Report-头孢地尼CP2015分析

Sep 21, 2016
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头孢地尼CP2015的分析
依《中国药典》15版二部方法对头孢地尼原料药进行分析，客户反映主峰前后杂质与主峰分离度较难达到药典标准，需求合适C18柱进行分析以达到药典分离要求；尝试使用资生堂MGII，SUPERIOREX ODS,AQ,BB 等C18色谱柱对客户所提供样品进行分析，发现高极性的C18AQ柱分析结果为最佳，结果如图1。

图1 AQ药典方法对系统适用性溶液分析
HPLC Conditions ：
色谱柱：CAPCELL PAK C18 AQ ;4.6mm i.d.×250mm
流动相：A：0.25%四甲基氢氧化铵（磷酸调pH至5.5），每1000ml加入0.1mol/L乙二胺四醋酸二钠0.4ml B：0.25%四甲基氢氧化铵（磷酸调pH至5.5）：乙腈：甲醇: =500:300:200，每1000ml加入0.1mol/L 乙二胺四醋酸二钠0.4ml
B%5%(0min)→B%5%(2min) →B%25%(25min) →B%50%(42min) →B%5%(43min)
→B%5%(60min)
流速：1mL / min
温度：40°C
检测：PDA 254nm
进样量：20µL
HPLC Conditions ：
Column ：CAPCELL PAK C18 AQ;4.6mm i.d.×250mm
Mobile phase ：A：0.25%TMAH(adjust pH to 5.5 with phosphoric acid), add 0.4ml of 0.1mol/L EDTA-2Na in every 1000 ml of solution
B：0.25% TMAH(adjust pH to 5.5 with phosphoric acid)：CH3CN：CH3OH: =500:300:200，add
0.4ml of 0.1mol/L EDTA-2Na in every 1000 ml of solution
B 5%(0min)→5%(2min) →25%(25min) →50%(42min) →5%(43min)→5%(60min)Gra
Flow rate ：1mL / min
Temp ：40°C
Detection ：PDA 254nm
Inj.vol. ：20µL
结果中看出头孢地尼主峰保留时间为20.73min，同药典头孢地尼系统适用性溶液的典型色谱图基本相符（如附图I）；药典要求头孢地尼峰与杂质J峰分离度不小于1.2，杂质I峰与杂质J峰，头孢地尼峰与杂质K 峰及杂质K峰与杂质L峰之间分离度应符合要求，此时头孢地尼峰与杂质J峰分离度为1.21，杂质I峰与杂质J
峰分离度为2.19，头孢地尼峰与杂质K峰分离度为2.77，杂质K峰与杂质L峰分离度为1.70，均符合药典规定。

为达到药典要求使保留时间约为22min，降低流速，再一次分析，分析结果如图2。

附图Ⅰ头孢地尼系统适用性溶液典型色谱图
图2 AQ药典方法对系统适用性溶液分析
HPLC Conditions ：
色谱柱：CAPCELL PAK C18 AQ ;4.6mm i.d.×250mm
流动相：A：0.25%四甲基氢氧化铵（磷酸调pH至5.5），每1000ml加入0.1mol/L乙二胺四醋酸二钠0.4ml B：0.25%四甲基氢氧化铵（磷酸调pH至5.5）：乙腈：甲醇: =500:300:200，每1000ml加入0.1mol/L 乙二胺四醋酸二钠0.4ml
B%5%(0min)→B%5%(2min) →B%25%(25min) →B%50%(42min) →B%5%(43min)
→B%5%(60min)
流速：0.85mL / min
温度：40°C
检测：PDA 254nm
进样量：20µL
HPLC Conditions ：
Column ：CAPCELL PAK C18 AQ;4.6mm i.d.×250mm
Mobile phase ：A：0.25%TMAH(adjust pH to 5.5 with phosphoric acid), add 0.4ml of 0.1mol/L EDTA-2Na in every
1000 ml of solution
B：0.25% TMAH(adjust pH to 5.5 with phosphoric acid)：CH3CN：CH3OH: =500:300:200，add
0.4ml of 0.1mol/L EDTA-2Na in every 1000 ml of solution
B 5%(0min)→5%(2min) →25%(25min) →50%(42min) →5%(43min)→5%(60min)Gra
Flow rate ：0.85mL / min
Temp ：40°C
Detection ：PDA 254nm
Inj.vol. ：20µL
此时头孢地尼主峰保留时间为22.18min，为药典所要求保留时间，头孢地尼峰与杂质J峰分离度为1.23，杂质I峰与杂质J峰分离度为2.35，头孢地尼峰与杂质K峰分离度为2.68，杂质K峰与杂质L峰分离度为1.84，均符合药典规定。

在同样的分析环境下对按药典方法所配制的供试品溶液进行分析，分析结果如图3。

图3 AQ药典方法对供试品的分析
HPLC Conditions ：
色谱柱：CAPCELL PAK C18 AQ;4.6mm i.d.×250mm
流动相：A：0.25%四甲基氢氧化铵（磷酸调pH至5.5），每1000ml加入0.1mol/L乙二胺四醋酸二钠0.4ml B：0.25%四甲基氢氧化铵（磷酸调pH至5.5）：乙腈：甲醇: =500:300:200，每1000ml加入0.1mol/L 乙二胺四醋酸二钠0.4ml
B%5%(0min)→B%5%(2min) →B%25%(25min) →B%50%(42min) →B%5%(43min)
→B%5%(60min)
流速：1.0mL / min
温度：40°C
检测：PDA 254nm
进样量：20µL
HPLC Conditions ：
Column ：CAPCELL PAK C18 AQ;4.6mm i.d.×250mm
Mobile phase ：A：0.25%TMAH(adjust pH to 5.5 with phosphoric acid), add 0.4ml of 0.1mol/L EDTA-2Na in every
1000 ml of solution
B：0.25% TMAH(adjust pH to 5.5 with phosphoric acid)：CH3CN：CH3OH: =500:300:200，add
0.4ml of 0.1mol/L EDTA-2Na in every 1000 ml of solution
B 5%(0min)→5%(2min) →25%(25min) →50%(42min) →5%(43min)→5%(60min)Gra
Flow rate ：1.0mL / min
Temp ：40°C
Detection ：PDA 254nm
Inj.vol. ：20µL
对供试品分析的结果中，我们发现AQ柱能够使供试品中各杂质均能够得到良好的基线分离。

当然，为了有更多的色谱柱选择，在同样的分析条件也下尝试中等极性的MGII柱，高碳载量的SUPERIOREX ODS,强耐碱性的BB柱对系统适用性溶液进行分析，分析结果如图4，5，6。

图4 MGII对系统适用性溶液分析
图5 ODS对系统适用性溶液分析
图6 BB对系统适用性溶液分析
分析结果发现使用MGII, SUPERIOREX ODS,BB对系统适用性溶液进行分析，主峰与其前杂质J峰的分离度分别为0.95，1.02，0.66，未能符合药典分离要求。

综上实验所述，使用资生堂强极性的C18AQ柱能够使头孢地尼系统适用性溶液中各杂质峰与主峰间良好的分离，且符合药典要求的各杂质峰之间的分离度要求。

张虎郭彦丽。