培养基思考题答案

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6培育基
培育基观点？常用培育的基本要求是什么？
答：观点：是供微生物、植物和动物组织生长和保持用的人工配制的养料，一般都含有
碳水化合物、含氮物质、无机盐（包含微量元素）以及维生素和水等。

有的培育基还含有抗菌素和色素，用于单种微生物培育和判定。

基本要求：一定含有供细胞生长生殖和合成细胞成分的原料；知足产物生成的需要；能够保持必定的pH条件；根源丰富、价钱便宜、质量稳固等。

2、培育基是由哪些成分构成？这些成分的根源是什么（特别是碳源和氮源）？各成分的
作用是什么？在应用天然碳源和氮源时应注意什么问题？
答：培育基各成分的根源及作用以下
成
分根源作用
1、糖类：葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、
乳糖、糊精、淀粉等
2、脂类：各样植物油和动物油，如、为细胞供给能源
1
豆油、菜油、葵花籽油、猪油、棉
2、构成菌体细胞成分的碳架（如蛋
籽油、玉米油、亚麻籽油、橄榄油
等白质、糖类、脂类、核酸等）
碳
源
3、有机酸或其盐类及低碳醇类：乳3、构成细胞代谢产物
酸、醋酸、柠檬酸、延胡索酸以及4、对发酵液pH起到必定的调理作
甘油等
用
4、其余碳源物质：碳酸气、石油、
正构白腊、天然气、甲醇、乙醇等
石油化工产品
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1、有机氮源：花生饼粉、黄豆饼1、构成菌体细胞构造物质
粉、棉子饼粉、酵母粉、麦麸、鱼2、为微生物供给能源
粉、蚕蛹粉、玉米浆、蛋白胨、尿3、合成含氮代谢产物氮
源
素、废菌体、酒糟等4、有些有机氮源是某些产物合成的
2、无机氮源：氨水、铵盐、硝酸盐前体
等5、在碳源不足时能够用氮源增补
1、作为某些酶的辅酶或激活剂
无
机盐磷、镁、硫、铁、钾、钠、钙、2、生理活性物质的构成或生理活性和
微量铅、氯、锌、钴、锰等微量元素及作用的调理剂
元
素其无机盐3、与保持细胞必定的浸透压和细胞
透性相关
前
体邻氨基苯甲酸、丙酸、苯乙酰胺、在生物合成过程中联合到产物分
物
质肌醇、氯化物、甘氨酸等子中去，能提升产物产量
1、影响微生物正常代谢
N,N-二苄基乙烯二胺、硫氰化苄、
促
使剂2、促使中间代谢产物的累积
红霉素等
3、提升次级代谢产物的产量
克制某些代谢门路的进行，同时刺乙硫胺酸、溴化物、硫脲、甘露聚
克
制剂激另一代谢门路，致使改变微生物糖、巴比妥类药物等
的代谢门路
全部化学反响和营养物质传达的介
水——质，水的质量对微生物的生长生殖
和产物合成极为重要
在应用天然碳源和氮源时应注意的问题：
①不一样菌种能够利用的碳源/氮源常常不一样，同一个菌种对不一样碳源/氮源的利用速度也是不一样的，一般单糖的利用速度要比双糖和多糖快，所以应依据菌种的种类和生长特征
选择不一样的碳源/氮源。

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②碳、氮源直接的利用速度拥有亲密关系，各样糖的代谢速度不一样，氨及铵盐的利用速
度也随之改变，所以应依据二者间的代谢速度关系投放的量。

③碳源和氮源之间的比率能够直接影响微生物的生长和发酵产物的累积，在生产不一样阶段应依据菌体的不一样代谢阶段经过控制碳氮源的比率来知足菌体的大批生殖同时又能大批形成
产物。

④天然碳源/氮源的质量要求保证全营养成分的平衡，不可以因地区性而致使天然碳源/氮源中某些营养成分（蛋白质、多肽、氨基酸、维生素、微量元素等物质）的天生缺失或
不足，从而影响微生物的发酵产率。

