北青龙衣抗肿瘤化学成分研究

北青龙衣抗肿瘤化学成分研究
周媛媛;郭爽;王莹;刘雨新;付蕾;孙延平
【摘要】Objective: To study the anti - tumor chemical constituents of Bei Qinglongyi (Pericarpium Juglandis). Methods: The chemical constituents of Bei Qinglongyi were extracted by using reflux extraction method with 95％ethanol, isolated by macroporous adsorption resin, silica gel, and Sephadex LH - 20. The structures were elucidated on the basic of 1H - NMR, 13C - NMR and MS. Results: Seven compounds were isolated and identified as ursolic acid ethylice ster (1), 20 (R) - 24p - hydroxyl -20, 25 - epoxydammar - 3 - one(2), 1, 7- dihydroxy - 3, 6 - dimethoxy -anthraquino - ne(3), (E) - o - hydroxycinnamic acid(4), 4 - hydroxymethyl -2 - methoxyphenol(5), methyl gallate(6), and 5 - hydroxy -4 - methoxy - a - tetralone(7). Conclusion:Compounds 1 ～4 were isolated from this genus for the first time.%目的:研究北青龙衣抗肿瘤的化学成分.方法:使用95％乙醇回流提取,大孔吸附树脂、硅胶、 Sephadex LH-20等分离;1H-NMR,13C - NMR,MS鉴定结构.结果:分离得到7个化合物,分别鉴定为熊果酸乙酯(1),20(R) -24β-羟基-20,25 -环氧-达玛烷-3-酮(2),1,7-二羟基-3,6-二甲氧基蒽醌(3),反式邻羟基肉桂酸(4),4-羟甲基-2 -甲氧基苯酚(5),没食子酸甲酯(6),4 -甲氧基-5 -羟基-1 -四氢萘酮(7).结论:化合物1 ～4为首次从该属中分离得到.
【期刊名称】《中医药学报》
【年(卷),期】2018(046)001
【总页数】3页(P8-10)
【关键词】北青龙衣;成分研究;抗肿瘤;结构鉴定
【作者】周媛媛;郭爽;王莹;刘雨新;付蕾;孙延平
【作者单位】黑龙江中医药大学药学院, 教育部北药基础与应用研究重点实验室, 黑龙江省中药及天然药物药效物质基础研究重点实验室, 黑龙江哈尔滨 150040;黑龙江中医药大学药学院, 教育部北药基础与应用研究重点实验室, 黑龙江省中药及天然药物药效物质基础研究重点实验室, 黑龙江哈尔滨 150040;黑龙江中医药大学药学院, 教育部北药基础与应用研究重点实验室, 黑龙江省中药及天然药物药效物质基础研究重点实验室, 黑龙江哈尔滨 150040;黑龙江中医药大学药学院, 教育部北药基础与应用研究重点实验室, 黑龙江省中药及天然药物药效物质基础研究重点实验室, 黑龙江哈尔滨 150040;黑龙江中医药大学药学院, 教育部北药基础与应用研究重点实验室, 黑龙江省中药及天然药物药效物质基础研究重点实验室, 黑龙江哈尔滨 150040;黑龙江中医药大学药学院, 教育部北药基础与应用研究重点实验室, 黑龙江省中药及天然药物药效物质基础研究重点实验室, 黑龙江哈尔滨 150040【正文语种】中文
【中图分类】R284.1
北青龙衣是野生山核桃的未成熟果实青皮，主要产地有黑龙江东部，吉林、辽宁东部山区，内蒙古等地[1]。

其味辛、苦，性平、涩，具有清热、祛风、止痛等功效
[2]。

尤其在抗肿瘤方面(如肺癌、胃癌及肝癌等)有显著作用，在民间得到广泛应用
[3]，为寻找抗肿瘤新药提供了新的契机。

本实验在前期实验的基础上，利用95%乙醇回流提取结合多种色谱柱分离，成功分离了7个化合物，分别是熊果酸乙酯(1)，20(R)-24β-羟基-20，25-环氧-达玛烷-3-酮(2)，1，7-二羟基-3，6-二甲氧
基蒽醌(3)，反式邻羟基肉桂酸(4)，4-羟甲基-2-甲氧基苯酚(5)，没食子酸甲酯(6)，4-甲氧基-5-羟基-1-四氢萘酮(7)。

1 仪器与材料
Q-Tof(ESI)高分辨质谱仪(美国WATERS)； Bruker-400型超导核磁共振光谱仪(美国BRUKER)； AB-8型大孔吸附树脂(南开大学化工厂)；Waters2414高效液
相色谱仪(美国WATERS)；Atlantis Prep T3制备柱(19mm×250mm，10μm)；反相ODS(日本YMC);Sephadex LH-20(Pharmacia 公司)柱色谱;硅胶 (200～300目，青岛海洋化工厂)；其它试剂均为分析纯。

