白血病患者cyclin E2、CDK2的表达与复发的关系

白血病患者cyclin E2、CDK2的表达与复发的关系
徐丽粉;郭晓楠;刘英芳
【摘要】目的探讨急性白血病患者细胞周期蛋白E2 (cyclin E2)和细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)的表达情况及预后意义.方法急性白血病(AL)患者70例,包括新近诊断急性白血病患者41例、复发患者10例和完全缓解期患者19例.14例健康人为正常对照.应用半定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测骨髓或外周血单个核细胞cyclin E2和CDK2 mRNA表达水平.结果 Cyclin E2和CDK2 mRNA 在初治的AL患者阳性表达明显高于正常对照组(70.7％ vs 0％,P＜0.05),cyclin E2在完全缓解组中阳性率低于初治组(47.4％ vs 70.7％,P＜0.05),初治组CDK2阳性率高于正常对照组(78.0％ vs 28.6％,P＜0.05).cyclin E2 mRNA阳性表达患者完全缓解率低于阴性表达者(48.3％ vs 91.7％,x2 =5.016,P＜0.05).结论 Cyclin E2和CDK2可望成为急性白血病早期预后指标和复发判断指标.%Objective To study the expression and clinical prognostic significance of cyclin E2 and cyclin dependent kinase 2(CDK2) Mrna in acute leukemia patients. Methods This study included 70 patients with acute leukemia (including 41 cases of newly diagnosed acute leukemia, 10 patients with recurrent leukemia and 19 cases of complete remission) ,and 14 healthy controls. Cyclin E2 and CDK2 Mrna expression were detected in acute leukemia patients and normal controls with RT-PCR. Results Cyclin E2 and CDK2 Mrna expression of newly diagnosed acute leukemia were significantly higher than those of normal controls(70. 7% vs 0%, P <0. 05),and the expressions of two items in complete remission were significantly lower than those in newly diagnosed acute leukemia(47. 4% vs 70. 7%, P <0.
05),newly diagnosed group CDK2 positive rate were higher than normal control group(78. 0% vs 28. 6% , P < 0. 05). The complete remission rate was significantly lower in the positive expression of cyclin E2 Mrna patients than that in the negative patients(48. 3% vs 91. 7% ,χ2 =5. 016, P <0. 05). Conclusion Cyclin E2 and CDK2 may become novel markers for judging prognosis and recurrence in early stage of acute leukemia.
【期刊名称】《临床荟萃》
【年(卷),期】2012(027)005
【总页数】3页(P410-412)
【关键词】白血病;细胞周期蛋白E;细胞周期蛋白依赖性激酶2
【作者】徐丽粉;郭晓楠;刘英芳
【作者单位】河北医科大学第二医院血液内科,河北石家庄050000;宁晋县医院内科,河北宁晋055550;河北医科大学第二医院血液内科,河北石家庄050000;宁晋县医院内科,河北宁晋055550
【正文语种】中文
【中图分类】R733.7
细胞周期蛋白E2(cyclin E2)是新发现的E型细胞周期蛋白,它在正常组织不表达或低表达,在肿瘤组织中呈阳性高表达,有可能成为肿瘤标志物,有关其在白血病中的表达及与细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)的关系目前尚未见相关报道。

我们用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测了70例成人急性白血病(acute leukemia,AL)患者的cyclin E2 和CDK2的表达,并观察了其与临床预后的关系。

1.1 研究对象 2006年3月至2007年1月河北医科大学第二医院血液内科住院和门诊随访的AL患者70例,经过骨髓细胞形态学、细胞化学、免疫表型、细胞遗传学、分子生物学等检查确诊,均符合法国、美国和英国(FAB)和WHO诊断标准。

初治AL 组41例,其中急性髓系白血病患者31例,急性淋巴细胞白血病患者10例(L2 9例、L3 1例);复发难治组10例;完全缓解期组19例。

男41例,女29例,年龄14～75岁,中位年龄42岁。

14例正常人(来自健康献血员)作为对照组,男10例,女4例,年龄18～35岁,中位年龄29岁。

初治组、复发难治组、完全缓解组在性别、年龄、肝功能、有无感染等方面差异无统计学意义,具有可比性。

1.2 治疗方案及疗效判断对于初治AML患者首选柔红霉素+阿糖胞苷(DA方案)、三尖杉酯碱+阿糖胞苷(HA方案),ALL患者首选长春新碱+柔红霉素+环磷酰胺+地塞米松及左旋门冬酰胺酶(VDCP或VDCPL方案);APL患者首选全反式维甲酸或亚砷酸治疗。

对于耐药病例AML选用去甲氧柔红霉素+阿糖胞苷(IA方案);ALL选用大剂量阿糖胞苷加VCMP方案;APL选用维甲酸和亚砷酸治疗。

疗效判断参照张之南主编的第2版《血液病诊断及疗效判断标准》,分为完全缓解(CR)、部分缓解(PR)及未缓解(NR)。

凡符合下述任何1项者即为复发难治性AL:①标准诱导缓解方案2个疗程未能完全缓解;②完全缓解后1年内复发;③复发2次或多次。

1.3 单个核细胞(MNC)制备和细胞总RNA提取取肝素抗凝骨髓液2 ml,常规淋巴细胞分离液分离出单个核细胞,磷酸盐缓冲液洗涤后,用TRIzol试剂盒(Gibco公司产品)提取细胞总RNA,经紫外线分光光度计和10 g/L琼脂糖凝胶电泳检验RNA 质量。

