微生物检测论文

微生物实训论文
张志新
（北京电子科技职业学院 10生物技术 20100005032）
实训题目游泳池水质微生物指标检测与评价
摘要由于学校的游泳池经常开放，学生也开了泳课，所以游泳池水质的好坏直接会影响到游泳者的身体安全。

因此我们对游泳池中的水进行了采样，稀释，对水中的微生物进行了培养，观察。

看是否有对人体有害的微生物。

关键词游泳池水质微生物
前言
微生物广泛分布于大自然界中，绝大多数微生物对人类和动植物是有益的，有些甚至是必须的：但另一方面，微生物也是造成环境污染、水源变质的主要原因，甚至会引起接触者或饮用者患病。

水体是微生物生存的重要场所。

无论是天然水体还是人工水体，水中溶解或悬浮着多种无机或有机物质，能供给微生物营养而使其生长繁殖，所以在各种水体中都有大量的与其环境相适应的各种微生物生存。

游泳池水与人的皮肤、头部等直接接触，水质的好坏将直接影响游泳者的健康。

游泳池水质达不到标准会传播流行性角膜炎、中耳炎、痢疾、伤寒等疾病。

所以我们必须加强对游泳池水质的管理与检测。

目前，世界各地对游泳池的水质标准都有严格的规定，我国目前已制定颁发了《游泳场所卫生标准》和《游泳池给水排水设备规范》两个技术法规。

一实验方案
国标规定：
游泳池中细菌总数≤1000个／L，大肠杆菌≤18个／L
游泳池水质的检测选用“平板菌落计数”方法进行水中细菌总数的测定，通过制备培养基进行取样培养，测出水体中大肠杆菌及其他菌落总数，进而对水体质量进行评价。

二试验方法
2.1 实验材料
2.1.1 实验器材
2.1.1.1 三角瓶。

2.1.1.2 量筒。

2.1.1.3 pH计或精密pH试纸．
2.1.1.4 高压消毒锅．
2.1.1.5 试管。

2.1.1.6 灭菌平皿：直径9 cm .
2.1.1.7 灭菌刻度吸管：10mL、2mL、1mL .
2.1.1.8 酒精灯。

2.1.1.9 恒沮培养箱。

2.1.1.10显微镜
2.1.2培养基和试剂
2.1.2.1 营养琼脂培养基见GB/T18204.1一2000
中第4章。

2.1.2.2 10 %（m/m）硫代硫酸钠溶液，121℃高
压灭菌20min .
2.2操作步骤
2.2.1 采样瓶的要求和预处理：用于微生物分析的采样瓶要无酸、无碱、无毒的玻璃容器。

采样瓶在灭苗前加人足量的10%（m/m）硫代硫酸钠溶液。

一般情况下125mL的采样瓶加0.1ml，加完后121℃高压灭菌20min。

2.2.2 用灭菌吸管吸取均匀水样1mL，注人到灭菌平皿内，另取1mL注人另一灭菌平皿内作平行接种．取lmL加到9mL无菌生理盐水中作1 : 10稀释，混匀后
取ZmL分别加到两个无菌平皿内，每皿1mL。

2.2.3 将溶化并冷却至45℃的营养琼脂培养基
倾注平皿内，每皿约15mL，另取一个不加样品的
平皿作空白对照。

立即旋摇平皿，使水样和培养
基充分混匀。

待琼脂凝固后翻转平皿．置36℃士
1℃恒温箱内培养48h。

2.3 菌落计数方法先用肉眼观察，点数菌落
数，然后再用放大5——10倍的放大镜检查，以
防遗漏．记下各平皿的菌落数后．求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数。

