测定氨咖黄敏胶囊3种成分含量的新方法

测定氨咖黄敏胶囊3种成分含量的新方法
董微微;方洪壮;栾芳
【摘要】An HPLC-QAMS method was established for quantitative analysis on multi-components by single marker in analysis on Ankahuangmin capsule for the simultaneous determination of three main constituents . Using paracetamol as an index , the relative factors of caffeine and chlorphenamine maleate were established by HPLC , which was used to calculate the content .It shows no significant difference between the results of QAMS method and those external standard methods ,
RSD<0.78%.It shows that this method is feasible and suitable which valuate the quality of paracetamol , caffeine and chlorphenamine maleate
in Ankahuangmin capsule by QAMS .%建立高效液相色谱法（ HPLC）“一测
多评”法测定氨咖黄敏胶囊中3种有效成分的含量，以对乙酰氨基酚为内标物，
建立该成分与咖啡因、马来酸氯苯那敏的相对校正因子并计算此3种成分的含量。

同时采用外标法测定，两种测试结果无显著差异， RSD＜0.78％，表明建立的“一测多评”法测定氨咖黄敏胶囊中的对乙酰氨基酚、咖啡因、马来酸氯苯那敏，准确可行。

【期刊名称】《黑龙江大学工程学报》
【年(卷),期】2016(007)002
【总页数】6页(P52-57)
【关键词】高效液相色谱法( HPLC);一测多评( QAMS);氨咖黄敏胶囊;相对校正因
子
【作者】董微微;方洪壮;栾芳
【作者单位】佳木斯大学药学院，黑龙江佳木斯154007; 黑龙江省鹤岗市食品药品检测中心，黑龙江鹤岗 154100;佳木斯大学药学院，黑龙江佳木斯154007;
黑龙江省生物药制剂重点实验室，黑龙江佳木斯 154007;佳木斯大学药学院，黑龙江佳木斯154007; 黑龙江省生物药制剂重点实验室，黑龙江佳木斯 154007【正文语种】中文
【中图分类】TQ460.7
“一测多评”法( quantitative analysis of multi-components by single marker，QAMS)[1]，是一种用于多组分质量控制的研究方法，以样品中某一组
分作为内标物，建立该内标物与其它组分间的相对校正因子，并利用相对校正因子计算其它组分的含量，此方法在降低检测成本的同时解决了对照品供需不足的问题。

氨咖黄敏胶囊为临床常用抗感冒药，是由咖啡因、马来酸氯苯那敏、对乙酰氨基酚、人工牛黄及其它辅料组成的复方制剂，国家现行质量标准中采用容量分析法测定咖啡因和对乙酰氨基酚的含量[2-3]，操作过程繁琐，影响因素较多，测定结果误差
较大，而且该标准中没有控制马来酸氯苯那敏成分的含量[4]。

本研究建立了HPLC法同时测定氨咖黄敏胶囊中咖啡因、马来酸氯苯那敏、对乙
酰氨基酚3种成分的含量。

为了提高检测效率、降低检测成本，应用“一测多评”法对氨咖黄敏胶囊进行多指标质量控制，以对乙酰氨基酚对照品为内标物，通过建立其与咖啡因、马来酸氯苯那敏的相对校正因子，进行含量计算，结果准确可靠。

SHIMADZU LC-2010A HT高效液相色谱系统，LC solutionlite色谱工作站，
Waters e2695高效液相色谱系统，Empower工作站；电子天平Mettler Toledo XS205；Waters symmetry C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)，Alltima C18(4.6 mm×150 m m，5 μm)，Wates sunfire C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)，Agilent C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)；乙腈、磷酸为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

对乙酰氨基酚(100018-200408)、马来酸氯苯那敏(100047-200606)和咖啡因(171215-200608)均购于中国药品生物制品检定所，7个批次氨咖黄敏胶囊样品购于3个不同厂家。

2.1 一测多评的方法学考察
2.1.1 色谱条件
色谱柱:Waters symmetry C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)，Alltima C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)，Waters sunfire C18(4.6 mm×150 mm，5 μm), Agilent C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)。

