薄膜过滤法微生物限度检查操作要点

薄膜过滤法微生物限度查抄操纵要点之五兆芳芳
创作
1. 设备、仪器
1.1 无菌室微生物限度查抄应有单独的无菌室，每个无菌室应有独立的净化空气系统.
1.1.1 操纵间操纵间应装置空气除菌过滤层流装置.情况洁净度不该低于10000级，局部洁净度为100级（或放置同等级净化任务台）.操纵间或净化任务台的洁净空气应保持对情况形成正压，不低于4.9Pa.操纵台上备有电子天平，乙醇灯，火柴，乙醇棉球，大、小橡皮乳头等.
1.1.2 缓冲间缓冲间内应有洗手盆，无菌衣、帽、口罩、拖鞋等.缓冲间内不得放置培养箱和其他杂物.
1.1.3 在每次操纵前、后，用75%乙醇溶液或其他消毒液擦拭操纵台及可能污染的死角.然后启动层流净扮装置，同时用紫外杀菌灯照射30min.
1.1.4 无菌室操纵台消毒擦拭后，先启动层流净扮装置30min，将备妥的营养琼脂平板3个（经30～350C预培养48h，证明无菌落生长），以无菌方法移入操纵间，置净化台左、中、右各1个，开盖，流露30min后将盖盖上.在30～350C培养箱内倒置培养48h，取出查抄.3个平板生长的平均菌落数不超出1个.
1.2 仪器
1.2.1 恒温培养箱（30～350C）、生化培养箱（23～280C）、电冰箱、蒸汽灭菌器.
1.2.2 玻璃器皿烧杯、培养皿、量筒、试管及塞、吸管.玻璃器皿用前应洗涤洁净，吸管、量筒不挂水滴，无残留抗
菌物质.玻璃器皿均应用牛皮纸（或双层报纸）严密包裹置蒸汽灭菌器高压蒸汽121℃灭菌30min，烘干.或于160℃干热灭菌2h，备用.
2培养基及其制备办法
2.1 营养琼脂培养基：取营养琼脂培养基34g，加1000ml蒸馏水，加热溶解，分装，121℃高压灭菌15分钟.
2.2 玫瑰红钠琼脂培养基：取玫瑰红钠琼脂培养基30.5g，加1000ml蒸馏水，加热溶解，分装，121℃高压灭菌15分钟.
2.3 胆盐乳糖培养基：取胆盐乳糖培养基36g，加1000ml蒸馏水，加热溶解，分装，121℃高压灭菌15分钟.
3稀释剂
3.1 0.9%无菌氯化钠溶液：取氯化钠，加水溶解使成1000ml，121℃灭菌20分钟.
3.2PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液：取磷酸二氢钾，磷酸氢二钠7.23g，氯化钠
4.30g，蛋白胨1.0g，加水1000ml，微温溶解，分装，过滤，灭菌.
4 供试液的制备
4.1取供试品10g，加经干热灭菌的5%吐温-80 0.2ml，加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液稀释至100ml，边加边振摇使成混悬液，静止5分钟使分层，倾取上清液置离心机中500r/min离心5分钟，取上清液作为供试品溶液.
5 查抄办法
采取薄膜过滤法，滤膜孔径为0.45um，直径为50mm.滤膜及滤器在使用前采取121℃高压灭菌30钟.试验进程中，应保持滤膜前后的完整性.将制备好的供试液过滤，然后用
100mlPH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液（注意保持供试品溶液笼盖整个滤膜概略）.冲洗后，用镊子取出滤膜，菌面朝上贴于营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基平板上培养.细菌于30～35℃培养48小时，霉菌于23～28℃培养72小时.。