扁豆RAPD体系优化的探讨
扁穗牛鞭草种质资源的RAPD分析
关键词： 扁穗 牛鞭草 ； Ａ Ｄ； Ｒ Ｐ 遗传 多样性
中 圈分 类 号 ：８ ６ ５ １ ￥ １ ． 文 献 标 识 码 ： Ａ
Ｇｅ ｅ ｉ ｖ ｒ ｉ ｆＨｅ ｒｈ ｉ ｏ ｒ ｓ ａ Ｇｅ ｍｐ ａ ｍ ｔ ｃｅ ｙ ＲＡＰＤ ｎ ｔｃＤｉ ｅ ｓｔ ｏ ｍａ ｔ ｒａ ｃ ｍｐ ｅ ｓ ｒ ｌｓ Ｄｅ ｅ ｔ ｄ ｂ ｙ
ｗｈｃ ｍｐｉｃ ｔ ｎｂ ｎ ｓｗｅ ｃｅ ｒ ９ Ａ ｒｇ ｎｓｗｅｅｆｕ ｄｗｉ ｖ ｒｇ ｆ１ Ｉｂ ｄ ｅ ｒｍｅ ￣Ｔ ｅｐ ｒｅ ｔｇ ｆｐ ｌｍｏ－ ｉｈａ ｌ ａｉ ａ ｄ Ｉ ｌａ ．１ ８ ＤＮ ｆ ｍｅ ｔ ｉ ｆ ｏ ａ ｒ ｎ ｔ ａ ａ ｅａｅｏ ４． ａ ｓｐ ｒ ｉ ｒ ｈ ｅｃ ｎａ ｅｏ ｏｙ ｒ ｏ ｈｎ ｎ ｐ
ｒ ｈａ ｏ ｇｔｅｃ ｎ ｓ ．（ｉＴ ｅ ｅ ｒｒ ｍ ｒｃ ｔ ｉｓ ｉ ｉ －ｏｒｎ ａｄｔｉ ｓｔｏ ｅｅｄｓｎｕｓｅ ｒｕｈＵ Ｇ ｉ ｍ ｎ ｌ ｅ ｔ ｔ ｃ ｈ ｏｓ ｅ ｅ ｄ ｉ ｈ ｍａｔ ｉ ｃ ｐｅ ａｍａ ｒ ｌｗｔ ｈｓ ｈｒ ｔ ｃ ｅ－ ｗｗ ｒ ｉ ｇｉ ｄ ｔ ｏｇ Ｐ ＭＡ ） Ｈ ｈａ ｏ ． ￣ ｅａ ｈ ｈ ｅ ｎ ｈｋ ｌ ｉ ｔ ｈ ｈ
Ｃ ｉａ ｉｃｕｉｇＳｃｕｎ Ｃ ｏｇｉｇ Ｙ ｎａ ｄＧ ｉ ｏ ．（）１ ｒ ｒ ｗ ｒ ｓｌｃ ｄｆｒ Ａ Ｄ ａａ ｓ ｏ ０ ｎ ｏ ｒ ｅ ， ｆ ｈｎ ，ｎ ｌｄｎ ｉｈ ａ 。 ｈｎｑｎ 。 ｕ ｎｎａ ｕｚ ｕ ｉ ４ｐｉ ｓ ｅ ｅ ｔ Ｐ ｎｌ ｉｆ ｍ １０ｒ ｄ ｍｐ ｍ ｒ ｏ ｎ ｈ ｍｅ ｅ ｅ ｅ ｏ Ｒ ｙ ｓｒ ａ ｉ ｓ
ｐ ｓ ａｄ （ Ｐ ）ｗ ｆ １９％ ，ｈ ｏ ｍ ｒｈｓ ｆｒ ａｉ ｏｔｎ（ Ｉ ａｇ ｏ ．０ ｏ０３ ３ｗｔ ａ ｖｒｇ ｆ ．５ ， ｈ ｉ ｈ ｍ ｂｎｓ Ｐ Ｂ ａ ． ｔ ９ ｔｅｐｌ ｏｐ ｉ ｉ ｏｍ ｔｎｃｎｅｔ ＰＣ）ｒｎｅ ｆ ｍ ０２ ８ｔ ． １ ｉ ａｅａｅｏ０ ２ ８ ｔｅ ｙ ｍｎ ｏ ｄ ｒ ｈｎ
RAPD和RFLP在大豆研究中的有关进展
中图分类号
￥ １ ２４
文献标识码
Ｂ
文章编号
１０ ０ ７—７３ （０ ６ ０ ５ ０ ７ １２ ０ ）６— ２－ ２
大豆是人 类最 重要 的植物 蛋 白质 来 源 ， 国有 着 丰 富 我 的大 豆种质 资源 ， 而我 国育种 家们 对这些 丰 富的种 质 资源 认 识 只停 留在 形态 、 理生化 、 生 细胞遗 传等 表型 方 面 ， 而对 其基 因型 了解 甚少 。随 着分子 生物学 的迅 速发 展 ， 短 时 在
农 艺上 较为 重要性 状 的基 因进行 定位 。Ｒ Ｌ Ｆ Ｐ不 受环 境影 响 ， 同一个 体 内不 同组 织 的 Ｄ Ａ Ｒ Ｌ Ｎ Ｆ Ｐ是 一 致 的 ， 这 就保证 了结 果 的可靠性 。 Ｗｅ ｅ ａ ｉ ｍ ｎ等 （９２ 和 Ｂｌｚｒ （９２ 利 用 Ｔｑ ｓ １９ ） ａａａ 等 １９ ） ｔ ａ、
对 一些
总和还 要多 ， 为遗传 基础 十分狭 窄 的大豆提 供 了非 常好 这
的研 究方法 。
１ ＲＰ Ａ Ｄ和 Ｒ Ｌ Ｆ Ｐ有关 介绍
１１ Ｒ Ｐ ． Ａ Ｄ原理 概要 及特 点 所 谓 Ｒ Ｐ （ ａ ｄｍ ｍｐｉｅ ｏｙ ｏｐ ｉ Ｄ Ａ Ｄ Ｒ ｎ ｏ Ａ ｌ ｄＰ ｌｍ ｒｈｃ ＮＡ， ｉ ｆ 随机扩增
重复性较 差 。 １２ Ｒ Ｌ ． Ｆ Ｐ原 理概 要及特 点 所谓 Ｒ Ｌ Ｒ ｓｉｔ ｎ Ｆａｍ ｎ ｅ ｇ ｏ ｍｏｐ ｉ Ｆ Ｐ（ ｅｔｃｉ ｒｇ ｅ ｔ ｎ ｔ Ｐ ｌ ｒｈｓ ｒ ｏ Ｌ ｈ ｙ ｍｓ
Ｂｕ ｍ ｒ （９ ４ 的研 究 显示 有 一部 分 染 色 体 区 段 ｒｍ ｅ 等 １９ ） 与 大豆 蛋 白质 含 量 和 含 油 量 相 关 及 Ｄｅｓ （ ９２ 在 ｉ 等 １９ ） ｒ Ｋ ｅ （９０ 利 用 Ｇ ． ａ 和 Ｇ ａ的种 间杂 交后 代 群 ｅｎ等 １９ ） ．ｍ ｘ ． 体 研究 Ｒ Ｌ Ｆ Ｐ与数量 性状 基 因位 点 （ Ｔ ） Ｑ Ｌ 的基 础 上 ， 一 进 步研 究 发现种 子 蛋 白质含 量和 油 分 含 量 均 与 Ｒ Ｌ Ｆ Ｐ显 著
玉米种质资源RAPD分子标记优化体系的建立
玉米种质资源RAPD分子标记优化体系的建立摘要：玉米是我国重要的作物之一，在我国农业生产中占有重要的地位。
吉林省玉米生产条件优越，推广面积广，品种的多样性丰富，为实现品种的管理高效科学，本实验以用玉米为材料进行rapd 的研究。
建立并优化了高效、稳定的玉米rapd实验体系，为后续玉米品种的管理提供了理论基础和实验支持。
关键词：玉米；rapd；体系中图分类号：s513 文献标识码：a 文章编号：1674-0432（2012）-10-0050-1rapd（random amplified polymorphic dna，rapd）也称之为ap-pcr （arbitrary primer pcr），即随机扩增多态性dna技术，是由williams和welsh等发明的分子标记技术，是一项基于pcr技术的分子生物技术[1，2]。