逆转录反应合成cDNA,Cyclin E2:上游引物5′-TGG CTT TTA GAG GTA TGT GAA-3′,下游引物5′-TAA TGA ATC AAT GGC TAG AAT-3′,产物426
bp;CDK2:上游引物5′-GCT TTC TGC CAT TCT CAT CG′,下游引物5′-GTC CCC AGA GTC CGA AAG AT 3′,产物316 bp;PCR产物分析:用cyclin E2或TopIIβ与β-actin吸光度积分比值反映两者转录本含量,cyclin E2/β-actin和CDK2/ β-actin
均以＞0.15为阳性表达。

1.4 统计学方法应用SPSS 17.0统计软件包处理,率的比较采用卡方检验,等级资料比较采用秩和检验,相关性检验用Pearson相关分析,P＜0.05为差异有统计学意义。

2.1 Cyclin E2、CDK2 mRNA表达情况 Cyclin E2m RNA阳性率在初治组、完全缓解组、难治复发组均明显高于正常对照组(P＜0.05);在14例正常人骨髓和外周
血中检测不到cyclin E2 m RNA表达;初治组CDK2 m RNA阳性率明显高于正常
对照组(P＜0.05)。

见表1,图1。

2.2 cyclin E2表达与临床预后对41例初治AL患者进行疗效评估,cyclin E2 mRNA阳性表达的AL患者CR低于cyclin E2 m RNA阴性表达的AL患者
(χ2=5.016,P＜0.05)。

对19例患者进行随访,其中有1例失访。

发现cyclin E2 m RNA阳性表达的10例中有4例复发,复发率为40.0％;cyclin E2阴性表达的9例
中有1例复发,复发率为11.0％。

Cyclin E2阳性表达患者复发率与阴性表达者复
发率差异无统计学意义(P＞0.05)。

3例初治时cyclinE2 mRNA高表达者经治疗达CR后其表达下降。

结果见表2。

Cyclin E2是细胞周期中G1/S期的正性调节因子,它的异常表达将导致细胞周期调节紊乱,与肿瘤的发生有关。

Cyclin E2与CDK2组成丝氨酸-苏氨酸激酶全酶复合体,调节G1期的进程。

CDK2为苏氨酸激酶,它作为催化亚单位,功能性的cyclin
E2/ CDK2促进细胞从G1期进入S期。

当cyclin E2和CDK2表达增高时这种细
胞周期检测点的作用弱化,进而引起细胞S期进入增加,与肿瘤发生有关。

CDK2表
达异常与乳腺癌、胃癌、结肠癌、前列腺癌、肾细胞癌等肿瘤的发生、发展有密切关系[1-2],CDK2可以出现、缺失、过表达等变化,从而参与恶性肿瘤的发生[3]。

目前国外学者研究表明cyclin E2在正常细胞中的表达与增殖有关[4-5]。

Cyclin E2
m RNA阳性表达可见于肺癌、胃癌、宫颈癌、乳腺癌等许多实体肿瘤[5-8]。

Cheng等[9]的研究表明伴有细胞遗传学异常和P53突变的人骨髓瘤细胞系
MM17和U266细胞的cyclin E2呈高表达。

Cyclin E2阴性小鼠的肝脏再生能力较强,多倍体细胞增加[10]。

我们的研究结果显示:在初治的AL患者中, cyclin E2 m RNA的阳性率较完全缓解组和正常对照组中明显升高;复发难治组cyclin E2 m RNA的阳性率和表达水平较正常对照组也明显升高。

我们的研究与王颖等[11]对AL中cyclin E2和survivin 的相关性研究结果相一致,即cyclin E2在白血病中呈高表达,与白血病细胞的恶性程度有密切关系。

疗效评估发现在cyclin E2 m RNA阳性表达患者中完全缓解率低于阴性表达者,同时cyclin E2高表达的患者有较高的复发率。

另外,在初治AL患者中CDK2 m RNA阳性率显著高于对照组,提示CDK2表达异常与白血病细胞的增殖及发病过程有关。

Cyclin E2 m RNA阳性表达患者缓解率低于阴性表达者, Cyclin E2阳性表达患者复发率与阴性表达者差异无统计学意义。

相关分析表明cyclin E2和CDK2 mRNA表达水平呈正相关,二者同时异常高表达者肿瘤恶性度提高且容易复发。

Cyclin E2和CDK2在白血病患者均表达增高,cyclinE2阳性表达的白血病患者缓解率低,易复发,治疗效果差。

提示Cyclin E2、CDK2参与白血病的发生与发展,阳性表达是白血病预后不良指标。

在白血病患者中,cyclin E2和CDK2呈正相关,提示两者在白血病发病机制中可能作为复合体起协同作用。

推测,cyclin E2/CDK2可能在磷酸化cyclinE2/CDK2复合体中起主要作用,而不是提高它的基因和蛋白水平,cyclin E2/CDK2的升高使cyclin E2的活性增加,驱使细胞超越
G1/S期限制点而导致细胞周期缩短、细胞增殖增加,从而在白血病的发生中起重要作用。

联合检测两者的表达更能反映两者在白血病发病过程中的作用及其与肿瘤生物学行为之间关系。

对判断白血病的预后和疗效有一定价值。

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