正交实验法优选补肾化瘀浸膏的水提取工艺

正交实验法优选补肾化瘀浸膏的水提取工艺
欧阳露;段雪梅;李洪亮;刘明;刘英;汪选斌
【摘要】Objective To optimize the aqueous extraction process for bushenhuayu extracts (BSHY). Meth-ods L9 (34 ) orthogonal experiments were conducted to choose the optimal conditions by using naringin and icariin as quantitative index. The factors included time,volume of water,frequence of extraction. Results The optimal conditions were 8 fold volume of water with 1 h per time for three times. Conclusion The method of extraction is reasonable,sta-ble and relatively ideal to extract the active ingredients of BSHY for its real preparation.%目的：优选补肾化瘀浸膏的最佳水提取工艺。

方法采用L9(34)正交实验法，以干膏得率、淫羊藿苷和柚皮苷含量为考察指标，以提取时间、提取水量、提取次数为考察因素，筛选最佳水提取工艺条件。

结果最佳提取工艺为：药材加8倍量水，提取3次，每次1h。

结论该提取工艺科学合理，稳定可靠，可行性佳，可作为实际生产提取工艺。

【期刊名称】《实用药物与临床》
【年(卷),期】2015(000)008
【总页数】3页(P951-953)
【关键词】补肾化瘀浸膏;正交实验;水提取工艺
【作者】欧阳露;段雪梅;李洪亮;刘明;刘英;汪选斌
【作者单位】湖北医药学院附属人民医院中药药理实验室，湖北十堰442000; 湖北医药学院药学院，湖北十堰442000;湖北医药学院药学院，湖北十堰442000;
湖北医药学院附属人民医院中药药理实验室，湖北十堰442000; 湖北医药学院药学院，湖北十堰442000;湖北医药学院附属人民医院中药药理实验室，湖北十堰442000; 湖北医药学院药学院，湖北十堰442000;湖北医药学院附属人民医院中
药药理实验室，湖北十堰442000; 湖北医药学院药学院，湖北十堰442000;湖北医药学院附属人民医院中药药理实验室，湖北十堰442000; 湖北医药学院药学院，湖北十堰442000
【正文语种】中文
补肾化瘀浸膏处方由淫羊藿、骨碎补、熟地、当归、地鳖虫五味药材组成，实验研究证实，该方具有补肾壮骨、活血止痛之功效，对原发性骨质疏松症有良好的治疗作用，具有很高的临床应用和开发价值[1-3]。

本实验在前期实验的基础上，进一
步考察补肾化瘀浸膏的水提取工艺，使其制备工艺更加科学合理，从而保证其临床应用的安全有效。

1.1 仪器 SHIMADZU LC-20A系列高效液相色谱仪：工作站LC solution，LC-
20AD泵，SIL-20A自动进样器，SPD-M20A检测器。

分析天平(FA2004型,上海天平仪器厂)。

超声波清洗机(KQ3200型,昆山市超声仪器有限公司)。

1.2 试药淫羊藿、骨碎补、熟地、当归、地鳖虫(5味药材均由湖北医药学院附属
人民医院中药房提供)，淫羊藿苷、柚皮苷对照品(中国食品药品检定研究院，批号:200415、201111)，甲醇(分析纯)、乙腈(色谱纯)，水为超纯水。

2.1 正交实验设计根据药材性质和实际生产要求选取提取水量(A)、提取时间(B)以及提取次数(C)为因素，正交试验因素水平表见表1。

2.2 干膏得率的测定称取处方量药材共9份，每份48 g，按L9(34)正交表进行实验，提取液浓缩至100 mL，静置放冷后称量其质量。

取正交实验提取液，摇匀，分别量取50 g，置于干燥至恒重蒸发皿中，水浴蒸干，于105 ℃干燥3 h，然后
至干燥器中冷却30 min，迅速用分析天平精密称定质量，计算干膏得率，干膏得率=干膏质量/原药材质量×100%。