天然、合成和半合成培育基各有哪些应用？举例。

答：（1）天然培育基，所用原料是一些天然动植物产物，其化学成分不清楚或化学成份
不恒定，如牛肉膏蛋白胨培育基A(宽泛用于细菌培育)、麦芽汁培育基B(啤酒发酵)，其特
色是营养丰富，价钱便宜，适合于生产。

2）合成培育基，由化学成分已知的试剂配制的，各成分的量都切实知道的培育基，如培育
放线菌的高氏一号培育基、培育真菌的察氏培育基，这类培育基成分明确、实验的重
复性好，但配置较繁琐、培育的微生物生长较慢、价钱较高，合用于实验室进行微生物营养、代谢、生理生化、遗传育种、菌种判定和生物测定等定量要求较高的研究工作，不适于大规模的
工业生产。

3）半合成培育基，由部分天然的有机物作碳源、氮源和生长因子，而后加入适当的化学药
品配制而成的半合成培育基，这类培育基在生产和实验中使用许多。

如培育真菌用的
马铃薯蔗糖培育基，和LB培育基(一般用于基因克隆中的大肠杆菌培育)。

这类培育基配置
方便、微生物生长优秀，实验室和发酵生产用的大部分培育基属于半合成培育基。

简述培育基的种类和作用、孢子培育基、种子培育基和发酵培育基差别。

说明原因。

答：培
育基的种类好多，能够依据构成、状态和用途等进行分类。

（1）按培育基的构成成分，有合成培育基和天然培育基。

合成培育基多用于研究和育种；
天然培育基多用于大规模的工业生产。

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2）按培育基的状态能够分为固体、半固体和液体培育基。

固体培育基主要用于菌种的培育和保留，也宽泛用于产生子实体真菌的产生；半固体培育基主要用于菌种判定、细菌运动性察看和噬菌体效价滴定等；液体培育基在实验室中主要用于各样生理、代谢研究和获取大批菌体，在生产上绝大部分发酵培育基都采纳液体培育基。

3）按用途能够分为孢子培育基、种子培育基和发酵培育基。

孢子培育基是供菌种生殖孢子的；种子培育基是供孢子抽芽、生长和菌体生殖的；发酵培育基是供菌种生长生殖和防备菌种过早衰老的。

孢子培育基、种子培育基和发酵培育基的差别：
差别项目孢子培育基种子培育基发酵培育基
目的供菌体生殖孢子供孢子抽芽、生生长生殖快但要防备菌体
长和菌体生殖过早衰老，利于产物的大
量合成
碳源不宜过多（培育基营速效碳源（如葡丰富，速效与迟效搭配，
养不要太丰富）萄糖）多用迟效；碳氮比适合，氮源低，否子不利孢子形供给易于利用的
成氮源，利于菌体
快速生长
无机盐浓度适合，不然会影相对丰富，完丰富，加缓冲剂稳固PH值
响孢子的颜色和数全，PH稳固
量）
其余含有生长素和微量元最后一级要靠近需加入菌体生长所需的生
素发酵培育基长因子和产物合成需要的
元素、前体和促使剂
——补料
5.为何要在发酵培育基中加入代谢调理剂？举例。

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答：发酵培育基是供菌种生长、生殖和合成产物之用。

它既要使种子接种后能快速生长，达到必定的菌丝浓度，又要使长好的菌体能快速合成需产物。

所以，发酵培育基的构成除有菌体生长所必需的元素和化合物外，还要有产物所需代谢调理剂等。

代谢调理剂中包含克制剂、促使剂和前体。

前体是指某些化合物加入到发酵培育基中，能直接被微生物在生物合成中联合到产物分子中去，而其自己的构造并无多大变化，可是产物的产量却因加入前体而有较大的提升，如加苯乙酸可使苄青霉素产量增添；
克制剂加入到发酵过程中时能克制不需要的产物，而大批产生所需的特定产物（或中
间体）。