是以基因组dna为模板，常以一个10mer随机的寡核苷酸序列作引物，通过pcr扩增，产生许多不连续的dna 产物，以检测dna序列的多态性。
它可以在物种遗传背景没有任何分子生物学研究的情况下，对其进行基因组指纹图谱进行研究，还可用于检测体细胞杂种和微生物分型[3]。
玉米是最为古老的栽培作物之一，目前为我国栽培作物的第二位。
吉林省是我国的玉米大省，玉米种植面积在全国位于前五，每年审定的新品种数目为全国第一。
由于目前玉米为品种检定手段还不完善，导致品种管理有一定的难度。
故本文进行了玉米rapd分子标记体系的相关研究。
1 材料与方法1.1 供试材料购买市售玉米主推品种种子。
1.2 试验试剂和仪器taqdna聚合酶、10×pcr buffer（含mg2+）、10碱基随机引物、dntps；琼脂糖、dna分子量标准（d2000maker）等购自上海生工。
1.3 rapd方法1.3.1 dna的提取以玉米种子产生的嫩芽为材料，使用植物基因组试剂盒提取。
dna回溶于灭菌水中，-20℃保存备用，1%琼脂糖凝胶电泳检测质量。
RAPD分子标记技术在大豆育种中的应用
RAPD分子标记技术在大豆育种中的应用作者：林文磊吕美琴李明松康蓉蓉曾红英姚文蔡锦玲叶玉珍来源：《福建农业科技》2018年第09期摘要：为了更好地引导分子标记技术应用到大豆辅助育种当中，综述了RAPD分子标记技术在大豆遗传多样性分析、抗病基因研究、农艺性状研究中的应用，旨在为把该技术应用于辅助培育高产、高蛋白质含量的大豆新品种提供理论依据及指导。
关键词： RAPD分子标记;大豆育种;高蛋白DOI：; 10.13651/ki.fjnykj.2018.09.015Application of RAPD Molecular Markers on Soybean BreedingLIN Wen-lei1， LV Mei-qin1， LI Ming-song1， KANG Rong-rong1，ZENG Hong-ying1，YAO Wen1， CAI Jin-ling1， YE Yu-zhen2（1. Quanzhou Institute of Agricultural Sciences， Quanzhou， Fujian 362212;2. Chengjiao Town Agricultural Technique Extension Station of Mingxi County， Sanming， Fujian 365200）Abstract：; In order to apply the technique of RAPD molecular markers in assisted breeding of soybean， the paper reviewed the application of RAPD molecular markers technique in genetic diversity analysis， diseases-resistant genes investigation and agronomic characters of soybean so as to provide theoretical basis and guidance for application of RAPD molecular markers in assisted breeding of high yield， high protein content soybean varieties.Key words：; RAPD molecular markers; soybean breeding; high protein content大豆Glycine max（L.） Merrill起源于我國，是重要的粮食和经济作物，也是重要的饲料和轻工业原材料。
谷蠹RAPD反应体系与程序的优化
１ 材料 与方 法
１ １ 实验材料 ．
成都粮 食储藏 科 学研究 所 养虫室饲 养 的谷 蠹品
系 ，提取 ＤＮ 前做 ２ Ａ ４ｈ饥饿 处理 。
１ ２ 试 剂药 品 ．
影响，对反应条件要求严格 ，并 且 Ｒ Ｐ 的稳定 ＡＤ 性 与重复性 较差 ，不 太令 人满 意 ，反应 中的诸 多 因
环次数等因素进行优化 ，旨在建立一套适用于谷蠹 稳定 的 Ｒ Ｄ 反应 技 术 体 系 。为 今后 运 用 Ｒ Ｄ ＡＰ ＡＰ 分子标记技术对谷蠹的磷化氢抗性及遗传多样性进 行研 究 ，提 高实验 的准 确性 奠定 理论与 实践基 础 。
的研究。利用 Ｒ Ｐ Ａ Ｄ技术检测抗性遗传变异 ，即 使在人们对有关抗性基 因缺乏深入 了解 的情况下 ， 也 可依 赖于抗性 基 因连锁 的 ＤＮＡ 多态性 标 记 ，对 种群的抗性遗传变异进行鉴定。Ｒ Ｐ Ａ Ｄ技术在致倦 库蚊 的有机磷抗 性 和小 菜蛾 杀虫 双与杀螟丹 的抗 性嘲 的研 究 中得 到 成 功 应 用 。但 ＲＡＰ Ｄ分 子 标 记 般 表现为 显性 遗 传 ，其 Ｐ Ｒ 易受 到 实验 条 件 的 Ｃ
