轮状病毒荧光定量PCR标准品的构建

轮状病毒荧光定量PCR标准品的构建
王大勇;方振东;谢朝新;刘玉通
【期刊名称】《后勤工程学院学报》
【年(卷),期】2013(000)004
【摘要】采用MA104细胞系培养和T载体克隆技术，在轮状病毒结构蛋白VP4
基因序列中设计合成引物，经过PCR扩增后将特异性产物与pMD-19-T载体连接，对获得的轮状病毒重组质粒标准品进行酶切鉴定和测序分析。

利用常规PCR和荧
光定量PCR方法对获得的重组质粒标准品进行特异性和灵敏度指标的检验。

结果
表明，将构建的重组质粒作为标准品制备标准曲线具有较高的扩增效率和良好的线性关系（斜率为-4.015，R2=0.991）；荧光定量PCR熔解曲线分析表明，85.8℃的PCR产物是轮状病毒VP4基因序列的特异性产物，该标准品具有轮状病毒特异性；同时，所制备的重组质粒标准品在荧光定量PCR检测中具有较大的线性范围（5×101~5×1010拷贝/μL），每个梯度PCR反应最低可以检测到50拷贝的重
组质粒，因而采用该标准品进行荧光定量PCR分析具有较高的检测灵敏度；此外，该重组质粒标准品具有较高的稳定性和重复性，3次独立实验的变异因数
Cv<1.5%。

构建的重组质粒标准品可以用做环境水体中轮状病毒的荧光定量PCR
标准品。

【总页数】8页(P66-73)
【作者】王大勇;方振东;谢朝新;刘玉通
【作者单位】后勤工程学院军事油料应用与管理工程系，重庆401311;后勤工程
学院，重庆401311;后勤工程学院国防建筑规划与环境工程系，重庆401311;后
勤工程学院军事油料应用与管理工程系，重庆401311
【正文语种】中文
【中图分类】X832;Q523
【相关文献】
1.血管内皮生长因子(VEGF)实时荧光定量PCR质粒标准品的构建 [J], 刘丽仙;霍
金龙;李颖;赵跃;霍海龙;曾养志
2.黄曲条跳甲钾离子通道基因实时荧光定量PCR质粒标准品的构建 [J], 贺华良;宾淑英;廖泓之;陈颖;林进添
3.小鼠脑脊髓炎病毒非编码蛋白片段实时荧光定量PCR标准品的构建 [J], 袁文;张钰;王静;刘香梅;黄韧
4.人类疱疹病毒8型实时荧光定量PCR外标准品的构建 [J], 郭建;石岩;普雄明
5.小尾寒羊瘦素长型受体基因实时荧光定量PCR标准品质粒和标准曲线的构建 [J], 张桂山;徐晶;娄玉杰;张善鹏;姜怀志
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。