如在四环素发酵中，加入溴化物能克制金霉素(即氯四环素)的形成，从而增添四环素的产量。

促使剂多为一些酶的引诱剂，如酶所需的基质或基质的近似物，β-半乳糖苷酶的引诱剂近似物异丙基-β-D-半乳糖苷。

曲霉产生－淀粉酶时需要淀粉作引诱剂。

怎样依据微生物的代谢要求选择发酵培育基。

答：(1)一般的发酵产物以碳源为主要元素，发酵培育基中的碳源含量常常高于种子培育
基；假如产物的含氮量高，应增添氮源。

(2)依据代谢产物加入适当的代谢调理剂和微量元素
(3)依据微生物的代谢特色，调整适合的碳氮比，调理最正确 pH
(4)大规模生产时，原料应当价廉易得，还应有益于下游产物的分别提取工作
培育基的设计原则和设计思路是什么。

答：（1）设计原则：
①培育基的成分直接影响培育目标。

在设计培育基时，一定考虑是要培育菌体，仍是要
累积菌体代谢产物；是实验室培育，仍是大规模发酵等问题
②为微生物供给所一定的营养（能源物质、碳源、氮源、无机盐和微量元素、前体、促
进剂和克制剂等）。

③为微生物的生长供给必需的生长环境条件。

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(2)④培育基的构成和配比适合（对微生物的生长发育、产品的产量、提炼工艺的选择和成
(3)品的质量都会产生相当大的影响）。

(4)⑤知足生产的一些基本需要，如一定含有供细胞生长生殖和合成细胞成分的原料；知足生产
物的需要；能保持必定的pH条件；根源丰富、价钱便宜、质量稳固，产物的分别提取等。

(5)⑥防止培育基中各成分之间的互相作用，如蛋白胨、酵母膏中含有磷酸盐时，会与培育基中
钙或镁离子在加热时发生积淀作用；在高温下，复原糖也会与蛋白质或氨基酸互相作用而产生褐色物质。

(6)（2）设计思路：
(7)①第一依据古人的经验和和和一定考虑的因向来确立可能的培育基成分
(8)②联合所用菌种和产品的特征，采纳摇瓶、玻璃罐等小型发酵设施，对碳源、氮源、无
(9)机盐和前体等进行逐一单因子试验。

(10)③采纳一些合理的实验设计方法如正交实验、响应面剖析方法对培育基各成分之间配比
(11)（复配）进行优化，确立最适浓度。

(12)④扩大培育时，可依据先依据一般的放大原则进行放大，再联合正交实验、响应面剖析方法进
行优化，确立最适浓度
(13)
(14)
(15)影响培育基质量的要素是什么？
(16)答：(1)水质：配制培育基应用蒸馏水或去离子水，制备培育基时，不行用铜锅或铁锅，
(17)可用中性硬质能耐高温的玻璃、搪瓷和铝制器皿制备；容器的干净程度。

(18)各组分质量稳固：保证稳固的原料根源，改换不一样产地根源的组份时，一定进行实验试验，
保证产量和质量的稳固性。

(19)粘度：能否适合，不然影响灭菌、搅拌、微生物呼吸和产物的分别
(20)装量过程的操作技术：培育基配制好后，应依据不一样用途和形态，分装在不一样容器内；分装量不可以超出容器的2/3，以防止高压灭菌时培育基外溢，且有益于灭菌完整。

分装后用棉塞塞紧瓶口,外用油纸包裹,免得灭菌时水蒸气直接浸透棉塞,造成灭菌后冷凝水多而影响培育基的硬度。

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(5)灭菌过程：灭菌温度及压力，灭菌时间与次数皆会影响培育基的质量。

高压时间不行过长,灭菌次数不要超出2次，不然会使培育基变质，使营养物质损失。

琼脂培育基加热时间太长温度太则惹起积淀，如其pH值在以下，则灭菌时间过长可损坏其粘度。

明胶培育基如受热温度太高，可损坏其凝结性。

(6)倒板的操作技术：倒板时培育基灭菌后放冷至45~50℃，实时倾入已加有样品稀释液的平皿内，摇匀。

此时培育基温度不该太高或太低，过高过低皆会影响其质量。

培育基一定保持澄清,以便察看细菌生长状况,必需时可用适合方法滤事后再分装灭菌。

(7)保留：制备好的培育基不可以寄存过久，因能汲取空气中的二氧化碳等影响其质量，且要注意潮解变质，要密封保留。

培育基最好现用现配制。

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