程 序 为 ：９ ℃ ３ｍｉ； ９ ℃ １ ｎ ３ ℃ １ ｒｉ， ５ ｎ ４ ｍｉ， ７ ｎ ａ
７ ℃２ｒｉ，４ ２ ｎ ０个 循 环 ；最 后 ７ ℃延 伸 １ ｉ。 ａ ２ ０ｒ ｎ ａ Ｐ Ｒ产 物经 １ 琼脂 糖凝 胶 电泳后在凝 胶 成像 系统 Ｃ
０ ４ｍｍｏ／ ． ｌＬ，随机 引物 ９ ０ ｐ ｌＬ ６ ｍｏ／ ，Ｔ 酶 ０ ５Ｕ，模 板 Ｄ ａ ． ＮＡ ０ ｇ ２ ｎ ；退 火 温度 为 ３ ℃， ７
循环次数为 ４ 次。在对谷蠹进行 Ｒ Ｐ ５ Ａ Ｄ分析时，采用优化的反应条件 ，规 范实验操作 ，使
白僵菌RAPD-PCR反应体系优化
白僵菌RAPD-PCR反应体系优化魏晓鹏;李会平;黄大庄;唐秀光【摘要】为了建立一套适宜于白僵菌(Beauveria bassiana)退化研究的RAPD-PCR反应体系及反应程序,通过采用L16( 45)正交试验及退火温度和循环次数的单因素优化对反应体系中的各因素进行优化组合.结果表明:20μL PCR反应体系及反应程序中各因素优化组合为,10×Buffer 2 μL,MgCl2(25 mmol/L)2.4 μL,4种dNTP(各2.5mmol/L)0.8 μL,随机引物(10 μmol/L)1.4 μL,TaqDNA聚合酶(5U/μL)0.4 μL,模板DNA( 10 mg/L)1 μL.反应条件为,94℃预变性2 min,94℃变性30 s,38℃退火40 s,72℃延伸1 min,循环次数40次,72℃延伸5 min.%An experiment was conducted to establish an optimal PCR (polymerase chain reaction) reaction system and procedure for the degradation of Beauveria bassiana. Single factor test and L16(45) orthogonal experiment were used to optimize the combination of factors for the reaction system. The optimum factor combination was obtained with 20 μL reaction volume containing 2 μL l0×Buffer, 2.4μL MgCl2(25 mmol/L) , 0. 8 μL four types of dNTPs (each 2. 5 mmol/L) , 1.4μL random primer (10 μmol/L) , 0.4 μL Taq polymerase (5 U/ μL) , and 1 μL template DNA (10 mg/L). Reaction conditions were as follows; predenaturing at 94 degrees C for 2 min, followed by 40 cycles of denaturing at 94 degrees C for 30 s, annealing at 38 degrees C for 40 s, extension at 72 degrees C for 1 min, and final extension at 72 degrees C for 5 min.【期刊名称】《东北林业大学学报》【年(卷),期】2012(040)001【总页数】3页(P73-75)【关键词】白僵菌;RAPD-PCR;正交组合【作者】魏晓鹏;李会平;黄大庄;唐秀光【作者单位】河北农业大学保定 071000;河北农业大学保定 071000;河北农业大学保定 071000;河北农业大学保定 071000【正文语种】中文【中图分类】Q939.53近年来，随着国家大力倡导林业生产的可持续发展，在林业病虫害防治中，生物防治越来越受到重视。
扁桃基因组DNA提取及RAPD扩增体系的建立
第1期17～21 JOURNAL OF GANSU AGRICULTURAL UNIVERSITY 双月刊扁桃基因组DNA提取及RAPD扩增体系的建立毛娟2，赵长增1，2，赵丽娟2，雷艳红2（1. 甘肃省作物遗传改良与种质创新重点实验室，甘肃兰州 730070；2. 甘肃农业大学农学院，甘肃兰州 730070）摘要：以13个扁桃品种幼叶为试材，针对扁桃叶片含有较高的多糖、多酚、色素以及单宁等次生物质的特点，采用改进SDS法，在缓冲液中使用5 mol/L的NaCl并在温浴后加入1/5体积的5 mol/L的KAc，置于－20 ℃冰冻30 min，提取到了高质量的基因组DNA，完全能够用于RAPD扩增。
同时，分析了模板DNA浓度、Taq DNA聚合酶、dNTPs浓度对RAPD反应体系的影响，建立了一套适合扁桃基因组RAPD分析的技术体系。
