(三)早期胚胎的体外培养(IVC)1、培养液基本成分主要
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Intracytoplasmic Sperm Injection: ICSI
显微受精技术在动物受精和发育机理研究、畜牧业生产及人医 临床实践中有着广阔的应用前景：
➢精液的利用率可成百万倍的提高，可以使优良种公畜
得到最充分的应用；
➢精子的保存技术将大为简化，将来或许只要精子核物
质完整就可以达到受精的目的，这对世界珍稀动物资 源的保护将产生深远的影响；
•
③各种体细胞：如胎儿成纤维细胞，乳腺细
胞，皮肤细胞（耳、成体、胎儿），肌肉细胞，卵丘
细胞，内脏细胞（肝、脾、心、肺、肠、舌）；
•
④生殖系列细胞：PGCs、精母细胞、足细
胞和精巢细胞。
• 核受体： ①去核卵母细胞；
•
②去核合子；
•
③去核2-细胞期胚胎的卵裂球。
（一）动物克隆研究的历史和现状
体细胞克隆首例
三、家畜体外受精技术的发展现状和存在的问题 （一）发展现状
动物
卵裂率
囊胚率
冷冻后存活率 鲜胚移植后的 产仔率
牛
８０％－９０％
４０％－５０ ８０％
％
羊
８０％－９０％
３０％－４０ ８０％
％
猪
９０％
６０％－７０ － ％
３０％－４０ ％ ５０％
５０％
（二）存在的问题和发展方向
• 1、存在的问题
• １）囊胚发育率低，细胞数少。 • ２）产仔率低，胎儿初生重高。
transfer，NT，记忆）：核移植（nuclear transplantation or nuclear transfer, NT），也称作 细胞核移植，是指将一个核供体通过显微操作方法移 植到一个核受体中，组成核质杂合细胞，这种核质杂 合细胞也叫作重构胚。
• 核供体：①初期胚胎细胞；
•
②ES细胞；
透明带钻孔(Zona drilling, ZD)
活精子
透明带部分切口(Partial zona dissection, PZD)
卵母细胞质内注射(Intracytoplasmic sperm injection, ICSI)
这些通过对哺乳类配子进行显微操作以协助其受精的技术 称为显微受精。
精子显微注射体外受精技术
• 胚胎分割：人为的将早期胚胎分割成两个或
几个，然后移植给受体母畜可以获得一卵双 胎甚至多胎。
• 根据供体细胞核的来源分为：胚胎细胞克隆
和体细胞克隆
二、牛胎分割
二、囊胚的分割 （续）
三、 卵 裂 球 培 养 示 意 图
• 四、细胞核移植（nuclear transplantation or nuclear
• 2、发展的方向
• １）深入研究卵母细胞成熟和胚胎发育的分子机理； • ２）加强腔前卵泡的培养研究，充分利用优良母畜的遗传资
源；
• ３）加强体外受精与其他生物技术的结合。
四、辅助受精技术 (assisted fertilization)
透明带下注射(Subzonal injection,SUZI)
（三）早期胚胎的体外培养（IVC）
1、培养液：基本成分主要包括无机盐、氨基酸、维生 素、碳水化合物和蛋白质等。
2、胚胎体外培养系统：常规培养系统、输卵管离体培 养系统、与体细胞共培养系统。
3．培养方法：卵子在受精24h后，转移到预先制备好 的颗粒单层中继续培养。一般使用微滴培养法。
4、培养的温度和气相环境：和卵母细胞成熟的条件一 样。
细
胚 胎 细
胞 核
胞
移
体 细 胞 核
核
植
移
移
的
植
植
方
法
动物核移植技术程序
➢与其他技术结合，如将已经过性别鉴定的精子注入卵
子受精，可人为控制家畜后代的性别。
第三节 克隆 技术Animal cloning
一、概述 二、胚胎分割 三、单个卵裂球分离培养 四、细胞核移植
一、概述
“克隆”的定义
• 动物克隆：是指由一个动物经无性繁殖
（asexual reproduction）或孤雌生殖而产生 的多个具有与亲本相同遗传信息的同质性后 代，包括孤雌激活生殖、卵裂球分离与培养、 胚胎分割以及核移植等。
5．胚胎的回收及其质量评定：以牛为例，整个体外受 精程序，从卵母细胞成熟培养开始，经过体外受精 和体外培养直至受精卵发育到囊胚阶段，一共经历 8d的时间。如定受精当天为0d，则受精后第5～6d即 可回收桑椹胚，第7～8d回收囊胚。
