Eppendorf_蛋白质核酸分析仪操作说明与注意事项

Eppendorf 蛋白质核酸分析仪操作说明与注意事项

操作说明：

准备：开始测定前只需开启仪器背后的电源开关即可开始测定。

1、打开电源预热30分钟；

2、根据样品的类型调取相应的程序，如：待检测样品微双链DNA,可按控制板上的dsDNA键，

显示屏显示进入测定双链DNA程序；

3、根据要求向一只比色皿中加入DNA标准样液或不含DNA的空白液做对照，将该比色皿放

值或0.000 A 入比色皿槽，按下Standard键或Blank键；待屏幕上显示标准样的A

260字样时，取出对照比色皿；

4、放入加有样品的比色皿，按下Sample键，显示屏将会显示测定结果；

5、记录测定结果或打印结果。

6、取出已测样品比色皿，放入含下一个待测样品的比色皿，按Sample键，读取结果；

7、通过该仪器可测定核酸或蛋白的纯度，浓度等等，只需根据样品类型及检测目的调取相

应程序即可。

一、核酸浓度测定（包括dsDNA、ssDNA、RNA、Oligo）

1. 例如待测定样品为dsDNA（eg：PCR产物），按下键“7 / dsDNA”

（若待测样品为ssDNA，eg：反转录合成的第一链cDNA产物，则相应按下键“8 / ssDN A 若待测样品为RNA，则按下键“9 / RNA”；

若待测样品为Oligo（寡聚核苷酸），eg：PCR引物，则相应按下键“6 / Oligo”。）

2. 若测定样品需要稀释后测定，则需先设定样品的稀释度：

（1）按下键“Dilution”；

（2）输入样品体积和稀释液体积，按Enter键确认。

将空白对照置入样品孔。注意：空白对照是空白液，并非所有情况都是水。（例如用Tris 溶液溶解DNA制品，则要用Tri s液做空白对照。）

3. 按下键“Blank”；

4. 仪器记录空白对照，设置为0.000A；(先不取出对照，按下Sample，看是否调零成功，若成功则可开始测样品)

5. 将第一个样品置入样品孔；

6. 按下“Sample”；

7. 仪器显示第一个样品的相关参数（记下样品浓度，OD260，OD280，OD260/OD280）

8. 直接放入第二个样品；

9. 按下“Sample”；

10. 仪器显示第二个样品的吸光度值和浓度值，以及其他相关参考比值；

11. 依次测定，每个样品的测定值将自动存储在机器中，查看测定结果的方法如下：（1）按下键“./ Function”

（2）选择“DISPLAY-RESULT”,按Enter键，查看每个样品的测定值记录（本机可存储100个样品的测定值）。

二、OD600 细菌生长密度测定

1. 按下键“5 /OD 600”；

2. 将空白对照置入样品孔；

3. 按下键“Blank”；

4. 仪器记录空白对照，设置为0.000A；

5. 将第一个样品置入样品孔；

6. 按下“Sample”；

7. 仪器显示第一个样品的吸光度值和浓度值；

8. 依次测定，每个样品的测定值将自动存储在机器中，查看测定结果。

三、蛋白质浓度的直接测定（280nm测定）

1. 按下键“4 / Protein”；

2. 将空白对照置入样品孔；

3. 按下键“Blank”；

4. 仪器记录空白对照，设置为0.000A；

5. 将第一个样品置入样品孔；

6. 按下“Sample”；

7. 仪器显示第一个样品的吸光度值和浓度值，以及其他相关参考比值；

8. 依次测定，每个样品的测定值将自动存储在机器中，可查看测定结果。

四、蛋白质浓度显色法的间接测定（Bradford，Lowry，BCA）

1. 按下键“1 / Bradbord”or “2 / Lowry”or“BCA”选择蛋白质显色反应的方法；

注：Bradford键按两次，每次显示不同的测定范围。

2. 设置标准曲线的标准样品数量、测定次数和浓度范围。按下键“Parameter”用上下键进行选择和参数调整。

3. 将空白对照置入样品孔；

4. 按下键“Blank”；

5. 仪器记录空白对照，设置为0.000A；

6. 将第一个标准品或样品（如需沿用已存储的标准曲线，可直接测样品）置入样品孔；

7. 按下“Sample”或“Standard”；

8. 依次测定标准品或样品，每个样品的测定值将自动存储在机器中，查看测定结果。

五、注意事项：

1 为了尽量减少颗粒对测试结果的影响，要求核酸吸光值至少大于0.1A，吸光值最好在0.1－1.5A。在此范围内颗粒的干扰相对较小，结果稳定。样品的浓度不能过低或者过高。

2 混合要充分，否则吸光值太低，甚至出现负值；

3 混合液中不能有气泡，空白液无悬浮物，否则读数漂移剧烈；

4 必须使用相同的比色杯测试空白液和样品，否则测定浓度结果差异太大；

5 每次换样品要润洗比色杯，测菌液的比色杯专用；

6 换算系数和样品浓度单位选择要一致；

7 样品的体积必须达到比色杯要求的最小体积（50ul）。