导，测定这些基因可以预测对万古霉素和壁霉素的耐药性。

3.大环内酯类抗生素耐药基因红霉素甲基酶erm基因、大环内酯类泵出基因mef A、mef E、msr A等基因参与了红霉素的耐药。

4.喹喏酮类抗生素耐药基因喹喏酮类抗生素的主要耐药机制是由于螺旋酶和拓扑酶的突变，常与gyr和par基因突变有关。

5.分枝杆菌耐药基因对利福平的耐药与rpoB变异有关，对异烟肼的耐药与kat G和inh A有关。

三、细菌毒素的检测
（一）内毒素的检测对注射液和生物制品采用家兔发热法，即将可疑标本注射进家兔的静脉中，观察有无发热反应；对临床标本采用鲎试验。

（二）外毒素的检测
1.生物学检测
金黄色葡萄球菌肠毒素中毒，可以选用幼猫试验；破伤风梭菌的创口分泌物或肉汤培养液，可接种小鼠或豚鼠的皮下，观察肌肉痉挛的现象；白喉棒状杆菌肉汤或滤液，可接种豚鼠的皮下，观察接种局部的病变；大肠埃希菌耐热肠毒素(ST)可以用乳鼠灌胃法等测试。

进行生物学测试时，须同时设置对照动物。

测试破伤风梭菌和白喉棒状杆菌时，须设置抗毒素保护组动物对照。

由于动物试验有许多不确定因素，往往有假阳性或假阴性存在。

有些毒素可以用细胞培养的方式观察可疑毒素对单层细胞的作用，如不耐热肠毒素（LT）可导致中国仓鼠卵巢细胞（CHO）及Y1一肾上腺细胞的形态变化。

2.免疫学测定
双向琼脂扩散、琼脂扩散法（Elek法）、酶联免疫吸附试验、反向血凝、免疫电泳、放射免疫测定等技术已被广泛应用。

四、细菌自动化检测
传统的鉴定方法被认为是菌种鉴定的参考方法。