若平皿中有连成片状的菌落或花点样苗落蔓延生长时，该平皿不宜计数。

若片状菌落不到平皿的一半，而其余一半中茵落分布又很均匀时．则可将此半个平皿菌落计数后乘以2，所得结果代表全皿菌落数。

三实验结果与讨论
第一次做出的三个培养皿中均没出现菌落，我们
分析原因可能是取的水样是表层水和进水口的水。

于
是我们又进行了第二次采样，采取了深一些的水并避
开了放水口，按照标准实验步骤做完实验培养任然没
有菌落生成。

四实验结论
根据两次的游泳池水质检测结果我们初步得出的结论是：本校游泳池水质达到《游泳池水质标准》。

同学们可以放心的游泳。

五实训感受
在校学习生物技术专业已近一年半的时间。

在此期间我学到了生物方面的很多知识，比如微生物的培养与鉴定、生物分离与纯化、基因操作、现代仪器分析、药剂学等这些都是现实生活中非常实用的知识。

第二学年的第一学期已敲进尾声，我们迎来了大学学习的第三次实训，前两次的实训经验和平时扎实的理论学习与操作能力为此次实训奠定了坚实的基础。

在此次游泳池水质微生物指标检测与评价实训中我们不但巩固和练习了平时学习的知识还增长了其他方面的知识。

也更加学习到了同学之间在实验过程当中相互配合与讨论的重要性。

在老师布置完实训任务后，我们小组立即展开了实验方案讨论，确定方案并经老师检查指导后我们就开始准备实验所需的器材与药品为第二天的实验做好了充分准备。

第一次做出来的实验结果是本校游泳池中的水没有一点微生物，经过讨论我们全班又进行了第二次实验。

任然得出游泳池水中没有微生物的结果。

这次实验我们同学之间、同学和老师之间都相互讨论配合得非常好，实验也进行的非常顺利。

在此过程中我不仅增强了收集与分析处理复杂信息的能力也提高了理论联系实际和运用所学知识分析解决生产中实际问题的能力。

通过这次实训我也熟练掌握样品微生物检验的基本操作技术，并了解到熟练的操作技能与扎实的专业知识是分不开的。

所以在以后的学习当中我会努力学习理论知识为以后进企业单位中的实际操作打下坚实牢固的理论基础。

同时感谢两位指导老师给我们认真的讲解与实验指导才使我们顺利地完成了实训任务并学到了许多课堂内外的知识。

附录
参考文献
《游泳池水质标准》说明(CJ244-2007)
《游泳池水质标准》说明 (CJ244-2007)
随着2008年北京奥运会的临近，作为夏季奥运会非常重要的竞赛内容之一的室内水上运动，都离不开对游泳池水质的控制、监测与处理，要求池水的感官性状良好,水中不含有病原微生物,水中所含化学物质不得危害人体健康,保证游泳池水水质的安全、可靠。

由中国建筑设计研究院作为主编单位，中国游泳协会、中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所等12家单位参编，负责编制的《游泳池水质标准》(CJ244－2007)已于2007年10月1日开始执行了，这个标准以世界卫生组织(WHO)制定的《游泳池、按摩池水环境指导准则》(2006年版)为主要依据，同时执行国际游泳联合会(FINA)水质卫生标准，对我国原执行的《游泳场所卫生标准》(GB9667-1996)中“人工游泳池池水水质卫生标准”进行修改、编制的。

《游泳池水质标准》(CJ 244-2007)的实施必将对我国游泳场所的卫生管理，防止传播疾病和保障游泳池者的健康和安全发挥重要的作用，同时为今后在我国举行的各项国际游泳比赛在水质标准上提供技术保证，使得我国的游泳池水质标准与发达国家接轨，对于北京奥运会的顺利举行有着非常积极的作用。

在这个标准中，遵循了以下的几个主要的原则，特别是针对水质水质指标项目的确定应有足够的基础资料，具有可行检测方法，水质限值应确保水质感官良好，防止水性传染病爆发及其他健康的危险，还应考虑其他处理技术和化验
检测费用，是符合我国国情和具有可操作性的。

见表1－2
我们从水质分析、监测的角度对本标准执行的主要指标进行对比和分析，以期更好地了解本标准，为游泳池水质的保障，提供更好的、更加完善的水质分析监测解决方案。

第一项浊度
浊度是反映游泳池物理性状的一项指标，从消毒和安全考虑，池水的浑浊度应高于等于生活饮用水卫生标准要求，依据我国目前执行的生活饮用水卫生标准(GB5749-2006)对浊度的限值要求为龙头出水为1NTU，考虑到国内游泳池常规的水处理沉淀-砂滤-氯化在正常合理的运行条件下，浊度去除只能达到≤2 N TU。