2.3 淫羊藿苷、柚皮苷含量测定[4]
2.3.1 色谱条件及系统性试验色谱柱C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；梯度洗脱，流动相：磷酸水溶液(0.2% H4PO3，pH=2.9)-乙腈(0～13 min体积分数为77%，13～20 min体积分数为67%，20～35 min体积分数为77%)，检测波长
为269 nm，流速0.8 mL/min，柱温30 ℃，进样量10 μL，各峰的理论塔板数
不低于5 000。

2.3.2 溶液的制备对照品溶液配制：分别取淫羊藿苷及柚皮苷对照品适量，精密称定，加甲醇分别制成每1 mL约含0.3 mg的淫羊藿苷和0.12 mg的柚皮苷溶液，摇匀即得。

样品溶液的制备：精密称取上述提取液约20 g，置于100 mL锥形瓶中，精密加入甲醇100 mL后精密称定重量，超声提取30 min，静置放冷至室温，精密称定质量，以甲醇补足损失重量，滤过，续滤液用0.45 μm微孔滤膜滤过，
即得。

阴性对照品溶液的制备：按处方和工艺制法分别制备不含淫羊藿和骨碎补的阴性样品，再按“样品溶液的制备”方法制得阴性样品溶液。

2.3.3 淫羊藿苷、柚皮苷的含量测定精密吸取对照品溶液和样品溶液各10 μL注入液相色谱仪，用外标两点法计算含量，色谱图见图1。

2.4 实验结果见表2。

以干膏得率、淫羊藿苷与柚皮苷含量的综合评分作为指标，根据各指标对提取工艺的影响程度赋予不同的权重系数，综合评分=(干膏得率隶
属度×0.4+淫羊藿苷隶属度×0.3+柚皮苷隶属度×0.3)×100%[5]。

以多指标实验公式法统计分析P值为考察指标，由表2中极差R值大小，判断各因素作用的主次，作提取工艺方差分析综合得出最佳水提取工艺。

方差分析结果见表3。

极差大小分析显示，以各指标的综合评分为考察指标，影响水提取效果的顺序为C>B>A，且C3>C2>C1，B2>B3>B1，A3>A1>A2。

方差分析结果显示，因素
C(提取次数)有显著影响，而因素A(提取水量)、因素B(提取时间)没有显著影响。

结合实际生产中考虑到节约成本和时间，确定最佳提取工艺为A1B1C3，即用8
倍的水量提取3次，每次提取1 h。

2.5 验证实验称取处方量药材共3份，每份48 g，按照优选的最佳提取工艺：提
取水量8倍，提取时间1 h，提取次数3次进行提取实验。

按照上文所述进行干膏得率测定、淫羊藿苷及柚皮苷含量测定，计算得出验证实验结果。

验证实验结果见表4。

结果显示该工艺重复性好，稳定可行。

本研究中的补肾化瘀经验方在临床以水煎剂使用，前期动物实验得出的对原发性抗骨质疏松症的治疗作用也是使用水煎剂，且方中主要的有效成分水溶性较好，因此采用水提法作为该浸膏的提取方法。

淫羊藿苷和柚皮苷分别是方中主药的有效成分，具有明确抗骨质疏松的药理作用[6-7]，因此，选择检测淫羊藿苷和柚皮苷的含量
作为提取工艺的考察指标。

中药提取工艺的考察如以单一指标成分作为考察指标难以体现中药效应整体性的特征，本实验选择以淫羊藿含量、柚皮苷含量以及干膏得率共同作为该制剂提取工艺的考察指标，根据各指标对提取工艺影响的程度不同，赋予不同的权重系数，进行加权综合评价，使所考察提取工艺更加科学合理。

综上所述，本研究结果表明，优选出的水提取工艺科学合理，稳定可靠，操作简单，可行性佳，可作为实际生产提取工艺。

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