流动相:磷酸盐缓冲液—乙腈(65:35)，柱温30 ℃，流速1.0 mL·min-1，检测波长(λ) 227 nm，进样量10 μL。

在上述色谱条件下，理论塔板数以各组分色谱峰计均不低于4 000，各组分之间的分离度大于1.5，对照品和供试品的HPLC图见图1。

2.1.2 对照品溶液的制备
精密称取对照品对乙酰氨基酚和咖啡因适量，置同一容量瓶中，用流动相溶解并定量稀释制成1 mL中约含对乙酰氨基酚2.5 mg、咖啡因0.15 mg的溶液，作为对照品储备液I；精密称取对照品马来酸氯苯那敏适量，用流动相溶解并定量稀释使
1 mL对照品储备液II中约含马来酸氯苯那敏0.01 mg。

2.1.3 供试品溶液的制备
取氨咖黄敏胶囊内容物，研细，精密称取适量，加流动相适量溶解后定容至100 mL，摇匀滤过，精密量取滤液5 mL，用流动相稀释并定容至25 mL，摇匀。

2.1.4 专属性试验
取处方中除咖啡因、对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏外的其它原辅料，按照供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液，在上述色谱条件下进样10 μL，取对照品溶液同法操作，结果表明其它原辅料对对乙酰氨基酚、咖啡因和马来酸氯苯那敏的含量测定无干扰。

2.1.5 线性范围
精密量取2.1.2中制备的对照品储备液I、II各1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL，用
流动相稀释并定容至10 mL，摇匀。

取上述溶液各10 μL，注入高效液相色谱仪，按照2.1.1中的色谱条件，以峰面积(Y)对进样浓度(x)进行线性回归，得：对乙酰
氨基酚Y=18 078x+281 408，r2=0.999 7，线性范围2.405 2～7.215 6 μg；咖啡因Y=20 573x+19 189，r2=0.999 9，线性范围0.159 1～0.477 3 μg；马来
酸氯苯那敏Y=17 835x-719，r2=0.999 8，线性范围0.010 45～0.031 35 μg。

2.1.6 稳定性试验
精密吸取供试品溶液10 μL，于配制后 0、2、4、8 、12 h 分别进行测定，对乙
酰氨基酚、咖啡因、马来酸氯苯那敏色谱峰峰面积RSD分别为0.34%、0.22%、0.25% (n=5)，表明供试品溶液在室温12 h内稳定。

2.1.7 精密度试验
取同一供试品溶液，按照上述色谱条件，连续进样6次，咖啡因、对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏在HPLC仪器上的色谱峰面积RSD分别为0.2%，0.1%，0.5%，表明仪器精密度良好。

2.1.8 重复性试验
取同一批次氨咖黄敏胶囊(哈药集团三精千鹤制药有限公司，批号：20150402)6份，精密称定，按2.1.3制备供试品溶液，在2.1.1色谱条件下进样测定百分含量，咖啡因、对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏平均质量分数分别为92.0%、100.1%、96.9% ，RSD分别为0.46%、0.45%、0.87%，表明此方法重复性良好。

2.1.9 加样回收率试验
按照处方比例，精密称取相当于处方量80%、100%和120%的对乙酰氨基酚、咖啡因、马来酸氯苯那敏对照品，分别加入相应量的混合辅料及其它组分，按2.1.3
制成供试品溶液，以2.1.1中色谱条件测得咖啡因、对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏的平均加样回收率分别为99.9%、100.0%、99.8%；RSD值分别为0.46%、0.34%、0.82%，表明此方法加样回收率较好。

2.2 相对校正因子的确定
2.2.1 相对校正因子计算
按2.1.2制成6组对照品储备液，分别精密量取对照品储备液I、II各1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL，用流动相稀释并定容至10 mL，摇匀。

取上述溶液各10 μL，分别注入液相色谱仪，测定各组分的峰面积。

按照相对校正因子的计算公式：fsi = fs/fi = AsCi / AiCs(式中Cs为内标物浓度；Ci为待测成分i的浓度；As为内标物峰面积；Ai为待测成分i的峰面积)[5]，分别计算内标物对乙酰氨基酚与咖啡因、马来酸氯苯那敏之间的相对校正因子。