而参考世界卫生组织“游泳池环境指导准则”指出泳池水质浊度宜在0.5 N TU、德国游泳池水质标准为0.2过滤后下限值～0.5 NTU池水上限值、西班牙游泳池水质标准为0.5~1 NTU。

考虑我国国情，在本标准中将浊度限值定为1 NTU。

第二项 pH值
由于大多数消毒剂的杀菌作用取决于pH，因此必须使pH保持在一种消毒剂的最佳有效范围内，所以在游泳池水处理中，调节池水的pH很重要，这个方面比生活饮用水的pH允许范围在6.5~8.5对人门的饮用和健康的影响有更加严格的要求。

第三项总溶解性固体(TDS)
总溶解性固体是指溶解在水中的所有无机金属、盐、有机物的总和，但不包括悬浮在水中的物质，其监测意义在于控制池水的更新。

在国外游泳池水质TDS的规定中，对TDS的控制是有相对于原水TDS的，如美国ANSI/NSPI-1标准规定游泳池水总溶解性固体(TDS)比原水高出1000~3000 mg/L；也有按照绝对值控制的，如澳大利亚要求游泳池水总溶解性固体(TDS)≤1000 mg/L，理想值400 ~500 mg/L。

第四项消毒剂余量限值与氧化还原电位(ORP)在线测量
在游泳池水处理过程中为了达到消毒效果，采用了各种消毒剂消毒，所以对消毒剂余量的考量相对比较复杂，有许多控制值，这些限值的获得是在水质微生物安全性的前提下，更好地维护人的身体健康、符合人的感官要求。

主要消毒剂限值，见表－3
例如，我国主要采用氯消毒，化合性余氯会引起结喉炎和鼻粘膜炎，这种有强烈刺激性的化合物也是引起“室内游泳池异味”的物质，所以世界各国对游泳池水中的化合性余氯均做出了不同规定，德国0.2 mg/L；丹麦0.2 mg/L；意大利0.3 mg/L；瑞士0.4 mg/L；挪威0.5 mg/L。

再例如，我国使用二氯异氰酸钠和三氯异氰酸盐消毒剂也越来越普遍，二氯异氰尿酸钠和三氯异氰尿酸盐投入池中，在水中分解成氰尿酸和氯，其中的氰尿酸是稳定剂。

它能够稳定的原因是先控制次氯酸一次只生成一定的数量，使药剂中的氯逐渐释放出来，即使在日光照射下，也只有很少一部分次氯酸流失。

随着氰尿酸会不断积累，会导致水质过稳，减少氯的消毒效果，使菌群增加，产生藻类。

氰尿酸过多可能使氯不能充分发挥消毒作用，所以本标准增加氰尿酸的控制指标。

氧化还原电位(ORP)是泳池消毒剂投加量的控制指标，用这个反应迅速、
测量原理简单的电化学指标来测量消毒剂量的活性，而不是用消毒剂余量普遍采用的化学检测方法来测定消毒的量。

各国游泳池经常保持ORP在650mV以上，可防止病菌和微生物生长。

ORP能够体现消毒剂的作用、活性炭的性能等指标，而且也可以在线监测、并与余氯/总氯、浊度的在线监测共同运行，是比较好的游泳池日常维护参数，提高游泳池的管理水平。

第五项菌落总数与总大肠菌群
发达国家的游泳池细菌总数的限值；德国规定过滤后＞20CFU/mL，池内水＜100 CFU/mL；英国规定池内水＜100 CFU/mL；美国加利福尼亚规定＜200 CFU /mL；法国规定＜100 CFU/mL。

只要循环周期合适，有足够的消毒剂余量，pH维持在一定水平，水质平衡，同时经常反冲洗过滤器，并且游泳池管理完善，控制池水中的微生物并不困难。

因为微生物等指标和人体健康直接相关，有必要采用比较高的标准。

本水质标准中提出菌落总数≤200CFU/L。

水中总大肠菌群国际上均以100mL水样中污染的总大肠菌群最大可能数(MPN)表示。

各国的限值要求(MPN/100mL)均为不中检出，本标准也遵循这样的限值。

而当消毒失效，过滤器不能达到工作要求，特别是活性炭过滤器中细菌繁殖，管道系统和平衡池水质变差趋势，水质受污染时，就必须进行葡萄球菌和金黄色葡萄菌的非常规检测。

第六项尿素
在我国，长期以来，游泳池水中的尿素是用来评价池水水质卫生的一个重要指标，GB9667-1996规定尿素≤3.5 mg/L，其含量超标时对人体产生危害，并为此制定了游泳池水尿素的分析检测国家标准。