北青龙衣产地为黑龙江省牡丹江地区，经黑龙江中医药大学药用植物学教研室苏连杰教授鉴定为胡桃楸Jugland mandshurica Maxim的未成熟外果皮。

标本(20150815)保存于黑龙江中医药大学药学院。

2 提取分离
青龙衣新鲜药材，烘干后取5 kg粉粹，95%乙醇冷浸2 d后，加热回流3次，合并滤液减压得到浸膏415 g。

用适量水混悬后，利用大孔树脂色谱分段富集，先后用水、30%乙醇、50%乙醇及95%乙醇洗脱，其中95%乙醇洗脱部位42 g，反
复硅胶柱层析(氯仿-甲醇100∶0→0∶100系统梯度洗脱)结合Sephadex LH-20
纯化后得到化合物1(8.1 mg)，化合物2(4.0 mg)，化合物3(5.7 mg)，化合物
7(4.4 mg)；50%乙醇洗脱部位55 g，反复硅胶柱层析(氯仿-甲醇
100∶0→0∶100系统梯度洗脱)结合ODS柱色谱、制备型HPLC分离得到化合物4(6.3 mg)，化合物5(3.5 mg)，化合物6(3.9 mg)。

结构见图1。

3 结构鉴定
化合物 1：白色针状结晶(MeOH)，ESI-MS m/z：483 [ M-H ]-，推测分子量为484。

1H-NMR(CDCl3，400MHz) δ：5.22(1H，s， H-12)，4.52(1H，t，
J=7.6Hz，H-3)，2.05(3H，s，-OAc)，1.26(3H，s，H-23)，1.24(3H，s，H-
24)，1.09(3H，s，H-26)，0.93(3H，s，H-27)，0.84(6H，d，J=7.2Hz，H-29，30)，0.73 (2H，m，H-11)，1.75(1H，t，J=10.6Hz，H-5)，1.72(3H，s，H-26)，1.63(3H，s，H-25)。

13C-NMR(CDCl3，125MHz) δ：183.2 (C-28)，170.6(C-OAc)，137.8(C-13)，125.5(C-12)，79.2(C-3)，52.6(C-5)，52.5(C-18)，47.6(C-17)，47.2(C-9)，41.8(C-14)，39.4(C-8)，38.8(C-4)，38.7(C-19)，38.4(C-1,20)，37.4(C-10)，36.6(C-22)，33.3(C-7)，30.1(C-21)，28.1(C-2)，27.9(C-23)，27.8(C-15)，24.3(C-16)，23.2(C-11，27)，21.3(C-30)，20.6(C- OAc)，18.5(C-6)，17.2(C-29)，16.8(C-26)，15.5(C-25)，14.3(C-24)。

分析以
上波谱数据并与文献[4]对照，鉴定化合物1为熊果酸乙酯。

化合物 2：白色针状结晶(EtOAc)，ESI-MS m/z：457 [ M-H ]-，推测分子量为458。

1H-NMR(CDCl3，400MHz) δ：1.32(3H，s，H-26)，1.18(3H，s，H-27)，1.15 (3H，s，H-21)，1.09(3H，s，H-28)，1.05(3H，s，H-29)，
0.99(3H，s，H-18)，0.95(3H，s，H-28)，0.88(3H，s，H-30)，1.02～
2.55(24H，m)。

13C-NMR(CDCl3，125MH z) δ：217.9(C-3)，78.6(C-24)，75.6(C-20)，7
3.0(C-25)，55.1(C-5)，50.6(C-14)，49.6(C-17)，49.9(C-9)，47.5(C-4)，42.3(C-13)，40.4(C-8)，39.6(C-1)，37.0(C-22)，36.5(C-10)，
34.3(C-7)，34.1(C-2)，31.2(C-15)，27.5(C-12)，26.5(C-28)，26.4(C-27)，25.5(C-16)，25.4(C-21)， 23.5(C-26)，22.7(C-23)，22.2(C-29)，22.1(C-11)，19.4(C-6)，16.4(C-30)，16.1(C-18)，15.4(C-19)。

分析以上波谱数据并与文献[5]对照，鉴定化合物2为20(R)-24β-羟基-20，25-环氧-达玛烷-3-酮。

化合物 3：橙色针晶(MeOH)。

ESI-MS m / z：299 [ M-H]-，推测分子量为300。

1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ：7.56 (1H，s，H-5)，7.52 (1H，s，H-8)，7.15(1H，d，J=2.2Hz，H-4)，6.82(1H，d，J=2.2Hz，H-2)，3.95(3H，s，6-OMe)，3.92(3H，s，3-OMe)。