关键词：扁桃；基因组；改良SDS；RAPD中图分类号：Q 78 文献标识码：A 文章编号：1003－4315(2005)01－0017－05DNA extraction and the establishment of RAPD amplified for almond cultivarsMAO Juan2，ZHAO Chang-zeng1,2，ZHAO Li-juan 2，LEI Yan-hong2(1. Gansu Key Laboratory of Crop Genetic and Germplasm Enhancement, Gansu Agricultural University，Lanzhou 730070；2. College of Agronomy，Gansu Agricultural University，Gansu, Lanzhou 730070, China)Abstract：An improved SDS extraction method was used to obtain high-quality genomic DNA against to rich in polysaccharide, polyphenol, pigment, tannin and other secondary metabolites in blade of 13 cultivars of almond （Amygdalus communis）. The method included using 5 mol/L NaCl in reaction solution, adding 1/5 volum Kac, and freezing at －20℃for 30min. An ideal genomic DNA was gotten and could be used for RAPD. Meanwhile, some factors were optimized, such as concentration of DNA as template, Taq DNA polymerase and dNTPs. A suitable reaction system was also established for RAPD–PCR.Key words：almond；genome；improved SDS；RAPD扁桃（Amygdalus communis）是世界著名干果，具有很高的营养和经济价值，世界各扁桃栽培国都很重视对扁桃的研究与开发，已从品种选育、花芽分化、组织培养、集约化栽培等方面做了大量的研究工作[1,2]，但关于扁桃分子生物学方面的研究报道较少。
蚕豆RAPD反应体系的建立与优化
产业技术体系” ｎｃｔ一８Ｇ ） （ ｙｙｘ１ 一２ 作者简介 ： ￣ （９２一）男 ， １ａ ， 青海湟源人， 助理研究员 ， 硕士， 主 要从事作物遗传育种研究 ，— ａ ： ｕ ａｗ ｉ ３ ６ ．ｏ Ｅｍ ｉ ｈ ｗｎ ｅ ３＠１３ ｏｍ。 ｌｏ ３
电场下 电泳 ９ ｉ ， ０ｍ ｎ 然后在 ＷＤ ９ １ Ａ凝胶 成像 系 －４ ３
重复性 好 ， 适合 进行 蚕豆 Ｒ Ｐ Ａ Ｄ扩增 （ １ 。 图 ）
３ 讨
论
ＲＰ Ａ Ｄ分 析的稳定 性和 重复 性一 直是 国内外 研
变聚合 酶 的活性来影 响反应体 系 。镁离 子浓度 过高
会引起 非特异 性扩 增 ， 低则 会导 致 Ｔ ｑ酶 活性 降 过 ａ 低， 因而 镁 离 子 对 Ｐ Ｒ反 应 产 物 的忠 实性 影 响 较 Ｃ 大 。由表 ３可 知 ， ２ 度在 水平 Ｉ ｉ５ｍｍ ｌＬ Ｍｇ 浓 （ ． ｏ ） ／ 与水平 ２ ２ ０ｍ ｏ Ｌ 与水 平 ３ ２ ５ｍ ｏ Ｌ 与水 （ ． ｍ ｌ ） ／ （ ． ｍ ｌ ） ／ 平 ４ ３ ０ｒｔ ｌＬ 之间差异 显著 。Ｍ 浓 度为 １ ５ （ ． ｏ ／ ） ｅ ｏ ｇ ． ｍ ｌＬ时 ， 带 数 目较 多 、 带亮 度 高 ， 择 最 佳 ｍｏ ／ 条 主 选
景 低 的原则 ， 次 给 ｌ 处理 打 分 ， 依 ６个 最佳 产物 记 为
RAPD技术及在甲壳动物遗传多样性中的应用
doi:10.3969/j.issn.1004-6755.2010.07.018RAPD技术及在甲壳动物遗传多样性中的应用周宝洪,范樟荣,周海东(遂昌县水利局,浙江丽水323000)摘 要:介绍了RA PD技术的特点、原理及在甲壳动物遗传多样性研究中的优点,并综述了近几年RA P D技术在甲壳动物遗传多样性研究中的进展。
关键词:甲壳动物;RA P D技术;遗传多样性根据现代遗传学的观点,物种的遗传性状是由基因决定的,外部形态的变异及体内蛋白质分子的变化其本质是基因中DNA碱基序列发生了改变,因此,从DNA着手,物种的遗传和变异及与此相关的一系列问题均能得到有效解决。
近年来,在DNA聚合酶链反应技术(Polym erase Chain Reaction,PCR)基础上发展起来的随机扩增多态性DNA技术(Random Amplified Po ly mor phic DNA,RAPD)具有操作简便,实验周期短,对DNA纯度要求不高,检测过程中不需要同位素,也不需要进行克隆和测序,并能克服同工酶电泳位点偏少等特点,已成功地应用于动物、植物遗传多样性的检测、基因定位、品系鉴定、遗传图谱的构建和系统学研究等诸多领域[1],本文就RA PD的特点及其在甲壳动物遗传多样性中的研究应用作一介绍。
