心衰宁合剂质量控制研究

心衰宁合剂质量控制研究
罗君;苏松柏;华玉玲;吴红梅;张建玲;贺祝英
【摘要】目的：建立心衰宁合剂的质量标准。

方法采用薄层色谱法( TLC)对处方中的红参、黄芪、丹参进行定性鉴别；用高效液相色谱法( HPLC)测定心衰宁合剂中人参皂苷Rb1的含量。

结果薄层图谱斑点清晰,阴性对照无干扰；人参皂苷Rb1在1.095~5.475μg呈良好的线性关系,平均回收率为97.3%,RSD为1.98%。

结论建立的方法简便,准确,重复性好,精密度高,可用于心衰宁合剂的质量控
制。

%Objective To establish a method for quality control of xinshuaining mixture. Methods The herbal contents including red ginseng,milk veteh,root of red rooted salvia were identified by thin layer chromatography ( TLC) and the content of ginsenoside Rb1 in xinshuaining mixture was determined by high performance liquid chromatography ( HPLC ) . Results The herbs can be overtly identified by TLC. Ginsenoside Rb1 had a linear relationship in the range of 1. 095-5. 475μg, and the average recovery was 97. 3%(RSD 1. 98%). Conclusion The method is simple and rapid,and can be used for the quality control of xinshuaining mixture.
【期刊名称】《医药导报》
【年(卷),期】2015(000)004
【总页数】4页(P505-508)
【关键词】心衰宁合剂;人参皂苷Rb1;色谱法,薄层;色谱法,高效液相
【作者】罗君;苏松柏;华玉玲;吴红梅;张建玲;贺祝英
【作者单位】贵阳中医学院第一附属医院，贵阳 550001;贵阳中医学院第一附属
医院，贵阳 550001;贵阳中医学院第一附属医院，贵阳 550001;贵阳中医学院，
贵阳 550001;贵阳中医学院第一附属医院，贵阳 550001;贵阳中医学院第一附属
医院，贵阳 550001
【正文语种】中文
【中图分类】R286;R927.2
心衰宁合剂来源于临床的有效方剂，是贵阳中医学院第一附属医院心内科用于治疗各种慢性心力衰竭以及辅助治疗急性心衰的经验方，由红参、黄芪、丹参、益母草和炙甘草等8味中药组成。

在保证疗效的前提下，为便于患者服用和携带，对方
中药材提取及其制备工艺进行了研究[1]。

为有效地控制制剂的内在质量，确保其
临床应用安全、有效，笔者对心衰宁合剂的质量标准进行了研究。

对红参，黄芪和丹参进行了薄层色谱(thin layer chromatography，TLC)鉴别，并建立了高效液
相色谱 (highperformanceliquid chromatography，HPLC)测定君药红参中主成分人参皂苷Rb1的含量测定方法。

1 仪器与试药
1.1 仪器日本岛津2010高效液相色谱仪;TG332A
1.2 试药心衰宁合剂(由贵阳中医学院第一附属医院制剂室提供，批号:090410，090423，090424)，人参皂苷Rb1对照品(批号:110704-200420，含量:95.9%)、人参皂苷 Rg1对照品(批号:110703-200425，含量:93.4%)、人参皂苷 Re对照品(批号:110754-200421，含量:9
2.7%);红参对照药材(批号:121045-201105)、黄
芪对照药材(批号:121462-200702)、丹参对照药材(批号:120923-201111)均购自中国食品药品检定研究院。

乙腈为色谱纯(美国，Dikmapure)，水为双蒸水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果
2.1 定性鉴别
2.1.1 红参的TLC鉴别取本品5 mL，加水5 mL稀释，用三氯甲烷洗涤2次，每次10 mL;弃去三氯甲烷层，取水层用水饱和的正丁醇提取2次，每次10 mL;合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次10 mL;弃去水层，取正丁醇层，蒸干，残渣
加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。

另取红参对照药材0.5 g，加水1 mL润湿，超声提取30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为对照药
材溶液。

另取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品及人参皂苷Rb1对照品，加甲醇制成每毫升各含0.2 mg的混合溶液，作为对照品溶液。