每组对照品储备液稀释成5个浓度，每个浓度分别计算出相对校正因子后，取平均值作
为一个结果，结果见表1。

2.2.2 不同色谱柱和仪器对校正因子的影响
考察SHIMADZU LC-2010A HT 和Waters e2695两种高效液相色谱系统，选用Waters symmetry C18(4.6 mm×150 mm, 5 μm)，Alltima C18(4.6 mm×150 mm, 5 μm)，Wates sunfire C18(4.6 mm×150 mm, 5 μm)，Agilent C18(4.6 mm×150 mm, 5 μm)这4种色谱柱，测试并计算的结果见表2。

2.2.3 相对校正因子的确定
综合影响相对校正因子的上述因素，将各次实验获得的相对校正因子取平均值，确定内标物对乙酰氨基酚与咖啡因、马来酸氯苯那敏与之间的相对校正因子分别为
1.108 3、1.402 8。

2.3 待测组分色谱峰定位
利用相对保留值判断出待测峰位置，相对保留值的计算公式为：ri/s=tR(i)/tR(s)(i
为待测成分，s为内标物)，实验中分别考察不同色谱柱和不同高效液相系统中色
谱峰相对保留值的重现性，表3中RSD<5%，说明利用相对保留值法定位待测成分色谱峰可行。

2.4 QAMS与外标法结果比较
分别精密吸取照2.1.3中制备的供试品溶液各10 μL注入高效液相色谱仪进行测定，采用一测多评法和外标法分别计算氨咖黄敏胶囊中咖啡因、对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏的含量，并对结果进行比较(表4)。

结果表明，2种方法测得的咖啡因和
马来酸氯苯那敏的含量没有显著差异，RSD<0.78%。

对乙酰氨基酚是氨咖黄敏胶囊中的主要有效成分，且几种成分中含量最高，测定时产生的误差相对较小，此外，对乙酰氨基酚对照品廉价易得，因此，本文选用对乙酰氨基酚作为内标物对氨咖黄敏胶囊进行HPLC“一测多评”测试3种成分含量。

在一些文献中，常将马来酸峰误认为马来酸氯苯那敏峰，因此本文参照中国药典2015年版[6]收载的马来酸氯苯那敏片含量测定的方法，明确了色谱图中的马来酸峰和氯苯那敏峰，且本文中马来酸氯苯那敏峰的面积均按氯苯那敏峰计算。

本试验中利用内标峰的保留时间和色谱峰保留时间的相对保留值来定位待测成分，能够准确判断出目标峰的位置，结果表明，上述方法进行峰的定位是有效可行的[7]。

本试验利用HPLC“一测多评”的方法测定了氨咖黄敏胶囊中3种组分的含量，并讨论其在不同浓度、不同色谱柱和不同高效液相色谱仪条件下的相对校正因子，RSD<1%，表明校正因子重复性良好。

将校正因子应用于氨咖黄敏胶囊的含量计算，所得结果与外标法比较并无显著差异，因此，将校正因子应用于氨咖黄敏胶囊
的含量测定具有一定的实际意义。

【相关文献】
[1] 王智民,高慧敏,付雪涛,等.一测多评法中药质量评价模式方法学研究[J].中国中药杂
志,2006,23(33):1925-1928.
[2] 国家药品标准.化学药品地方标准上升国家标准·第三册[S].北京：国家药典委员会出版社，2002：263.
[3] 孙超,崔潇,成秉辰,等.HPLC法同时测定氨咖黄敏胶囊中3种成分[J].哈尔滨商业大学学
报,2013,29(2):145-147.
[4] 范梅娟.HPLC法同时测定小儿氨酚烷胺颗粒中3种成分的含量[J].今日药学,2011,21(5):291-294.
[5] 张静娇,刘俊有,季雪.一测多评法测定香丹注射液中丹参素钠、原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B 含量[J].辽宁中医药大学学报,2015,9(17):50-52.
[6] 国家药典委员会.中华人民共和国药典2015年版(二部)[S].北京:中国医药科技出版社,2015:63.
[7] 王肖,潘伟东,杨明宇.一测多评法的应用及研究概况[J].承德医学院学报,2015(2):157-159.。