1 RAPD技术的基本原理RA PD技术建立在PCR技术基础上,利用一系列随机排列的碱基序列作引物,对基因组DNA 进行PCR扩增,扩增产物通过聚丙烯酰胺或琼脂糖凝胶电泳分离,经溴化乙锭(EB)染色或通过放射自显影检测扩增产物DN A片段的多态性。
虽然RAPD所用的引物DNA序列各不相同,但对于特定引物,与基因组DNA有特定的结合位点,如果这些结合位点在基因区域分布符合PCR扩增反应条件,就可扩增出DNA片段,因此,若基因组在这些区域发生DNA片段插入、缺少或碱基突变就可能导致这些特定结合位点分布发生相应变化,而使PCR产物增加、缺少或分子量改变,通过PCR产物的检测即可测出基因组DNA在这些区域的多态性。
rapd反应条件的优化及在微生物分型中的应用(一)
rapd反应条件的优化及在微生物分型中的应用(一)RAPD反应条件的优化及在微生物分型中的应用什么是RAPD反应随机扩增多态性DNA(RAPD)是利用PCR技术，利用随机引物对基因组DNA片段进行扩增，生成DNA指纹图谱的一种分子生物学技术。
RAPD反应条件的优化RAPD反应的成功与否将严重依赖于PCR反应体系中引物浓度、PCR反应温度、PCR反应缓冲物类别和浓度、Mg2+离子的浓度等因素。
因此，需要优化反应条件，以获得良好的RAPD反应结果。
优化反应条件的一些常见方法如下：•引物浓度的优化：焦点研究引物浓度的影响，结论是引物浓度是影响RAPD反应的主要因素之一，引物浓度过低则扩增反应弱，引物浓度过高则扩增产物分辨率降低，建议引物的最佳浓度为0.3-1.5 μmol/L。
•PCR反应温度的优化：PCR反应温度不仅影响扩增产物的数量，还对扩增产物的大小和长度有影响。
在一般的PCR体系中，PCR反应温度可分为三步，即变性，退火和延伸。
优化温度条件，可以使反应处于最优状态，建议变性温度为95℃，退火温度为40-65℃，延伸温度为70-72℃。
•缓冲物和Mg2+离子的优化：缓冲物和Mg2+离子的种类和浓度是影响PCR反应的关键，较为理想的缓冲物为Tris-HCl，而Mg2+的最佳浓度为1.5 mM。
RAPD反应在微生物分型中的应用RAPD反应可应用于微生物的分类和鉴别。
微生物的RAPD指纹图谱的特异性和可重复性很高，通过分析不同微生物RAPD反应产物的大小等特征，可以快速鉴别和分析不同的微生物种类。
此外，RAPD还可以应用于研究微生物遗传多样性、流行病学和亲缘关系，以及对微生物的免疫原性和药敏性等方面的研究。
结论通过优化反应条件，RAPD反应可用于微生物的快速分类和鉴别，有助于深入研究微生物的遗传多样性和药敏性等方面的问题。
RAPD反应的优点和局限性RAPD方法具有以下优点：•简单快速，不需要复杂的基因工程操作；•非常敏感，不需要大量的模板DNA；•可应用于几乎所有的生物物种，包括病原体；•对实验条件的要求较低，适用性广泛。
利用RAPD标记分析咖啡种质资源的遗传多样性
利用RAPD标记分析咖啡种质资源的遗传多样性黄丽芳;董云萍;王晓阳;陈鹏;林兴军;范睿;闫林【摘要】通过引物筛选获得18条RAPD多态性引物,利用该引物对72份咖啡种质资源进行RAPD扩增,共扩增出149条条带,其中多态性条带126条,多态性位点为84.6％.运用UPGMA方法构建了聚类图,在相似系数0.632的水平下可将72份资源聚为3个大类,其中A类群包含了所有的中粒种资源(Coffea canephora Pierre)及一份由云南德宏所选育的中小粒种杂交种(阿拉伯斯塔),共34份咖啡种质资源;B类群包括了6份查理种(Coffea excelsa Chevalier)和大粒种(Coffea liberica Bull ex Hiern);C类群由小粒种(Coffea arabica.Linne)咖啡组成.结果说明咖啡种质的遗传关系种间容易划分,在种的分类水平上存在遗传关系多样性,部分资源的分类学地位与地理来源无相关性.【期刊名称】《热带作物学报》【年(卷),期】2014(035)012【总页数】7页(P2313-2319)【关键词】咖啡;RAPD;遗传多样性【作者】黄丽芳;董云萍;王晓阳;陈鹏;林兴军;范睿;闫林【作者单位】中国热带农业科学院香料饮料研究所海南省热带香辛饮料作物遗传改良与品质调控重点实验室农业部香辛饮料作物遗传资源利用重点实验室海南万宁 571533;中国热带农业科学院香料饮料研究所海南省热带香辛饮料作物遗传改良与品质调控重点实验室农业部香辛饮料作物遗传资源利用重点实验室海南万宁571533;中国热带农业科学院香料饮料研究所海南省热带香辛饮料作物遗传改良与品质调控重点实验室农业部香辛饮料作物遗传资源利用重点实验室海南万宁571533;中国热带农业科学院香料饮料研究所海南省热带香辛饮料作物遗传改良与品质调控重点实验室农业部香辛饮料作物遗传资源利用重点实验室海南万宁571533;中国热带农业科学院香料饮料研究所海南省热带香辛饮料作物遗传改良与品质调控重点实验室农业部香辛饮料作物遗传资源利用重点实验室海南万宁571533;中国热带农业科学院香料饮料研究所海南省热带香辛饮料作物遗传改良与品质调控重点实验室农业部香辛饮料作物遗传资源利用重点实验室海南万宁571533;中国热带农业科学院香料饮料研究所海南省热带香辛饮料作物遗传改良与品质调控重点实验室农业部香辛饮料作物遗传资源利用重点实验室海南万宁571533【正文语种】中文【中图分类】S571.2doi10.3969/j.issn.1000-2561.2014.12.001咖啡与可可、茶同列世界三大饮料作物，其主要栽培品种为小粒种（C.arabica L.）和中粒种（C. canephora Pierre）。