按心衰宁合剂制备工艺制备缺红参阴性药液，同法制备其阴性对照溶液。

照薄层色谱法(《中华人民
共和国药典》2010年版一部附录Ⅵ B)实验，吸取上述3种溶液各5 μL，分别点
于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)10℃静置的下层液为展开剂[2]。

展开，取出，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。

供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱
相应的位置上，显相同颜色的斑点。

见图1。

2.1.2 黄芪的TLC鉴别取黄芪对照药材1 g，加水1 mL润湿，超声提取30 min，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇 1 mL使溶解，作为对照药材溶液。

另取“2.1.1”项下供试品溶液。

按心衰宁合剂制备工艺制备缺黄芪阴性药液，同法制
备其阴性对照溶液。

照薄层色谱法(《中华人民共和国药典》2010年版一部附录
ⅥB)实验，吸取上述两种溶液各3 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂
的硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-甲醇-水(9∶1∶0.1)为展开剂，展开，取出，喷
以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。

供试品色谱中，在与对照
药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

见图2。

2.1.3 丹参的TLC鉴别取本品5 mL，加水5 mL稀释，加盐酸溶液(10→100)1 mL，振摇，用乙酸乙酯提取2次，每次10 mL，合并乙酸乙酯层，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。

另取丹参对照药材1 g，加盐酸溶液
(10→100)1 mL润湿，再加入乙酸乙酯10 mL，超声提取30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为对照药材溶液。

按心衰宁合剂制备工艺制备缺丹参阴性药液，同法制备其阴性对照溶液。

照薄层色谱法(《中华人民共和国药典》2010年版一部附录ⅥB)实验，吸取上述两种溶液各5 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-丙酮-甲酸(8∶2∶1)为展开剂，展开，取出，喷以1%三氯化铁乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。

供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

见图3。

2.2 含量测定
2.2.1 对照品溶液的制备精密称取人参皂苷Rb1对照品10.952 mg，置10 mL棕色量瓶中，加甲醇制成每毫升含1.095 mg的溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备取本品，精密量取5 mL，置分液漏斗中，加入二氯甲烷
洗涤2次，每次10 mL;合并二氯甲烷液，用水10 mL提取，合并水层，用水饱和的正丁醇提取4次，每次10 mL;合并正丁醇液，用1%氢氧化钠溶液洗涤2次，
每次15 mL，合并碱液层，用水饱和的正丁醇提取2次，每次10 mL;合并以上正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次15 mL，水层用水饱和的正丁醇依次
提取，合并正丁醇液，蒸干，用甲醇分次洗涤并定容至10 mL，摇匀，滤过，即得。

2.2.3 阴性对照溶液的制备按制剂工艺制备处方中除去红参的阴性对照样品。

按“2.2.2”项下方法制备阴性对照溶液。

精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性
对照溶液各10 μL，按含量测定项下方法测定，结果显示，在此条件下供试品溶液中的人参皂苷Rb1得到良好分离，并且缺红参的阴性对照无干扰。

见图4。

2.2.4 色谱条件和系统适用性色谱柱为Diamonsil C18(4.6 mm×250 mm，5
μm);以乙腈为流动相 A，0.1%磷酸溶液为流动相B，按表1梯度洗脱条件进行洗脱，流速为1 mL·min－1，检测波长203 nm，柱温25℃。

理论板数按人参皂苷Rb1峰计算应不低于3 000。

2.2.5 线性关系考察精密吸取人参皂苷Rb1储备液2 mL，置10 mL棕色量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制得每毫升含人参皂苷Rb1为0.219 mg的对照品溶液。

分别精密吸取上述人参皂苷Rb1对照品溶液5，10，15，20，25 μL，注入
高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，记录色谱图，以进样量(μg)为横坐标，峰面积值(A)为纵坐标，绘制标准曲线。

得回归方程:Y=145 623X+13 925.6，r=0.999 8，将回归方程拟合为过原点的方程得:Y=149 091X，取线性关系考察中中间点进样量人参皂苷Rb1峰面积值分别代入上述两个方程，计算得两者相对偏
差为0.26%，说明可用外标一点法进行含量测定。