体外受精
体外培养
1--cell
2--cell
4--8cell
桑椹胚
囊胚
显微受精技术在动物受精和发育机理研究、畜牧业生产及人医 临床实践中有着广阔的应用前景：
➢精液的利用率可成百万倍的提高，可以使优良种公畜
得到最充分的应用；
➢精子的保存技术将大为简化，将来或许只要精子核物
质完整就可以达到受精的目的，这对世界珍稀动物资 源的保护将产生深远的影响；
•
③各种体细胞：如胎儿成纤维细胞，乳腺细
胞，皮肤细胞（耳、成体、胎儿），肌肉细胞，卵丘
细胞，内脏细胞（肝、脾、心、肺、肠、舌）；
•
④生殖系列细胞：PGCs、精母细胞、足细
胞和精巢细胞。
• 核受体： ①去核卵母细胞；
•
②去核合子；
•
③去核2-细胞期胚胎的卵裂球。
（一）动物克隆研究的历史和现状
体细胞克隆首例
三、家畜体外受精技术的发展现状和存在的问题 （一）发展现状
动物
卵裂率
囊胚率
冷冻后存活率 鲜胚移植后的 产仔率
牛
８０％－９０％
４０％－５０ ８０％
％
羊
８０％－９０％
３０％－４０ ８０％
％
猪
９０％
６０％－７０ － ％
３０％－４０ ％ ５０％
５０％
（二）存在的问题和发展方向
• 1、存在的问题
• １）囊胚发育率低，细胞数少。 • ２）产仔率低，胎儿初生重高。
transfer，NT，记忆）：核移植（nuclear transplantation or nuclear transfer, NT），也称作 细胞核移植，是指将一个核供体通过显微操作方法移 植到一个核受体中，组成核质杂合细胞，这种核质杂 合细胞也叫作重构胚。
• 核供体：①初期胚胎细胞；
•
②ES细胞；
透明带钻孔(Zona drilling, ZD)
活精子
透明带部分切口(Partial zona dissection, PZD)
卵母细胞质内注射(Intracytoplasmic sperm injection, ICSI)
这些通过对哺乳类配子进行显微操作以协助其受精的技术 称为显微受精。
精子显微注射体外受精技术
• 胚胎分割：人为的将早期胚胎分割成两个或
几个，然后移植给受体母畜可以获得一卵双 胎甚至多胎。
• 根据供体细胞核的来源分为：胚胎细胞克隆
和体细胞克隆
二、牛胎分割
二、囊胚的分割 （续）
三、 卵 裂 球 培 养 示 意 图
• 四、细胞核移植（nuclear transplantation or nuclear
• 2、发展的方向
• １）深入研究卵母细胞成熟和胚胎发育的分子机理； • ２）加强腔前卵泡的培养研究，充分利用优良母畜的遗传资
源；
• ３）加强体外受精与其他生物技术的结合。
四、辅助受精技术 (assisted fertilization)
透明带下注射(Subzonal injection,SUZI)
（三）早期胚胎的体外培养（IVC）
1、培养液：基本成分主要包括无机盐、氨基酸、维生 素、碳水化合物和蛋白质等。
2、胚胎体外培养系统：常规培养系统、输卵管离体培 养系统、与体细胞共培养系统。
3．培养方法：卵子在受精24h后，转移到预先制备好 的颗粒单层中继续培养。一般使用微滴培养法。
4、培养的温度和气相环境：和卵母细胞成熟的条件一 样。
细
胚 胎 细
胞 核
胞
移
体 细 胞 核
核
植
移
移
的
植
植
方
法
动物核移植技术程序
➢与其他技术结合，如将已经过性别鉴定的精子注入卵
子受精，可人为控制家畜后代的性别。
第三节 克隆 技术Animal cloning
一、概述 二、胚胎分割 三、单个卵裂球分离培养 四、细胞核移植
一、概述
“克隆”的定义
• 动物克隆：是指由一个动物经无性繁殖
（asexual reproduction）或孤雌生殖而产生 的多个具有与亲本相同遗传信息的同质性后 代，包括孤雌激活生殖、卵裂球分离与培养、 胚胎分割以及核移植等。
5．胚胎的回收及其质量评定：以牛为例，整个体外受 精程序，从卵母细胞成熟培养开始，经过体外受精 和体外培养直至受精卵发育到囊胚阶段，一共经历 8d的时间。如定受精当天为0d，则受精后第5～6d即 可回收桑椹胚，第7～8d回收囊胚。
体外受精
体外培养
1--cell
2--cell
4--8cell
桑椹胚
囊胚