有文献表明，泳池开放使用初期，池水尿素与耗氧量呈正比关系，随着时间的延长，尿素的指示性比之于耗氧量更为明显，这是由于耗氧量虽是反映有机物污染的间接指标，但它表示的是容易氧化的有机物质。

因此随着时间的变化，其含量改变不显著，故耗氧量作为污染指标不够敏感，而尿素可更好地反映出池水的新旧程度。

所以本标准中继续采用G B 9667-1996标准中的尿素限值，对尿素指标进行监测更符合我国国情。

此外，标准中还具体规定了游泳池原水和补充水水质必须符合GB5749－2 006的要求，水质的检测方法应按GB/T 5750标准执行，其中，池水中尿素可采用GB/T 18204.29标准进行检验，游泳池使用部门应配备有游泳池水质检测工具，现场检测应符合TY/T 1003的要求。

中华人民共和国国家标准
游泳池水微生物检验方法细菌总数测定
GB/T18204．9一2000
1、范围
本标准规定了游泳他水细菌总数的检验方法。

本标准适用于游泳池水细菌总数的测定。

2、引用标准
下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。

本标准出版时，所示版本均为有效。

所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性．
GB/T18204.1一2000公共场所空气微生物检验方法细菌总数测定GB/T18204.2一2000公共场所茶具微生物检验方法细菌总数测定
3、定义
本标准采用下列定义。

细菌总数aerobic Lacterial count：指水样在一定的条件下培养后（如培养基成分和pH、培养的温度和时间以及需氧性质等）l ml 检样中所含菌落的总数。

本方法规定的培养条件下所得结果，只包括一群在营养琼脂上生长发育的嗜中温性需氧菌落总数。

4、仪器
4.1三角瓶。

4.2量筒。

4.3 pH计或精密pH试纸．
4.4高压消毒锅．
4.5试管。

4.6灭菌平皿：直径9 cm .
4.7灭菌刻度吸管：10mL、2mL、1mL .
4.8酒精灯。

4.9恒沮培养箱。

4.10放大镜。

5、培养基和试剂
5.1营养琼脂培养基见GB/T18204.1一2000中第4章。

5.2 10 %（m/m）硫代硫酸钠溶液，121℃高压灭菌20min .
6、操作步骤
6.1采样瓶的要求和预处理：用于微生物分析的采样瓶要无酸、无碱、无毒的玻璃容器。

采样瓶在灭苗前加人足量的10%（m/m）硫代硫酸钠溶液。

一般情况下125mL的采样瓶加0.1ml，加完后121℃高压灭菌20min。

6.2用灭菌吸管吸取均匀水样1mL，注人到灭菌平皿内，另取1mL注人另一灭菌平皿内作平行接种．取lmL加到9mL无菌生理盐水中作1 : 10稀释，混匀后取ZmL分别加到两个无菌平皿内，每皿1mL。

6.3将溶化并冷却至45℃的营养琼脂培养基倾注平皿内，每皿约15mL，另取一个不加样品的平皿作空白对照。

立即旋摇平皿，使水样和培养基充分混匀。

待琼脂凝固后翻转平皿．置36℃士1℃恒温箱内培养48h。

7、菌落计数方法先用肉眼观察，点数菌落数，然后再用放大5——10倍的放大镜检查，以防遗漏．记下各平皿的菌落数后．求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数。

若平皿中有连成片状的菌落或花点样苗落蔓延生长时，该平皿不宜计数。

若片状菌落不到平皿的一半，而其余一半中茵落分布又很均匀时．则可将此半个平皿菌落计数后乘以2，所得结果代表全皿菌落数。

8、菌落数报告方式见GB/T18204.2一2000中的第9章。

生物技术及应用实训论文
题目：游泳池水质微生物指标检测与评价
学院：北京电子科技职业学院
专业：生物技术及应用
年级：10生物技术
姓名：张志新
指导老师：曹奇光谢国莉
完成日期：2011年12月9日。