《2024年扁蓿豆MrDREB1转录因子调控下游基因的鉴定及其作用机制的初步研究》范文
《扁蓿豆MrDREB1转录因子调控下游基因的鉴定及其作用机制的初步研究》篇一一、引言扁蓿豆作为一种重要的农作物，其抗逆性及生长发育过程受到多种因素的调控。
其中，转录因子在基因表达调控中发挥着关键作用。
MrDREB1作为扁蓿豆中的一种转录因子，对下游基因的调控作用尤为重要。
本研究旨在鉴定MrDREB1转录因子调控的下游基因，并初步探讨其作用机制，以期为扁蓿豆的遗传改良和抗逆性研究提供理论依据。
二、材料与方法1. 材料本研究所需材料包括扁蓿豆植株、MrDREB1基因序列、相关酶和试剂等。
2. 方法（1）基因克隆与表达分析：通过PCR技术扩增MrDREB1基因，构建表达载体，并利用原核和真核表达系统进行表达分析。
（2）芯片技术筛选下游基因：利用基因芯片技术，筛选MrDREB1转录因子调控的下游基因。
（3）生物信息学分析：对筛选出的下游基因进行生物信息学分析，包括基因结构、表达模式和功能注释等。
（4）转基因植物构建与表型分析：构建MrDREB1过表达和沉默的转基因扁蓿豆植株，观察其表型变化，分析MrDREB1对下游基因的调控作用。
三、结果与分析1. MrDREB1基因的克隆与表达分析成功克隆了扁蓿豆中的MrDREB1基因，并在原核和真核表达系统中进行了表达分析。
结果表明，MrDREB1基因在扁蓿豆中具有较高的表达水平，且具有转录调控活性。
2. 芯片技术筛选下游基因利用基因芯片技术，筛选出MrDREB1转录因子调控的下游基因。
通过生物信息学分析，这些下游基因涉及多种生物学过程，包括光合作用、抗逆性、代谢途径等。
3. 转基因植物构建与表型分析构建了MrDREB1过表达和沉默的转基因扁蓿豆植株。
表型分析表明，过表达MrDREB1的转基因植株具有较高的抗逆性，而沉默MrDREB1的转基因植株则表现出相反的表型。
这表明MrDREB1对下游基因的调控作用对扁蓿豆的抗逆性具有重要影响。
4. 初步探讨作用机制通过对下游基因的功能注释和表达模式分析，初步探讨了MrDREB1转录因子的作用机制。
《2024年MrDREB1调控扁蓿豆响应冷胁迫机制的初步研究》范文
《MrDREB1调控扁蓿豆响应冷胁迫机制的初步研究》篇一摘要：本研究初步探讨了MrDREB1基因在扁蓿豆响应冷胁迫过程中的调控机制。
通过分子生物学和遗传学手段，分析了MrDREB1基因的表达模式及其对扁蓿豆抗寒性的影响，为进一步了解植物抗寒机制及遗传改良提供了理论依据。
一、引言植物在生长过程中常常面临各种环境胁迫，其中冷胁迫是一种重要的生态因子。
植物通过一系列复杂的生理和分子机制来响应冷胁迫，其中转录因子的作用尤为关键。
MrDREB1作为一种重要的转录因子，在植物抗寒过程中发挥了重要作用。
扁蓿豆作为一种抗逆性较强的作物，其抗寒机制值得深入研究。
因此，探究MrDREB1基因在扁蓿豆响应冷胁迫中的调控机制，对于了解植物抗寒机理及遗传改良具有重要意义。
二、材料与方法1. 材料本研究以扁蓿豆为研究对象，采集了不同生长阶段和不同冷处理条件下的扁蓿豆样本。
2. 方法（1）基因克隆与序列分析：通过PCR技术克隆MrDREB1基因，并进行序列分析。
（2）表达模式分析：利用实时荧光定量PCR技术，分析MrDREB1基因在不同处理条件下的表达模式。
（3）遗传转化与功能验证：构建MrDREB1的过表达和沉默载体，通过遗传转化方法转入扁蓿豆，分析转基因扁蓿豆的抗寒性。
三、结果与分析1. 基因克隆与序列分析成功克隆了MrDREB1基因，并进行了序列分析。
结果表明，MrDREB1基因具有典型的DREB结构域，属于DREB家族成员。
2. 表达模式分析实时荧光定量PCR结果显示，MrDREB1基因在冷胁迫条件下表达量显著上升，表明其可能参与了扁蓿豆的抗寒反应。
3. 遗传转化与功能验证（1）过表达载体转化：通过遗传转化方法，将MrDREB1的过表达载体转入扁蓿豆，获得了过表达MrDREB1的转基因扁蓿豆。
与野生型相比，转基因扁蓿豆的抗寒性显著提高。
（2）沉默载体转化：构建了MrDREB1的沉默载体，并转入扁蓿豆。
与野生型相比，沉默MrDREB1的转基因扁蓿豆的抗寒性降低，进一步验证了MrDREB1在扁蓿豆抗寒过程中的重要作用。
福建栽培大豆品种间遗传关系的RAPD聚类分析
福建栽培大豆品种间遗传关系的RAPD聚类分析利用RAPD分子标记技术对福建18份栽培大豆品种遗传多样性研究和聚类分析。
结果表明，12个引物共扩增出91条带，其中多态条带65条，多态性程度为71.43%。