结果表明，人参皂苷Rb1在
1.095～5.475 μg 范围内线性关系良好。

表1 流动相洗脱梯度表Tab.1 Elution gradient of mobile phase时间/min 流动相A 流动相B%0～30 20→40 80→60～40 40→75 60→25～50 75→20 25→80 2.2.6 精密度实验分别精密吸取人参皂苷Rb1对照品溶液10 μL(浓度为 0.219 mg·mL－1)，连续进样 6次，人参皂苷Rb1峰面积的RSD为0.49%，表明精密
度良好。

2.2.7 稳定性实验取同一供试品(批号:090410)，按“2.2.2”项下制备供试液。

分
别于 0，4，8，12，24 h 进样，测定得人参皂苷Rb1含量的RSD为0.74%，表明供试液至少在24 h内稳定。

2.2.8 重复性实验精密称定本品(批号:090410)6份，各 5 mL，按“2.2.2”项下制备供试液。

精密吸取供试品溶液各10 μL，测定得人参皂苷 Rb1含量的RSD为0.94%，表明方法重复性良好。

2.2.9 加样回收率实验取已知含量的同一批样品(批号:090410)6份，精密量取2.5 mL，分别加入人参皂苷Rb1对照品溶液(0.219 mg·mL－1)7 mL，按“2.2.2”项下制备供试液，精密吸取供试品溶液10 μL，按上述色谱条件测定，记录色谱图，计算含量，结果人参皂苷Rb1平均回收率为 97.3%，RSD 为1.98%。

2.2.10 样品测定分别取 3 批次的样品，按“2.2.2”项下制备供试液，按上述色谱条件测定，外标法计算人参皂苷 Rb1含量，结果批号为 090410，090423，090424的样品，人参皂苷 Rb1含量分别为0.58，0.60，0.58 mg·mL－1。

3 讨论
红参为心衰宁合剂方中君药，《中华人民共和国药典》2010年版一部“红参”项下，选择以人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1为指标成分，优选得在色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相，进行梯度洗脱，检测波长为203 nm，柱温25℃下进行分析时:人参皂苷Rb1峰分离良好;人参皂苷Rg1峰和人参皂苷Re峰虽能达到良好的分离效果，但人参皂苷Rg1前
有干扰峰难以排除，人参皂苷Re峰较小，不利于定量分析方法的建立。

故以人参皂苷Rb1作为制剂的指标成分。

实验中对样品提取方法进行了优选，结果，最终确定的提取方法较文献[3]提取方
法更完全，且杂质峰较少。

实验中分别对正丁醇提取次数2，3和4次进行了考察，结果提取次数2，3和4次的含量分别为0.178，0.432和0.459 mg·mL－1，提
取 4 次比提取 3 次含量要高，故以水饱和的正丁醇提取4次。

样品中人参皂苷Rb1含量限度的确定，每毫升制剂中人参皂苷Rb1含量限度为0.3 mg·mL－1。

结合3批样品测定结果，考虑到生产工艺波动及贮藏条件变化等因素的影响，将本品每毫升含红参以人参皂苷Rb1计，暂定为不得少于0.40 mg。

综上所述，经过方法学考察及3批样品测定，人参皂苷Rb1色谱峰分离度高，峰形良好，阴性无干扰，重复性、精密度良好，回收率符合要求，整个实验过程可操作性强，能够客观地控制本品的质量。

参考文献
[1]张建玲，贺祝英，吴红梅.正交试验优选心衰宁合剂水提工艺[J].中国实验方剂学杂志，2011，17(7):30－33.
[2]李玉赜，刘永先.养心丸中红参、当归、丹参、五味子的薄层色谱鉴别[J].辽宁中医学院学报，2004，6(3):226.
[3]沈志滨，朱俊访，李博.HPLC法测定益气复脉口服液中人参皂苷 Rg1、Re、Rb1的含量[J].广东药学院学报，2006，22(3):259－260.。