origine_diversite_ig
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Origine de la diversitédu répertoire B •Introduction
–Structure des gènes d’immunoglobuline
–Réarrangement des gènes d’immunoglobuline –Flexibilitéou imprécision de la jonction
•Conclusion
François Cretin
Maître de Conférences, UJF
Institut de Recherche en Technologie et Sciences
pour le Vivant
Laboratoire de Biochimie et de Biophysique des
Origine de la diversitédu répertoire B Introduction
•Structure des gènes d’immunoglobuline
•Réarrangement des gènes d’immunoglobuline
•Flexibilitéou imprécision de la jonction
Conclusion
Introduction : Questions posées
•Taille du répertoire B estimée entre 109et 1011anticorps de spécificités différentes donc de séquences différentes, or si àun gène correspond une protéine…….
•Si on se souvient de la séquence d’une chaîne légère ou d’une chaîne lourde….
γ1
γ1
γ1
γ1
γ1
γ1
CDR1
CDR2
CDR3
Ac1
Ac2
Ac3
Ac1
Ac2
Ac3
Séquence primaire du domaine variable
Séquence primaire du domaine constant Comparaison de la séquence primaire du domaine variable et constant de la chaîne légère de trois IgG1 de spécificités différentes
Séquençage de la chaîne légère
Chaque astérisque correspond àune
4
5
1
110210
VL
CL
Théorie somatique : un grand nombre de mutations
somatiques interviennent pendant le développement des lymphocytes B
vrai en partie : hypermutation somatique
Théorie germinale : toute l’information est contenue au niveau du génome
vrai en partie
Fréquence de mutation élevée Fréquence de mutation
faible
Gènes
Hypothèse (Dreyer and Bennet, 1965). Deux types de gène, un codant pour la partie variable et un pour la partie constante
6
1.
Préparation de l’ADN cellulaire provenant soit d’un plasmacytome (MOPC 321) soit de cellules germinales de souris Balb/c (souche homozygote àtous les loci).2.Digestion par une enzyme de restriction : Bam HI 3.Migration sur gel en fonction de la taille, Southern Blot
4.
Hybridation avec une sonde marquée (ARNm de la chaîne κ, à
l’époque pas de cDNA)
7ADN de cellules germinales
Sonde utilisée : ARNm κ
3 kB
6 kB
ADN du plasmocytome
5 kB
Sonde utilisée : ARNm
κ
Coupure par Bam HI
3 kB
6 kB
Le gène codant pour la chaîne κest situésur deux
fragments de restriction différents
6 kB
Le gène codant pour la chaîne κest situésur un seul
fragment de restriction