聚类分析将供试材料分为3类，菜用大豆聚成一类，本地杂交育成品种和地方品种聚成一类，有半野生亲缘关系的栽培品种聚成一类，结果发现福建栽培大豆品种根据其重要特征，表现出一定的聚集趋势。
RAPD分析结果表明，福建大豆生产上种植的通过杂交育成的优质高产大豆新品种、传统保留下来的地方品种以及从台湾或日本引进的出口加工型菜用大豆品种，它们的遗传关系并不是很远，但差别是明显的，特别能将出口加工型菜用大豆品种与粒用大豆品种区别开来。
在同一亚组内，各品种生物学特性如茎色、叶色、种皮色、脐色、生育习性等相同或相近，它们的遗传距离也很近。
福建栽培大豆品种中菜用大豆与粒用大豆品种间具有很大的地区隔离性和丰富的种群分布，RAPD技术从DNA分子水平上显示了这些栽培大豆品种间的同源性和多态性。
近年来我国内地菜用大豆育种取得较大进展，但在品质、鲜食口感上难以突破，相当程度上限制了出口创汇能力。
菜用大豆与粒用大豆截然分开，如闽豆1221和闽豆2号明显归类于菜用大豆，此与田间观察和室内品质测定结果相吻合。
闽豆1221的亲本毛豆292和早生枝豆，闽豆2号的亲本白鸟枝豆与华严，均为专用型菜用大豆品种，特征为单叶基部均着生2片小叶，品质佳、口感好，后代优良品种闽豆1221、闽豆2号也具有这些特征，而其他粒用大豆品种亲子代均无此特征。
这进一步表明应用RAPD技术进行研究亲子代遗传关系是真实的，用此技术可以辅助菜用大豆育种工作，加快育种进程，从分子水平上明确亲本的遗传特征在经过重组交换和多代选择后在不同子代中的分布，了解优良品种选育的内在因素，继而为优良亲本的选择与利用以及子代的选择提供直接而有价值的参考依据。
育种上应加快引进日本或台湾省优质菜用大豆资源，并作为内地菜用大豆生化品质改良的亲本材料加以利用和创新，选育适于加工出口的专用型优质、高效菜用大豆新品种。
RAPD的建立及优化研究
RAPD的建立及优化研究
蒲淑萍;王希;段昌柱
【期刊名称】《重庆医科大学学报》
【年(卷),期】2001(26)4
【摘要】目的：建立优化的ＲＡＰＤ反应条件，为进一步迸行遗传监控研究奠定基础。
方法：按常规方法制备小鼠基因组ＤＮＡ，在一定的ＲＡＰＤ－ＰＣＲ反应条件下分别改变各组份浓度及退火温度。
扩增产物在含溴化乙锭的１．５％琼脂糖凝胶中电泳，紫外透射仪上观察照相。
结果：当Ｍｇ２＋浓度为１．５ｍｍｏｌ／Ｌ，４种ｄＮＴＰｓ各为１５０ｕｍｏｌ／Ｌａｑ酶为１５Ｕ，引物为０．２ｍｏｌ／Ｌ，模板ＤＮＡ为５０ｎｇ，退火温度为３８℃，ＲＡＰＤ－ＰＣＲ扩增效果好。
结论：在优化的条件下规范操作，ＲＡＰＤ的稳定性、重复性好。
【总页数】4页(P436-438)
【关键词】RAPD;基因组DNA;优化反应条件
【作者】蒲淑萍;王希;段昌柱
【作者单位】重庆医科大学基础医学院生物学教研室;重庆职工医学院生物学教研室
【正文语种】中文
【中图分类】R394
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朱鹮RAPD反应体系优化研究
朱鹮RAPD反应体系优化研究
朱鹮RAPD反应体系优化研究
目的研究朱鹮RAPD反应中Mg2+浓度、复性温度、引物浓度、Tag酶浓度和DNA模板量等几种因素对扩增结果的影响,并探讨反应的最优条件.方法以朱鹮DNA为材料进行RAPD试验,对Mg2+浓度、复性温度、引物浓度、Tag酶浓度和DNA模板量进行梯度设置,每次仅改变一个参数,并保持其他条件不变.结果建立了一套适用于朱鹮的RAPD 反应体系.结论优化后的朱鹮RAPD反应条件为:反应总体积25μL,其中含Mg2+(25 mM)2.5 μL,10×Buffer2.5 μL,dNTPs(10mM)0.5 μL,引物(8 μmol/L)1.0 μL,Tag酶(3 U/μL)0.4 μL,DNA模板(10 ng/μL)3.0 μL;PCR循环中复性温度为37℃.
作者：石张燕蒙世杰丁长青SHI Zhang-yan MENG Shi-jie DING Chang-qing 作者单位：石张燕,蒙世杰,SHI Zhang-yan,MENG Shi-jie(西北大学,生命科学学院,陕西,西安,710069) 丁长青,DING Chang-qing(中国科学院,动物研究所,北京,100080)
刊名：西北大学学报（自然科学版）ISTIC PKU 英文刊名：JOURNAL OF NORTHWEST UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE EDITION) 年，卷(期)：2006 36(6) 分类号：Q755 关键词：RAPD 朱鹮反应体系。
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Ｔｑ 的用量和活性关 系到扩增 能否正常进行 ， ａ酶 是 Ｐ Ｒ反应 中最 为重要 的因子 。Ｍｇ Ｃ ¨浓 度对 Ｐ Ｒ Ｃ 反应的特异性和扩增效率均有影 响， 它是 Ｔｑ 的激 ａ酶 活剂 ， 同时又与 ｄ Ｔ Ｎ Ｐ作用 ， 是很重要 的反应物。用引