13C-NMR(CD3OD，125MHz) δ：186.7(C-9)，
180.9(C-10)，166.2(C-3)，165.0(C-1)，153.5(C-6)，153.2(C-7)，135.5(C-4b)，127.0(C-4a)，126.8(C-8a)，112.5(C-8)，110.5(C-8b)，110.0(C-5)，107.9(C-4)，106.5(C-2)，56.7(6-OMe)，56.4(3-OMe)。

分析以上波谱数据与并文献[6]
对照，鉴定化合物3为1，7-二羟基-3，6-二甲氧基蒽醌。

化合物 4：白色结晶(MeOH)。

ESI-MS给出163 [M-1]-，分子量应为164。

1H-NMR(CD3OD，400MHz) δ：8.03(1H，d，J=16.8 Hz，H-7)，7.52(1H，d，
J=8.0 Hz，H-6)，7.23(1H，t，J=8.0Hz，H-4)，6.90(1H，d，J=8.0 Hz，H-5)，6.89(1H，dd，J=8.0 Hz，H-3)，6.60(1H，dd，J=16.8Hz，H-8)。

13C-
NMR(CD3OD，125MHz) δ：172.0(-COOH)，158.6(C-2)，142.7(C-7)，132.8(C-4)，129.8(C-6)，123.5(C-1)，121.2(C-5)，119.6(C-8)，117.8(C-3)。

分析以上波谱数据并与文献[7]对照，鉴定化合物4为反式邻羟基肉桂酸。

图1 化合物1～7结构
化合物5：淡黄色结晶(MeOH)。

EI-MS m / z：154 [ M ]+，推测分子量为154。

1H-NMR(CD3OD，400MHz) δ：7.56(1H，d，J=2.2 Hz，H-3)，7.50(1H，dd，J=8.8，2.2 Hz，H-5)，6.77(1H，d，J=8.8 Hz，H-6)，3.86(3H，s，-OCH3)，3.30(2H，s，-CH2OH)。

13C-NMR(CD3OD，125MHz) δ：150.4(C-2)，148.4(C-1)，130.1(C-4)，124.0(C-5)，115.9(C-6)，114.7(C-3)，63.0(4-
CH2OH)，56.7(2-OCH3)。

分析以上波谱数据并与文献[8]对照，鉴定化合物5为4-羟甲基-2-甲氧基苯酚。

化合物6：浅黄色粉末(甲醇)，EI-MS(m/z)：184[M]+，表明相对分子量为184。

1H-NMR(CD3OD，400MHz) δ：7.05(2H，s，H-2，6)，3.88(3H，s，COOCH3)；13C-NMR(CD3OD，125MHz) δ：170.3(COOCH3)，145.8( C-3，5)，140.12(C-4)，122.4(C-1)，109.9(C-6)，109.8(C-2)，54.5(COOCH3)。

分
析以上波谱数据并与文献[9]对照，鉴定该化合物6为没食子酸甲酯。

化合物 7：白色无定形粉末(CHCl3)，EI-MS(m/z)：192[M]+，表明其分子量为192。

1H-NMR(400 MHz，CDCl3) δ：8.56(1H，s，5-OH)，7.55 (1H，brd，
J=8.2Hz，H-7)，7.36(1H，t，J=8.0Hz，H-8)，7.09(1H，brd，J=8.2Hz，H-6)，5.01(1H，m，H-4)，3.59(3H，s，4-OCH3)，2.84(1H，m，H-2a)，
2.65(1H，m，H-2b)，2.29 (1H，m，H-3a)，2.14(1H，m，3b)；13C-
NMR(125MHz，CDCl3) δ：196.1(C-1)，156.1(C-5)，132.6(C-9)；129.5(C-7)，126.6(C-10)，122.2(C-6)，119.3(C-8)，80.3(C-4)，55.5 (C-11)，35.8(C-2)，27.6(C-3)。

分析以上波谱数据并与文献[10]对照，鉴定故化合物7为4-甲氧基-
5-羟基-1-四氢萘酮。

4 讨论
化合物1～4是首次从北青龙衣中分离获得，分别属于蒽醌类和三萜类。

目前已有文献报道[11-15]，上述类型化合物均具有良好的肿瘤细胞抑制作用，为进一步研
究青龙衣中抗肿瘤作用机理提供了药效物质基础。

值得注意的是，这些成分是否对青龙衣中主要成分胡桃醌具有增效减毒的协同抑制作用还需要进一步开展相关研究。

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