扁 豆 （Ｌ ｂａ ｕｐ ｒｕ Ｌ ） ｗ ｅ） 于 豆科 野 ａ ｌｂｐ ｒｕｅｓ（ ． Ｓ ｅｔ 属
豌豆族扁豆属 ， 自古代传人 中国， 分布广 ， 培历史悠 栽 久。扁豆为草本植物 ， 主要收获嫩荚作蔬菜 ， 营养丰
程序为 ： ９ ４℃３ ｉ， 个循环 ； ℃ ｌ ｉ， ℃ ｌ ｉ， ｎ１ ｍ ９ ４ ｎ３ ｍ ６ ｎ ｍ ７ ＝１ ｎ ４ ２ｏ ，５个 循 环 ；２ｏ ｉ， 循 环 ； ＝ 【 ｍｉ ７ ＝３ｒｎ １个 【 ａ ４ｏ保 【 存 。程序的影响因素列于表 １ 。在研究各项影响因素 时， 只改变基本反应 程序 中的某 项 因素 ， 它因素不 其 变。Ｐ Ｒ扩增产物用 ｌ 的琼脂糖凝胶 电泳分离 ， Ｂ Ｃ ％ Ｅ 染色 ， 然后在天能公司的 ＧＳ１０ Ｉ一 ０凝胶成像 系统上观 ０ 察并采集图像。 实验中所用到的 ＴｑＤ Ａ聚合酶和 ｄ Ｔ 均购 自 ａ Ｎ ＮＰ ＳＳ Ｂ 生物公司。 ０ 条 Ｒ Ｐ ２０ Ａ Ｄ引物参照 Ｓ Ｓ Ｂ 生物公司提 供的序列由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。
多聚酶链式反应（ Ｃ ） Ｐ Ｒ 为基础 ， 随机排列 的寡聚脱 用 氧核苷 酸单链 扩增 基 因组 中不 同 位 点 的 Ｄ Ａ， 而 揭 Ｎ 进
示等 位 位 点 问 的 多 态 性 的 一 种 技 术 （ ｌａ ｓ等 ， Ｗｉｉ ｌｍ
１９ ； ｌ ９ ０Ｗｅ ｈ等，９０ ， ｓ １９ ） 具有检测快速 、 操作简单 、 费用 较低等优点。此技术已在遗传作图 、 因定位、 基 种质遗 传多样性和系谱关系分析等方面得到广泛应用 ， 涉及 的作物有大豆、 小麦 、 莴苣、 蓝、 甘 黄瓜 、 辣椒 等－ ， ３ 但未见 Ｒ Ｐ Ａ Ｄ技术在扁豆上应用的报道。本文以扁豆 为材料 ， Ｒ Ｐ 对 Ａ Ｄ分子标记中各影响因子 的条件进行 探索 ， 希望建立适合扁豆的反应体系， 为扁豆分子标记 辅助育种奠定基础。
物 Ｓ Ｓ ４对 模 板 ０ －０８进 行 Ｒ Ｐ 扩 增 ， 果 表 Ｂ Ａ０ ３２ １ ＡＤ 结
明（ 见图 １ ， Ｔｑ酶浓度处理 均有清晰条带产生 。 ）各 ａ 当 Ｔｑ ａ 酶浓度 Ｉ ． ， ＞ ０ ３ Ｕ时 均可以扩增 出较小 的条带 ，
大 分子 条 带 出现 的 频 率 下 降 。 而 当 Ｔｑ酶 ≤３ ０Ｕ ａ ． 时， 情况 正好 相反 。 在 同一 Ｔｑ酶 ２２— ． ｍｏ Ｌ时 ， 其 ． ２５ｍ ｌ ／
摘 要 ： 两 个扁 豆 地 方 品 种 为 材 料 ， 行 Ｒ Ｐ 以 进 Ａ Ｄ反 应 体 系、 序 程
０ －０９ ３２ １为模 板 。
１ ２ Ｄ Ａ的提取 ． Ｎ
的优化和 引物 的 筛选 ， 结果表 明 ， ２ 的 反应体 系中， ａ 在 ０ Ｔｑ
酶浓度、 ｇ Ｍ ２ 度 、 物 浓 度 、Ｎ Ｐ 浓 度 分 别 为 ３ ０ Ｕ，． 、 浓 引 ｄＴ ． ２ ５
０ ２ 、 ． ５ ｍ ｏ Ｌ 模 板 Ｄ Ａ 浓 度 为 ６ ｇ 反 应 循 环 数 为 ４ ．５ ０ １ ｍ ｌ ， ／ Ｎ ０ｎ ， ５
采用改进 过 的 Ｃ Ａ Ｔ Ｂ法 提取 Ｄ Ａ。 Ｎ １３ Ｒ Ｐ ． Ａ Ｄ反 应条 件
个 循 环 。 在 这 种条 件 下 能获 得 理 想 的 扩 增 结 果 ， 用该 体 系进 利
１ 材料 与方法
１１ 材料 ．
２ 结果与分析
２ １ Ｍｇ 浓度 和 Ｔ ｑ Ｎ ． ２ ａＤ Ａ聚合酶优化
选取以短花序为显性性状 的黑 龙江省 地方 品种 ０ － １ 和长花序为隐性性状 的河南省汝 阳地方品种 ３ ０８ ２ ０－ １ ３２ ９为试 验 材 料 ， ２０ ０ 于 ０ ５年 ４月 播种 在 上 海 交通 大学农学院实验田中。扁豆长出真叶后 ， 分别取幼嫩 叶片， 用于基因组 Ｄ Ａ的提取。其中反应体系的优化 Ｎ 均 以 ０ － １ 为 模 板 ， 物 的筛 选 以 ０ － １ ３２ ８ ０ 引 ３ ０ ８和 ２
表 １ 扁豆 Ｒ Ｐ Ａ Ｄ体 系各因子及用量变化
富 ， 道 鲜 美， 具 有 一 定 的 药 用 价 值 （ 卓 杰 ， 味 并 郑 １９ ） ９７ 。经济价值高、 开发前景好。
Ｒ Ｐ Ｒ ｎ ｏ ｍｐ ｆ ｄ Ｐ ｌ ｒｈｅＤ Ａ） 以 Ａ Ｄ（ ａ ｄ ｍ Ａ ｌｉ ｏ ｍｏｐ ｌ Ｎ 是 ｉｅ ｙ
ＲＰ Ａ Ｄ反应 体 系优化 实验 中 ， 增反 应在 ２ ｌ 扩 ０ 的 体系 中进行 。Ｐ Ｒ反应 体系 中各组 分及 用量 见表 １ Ｃ 。 Ｐ Ｒ反 应在 Ｐ －０ Ｃ Ｃ Ｃ８８ Ｒ仪 上进行 ， 应所用 基本 Ｐ 反
行 引物 筛选得到 ４ ６条 多态性 引物。
关键词
扁豆
ＲＰ Ａ Ｄ体 系
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第２ ５卷
第 ８期 ２ ０ ０ ６年 ８月
种
子
（ ｅｄ Ｓｅ）
Ｖ １ ５ Ｎ ． Ａ ｇ ２ ０ ｏ． ｏ ８ ｕ ． ０６ ２
扁豆 Ｒ Ｐ Ａ Ｄ体 系优化 的探讨
袁 娟 武 天龙
（ 上海交通大学农业与生物技术学院豆类资源研究室 上海 ２ １０ ） ０ １ １