ICU医院感染与置入性导管中细菌生物膜的相关研究

生物膜定性：62 例临床标本中有 40 例在刚果 红培养基不同程度菌落呈深红色， 为产生生物膜 的菌株，阳性率为 64．52％。 另 22 株菌在刚果红培 养基培养，菌落始终为无色。 3 讨论
以往 的 报 道 多 限 于 ICU 感 染 的 细 菌 耐 药 性 的 检 测 ［7］，而 关 于 如 何 引 起 ICU 高 感 染 ［8］的 机 制 少 有 报 道 ，由 于 ICU 患 者 病 情 重 ，各 种 侵 入 型 导 管 多 ， 这些导管因与外界相通，为细菌侵入提供了机会， 当细菌定植于导管， 在导管内的气体或液体的流 动冲 刷 下 ，容 易 形 成 生 物 膜 （40 ／ 62）。 将 ICU 患 者 置 入 的 导 管 直 接 浸 泡 于 LB 肉 汤 培 养 液 中 ， 在 Innova40 温控摇床连续振荡培养，模拟引流管液体 流动状态，发现 3 d 管壁有明显黏液附着，即开始 形成生物膜，5 d 时生物膜成熟， 说明细菌在医用 导管内定植快，易于形成生物膜，特别是来源于呼 吸机的导管，本研究还发现铜绿假单胞菌、鲍曼不 动杆菌两种机会致病菌形成生物膜比率更高，这 可能与这两种菌粘附性强， 容易在导管中定植有 关，鲍曼不动杆菌是临床耐药率最高、用药最棘手 的 细 菌 ［9］，研 究 表 明 鲍 曼 不 动 杆 菌 更 易 发 生 于 ICU 危重患者，与其免疫力低下，侵袭性操作和机械通 气较多有关 。 ［10］ 并出现多重耐药株，常引起医院感 染 流 行 甚 至 暴 发 ， ［11］ 生 物 膜 形 成 可 能 是 重 要 原 因 ， 这应引起我们足够的重视。 了解机会致病细菌在 医院内的传播机制以及与环境污染的关系， 对于 临床合理使用抗菌药物， 制定有效的感染预防和 控 制 策 略 十 分 重 要 的 。 ［12］
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doi：10．3969 ／ j．issn．1006-5725.2011.04.055 基 金 项 目 ：辽 宁 省 教 育 厅 课 题 （编 号 ：2009A702） 作 者 单 位 ：110034 沈 阳 医 学 院 ，辽 宁 省 环 境 污 染 与 微 生 态 重 点 实 验 室 （周 园 ，刘 新 ，王 岚 ）；110034 沈 阳 医 学 院 2006 级 医 学 检 验专业学生（武国超） 通 信 作 者 ：刘 新 E-mail：syliuxin2000＠yahoo．com．cn
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实 用 医 学 杂 志 2011 年 第 27 卷 CU医院感染与置入性导管中细菌生物膜的 相关研究
周园 刘新 王岚 武国超
摘 要 目 的 ：研 究 重 症 监 护 病 房 （intensive care unit，ICU）置 入 性 导 管 形 成 细 菌 生 物 膜 的 状 况 ，了 解 导 管 中 的 生 物 膜 对 ICU 医 院 感 染 的 影 响 ， 为 寻 求 控 制 置 入 性 导 管 细 菌 所 致 医 院 感 染 的 有 效 措 施 提 供 依 据 。 方 法 ： 收 集 ICU 病 房 置 入 性 导 管 ， 通 过 阿 利 新 蓝 与 刚 果 红 联 合 染 色 快 速 鉴 定 细 菌 生 物 膜 形 成 ， 导 管 置 入 液 体 培养基中模拟液态持续流动的环境，观察导管内侧面形成的生物膜结构。 结果：阿利新蓝－刚果红染色细菌 生物膜呈深红色；导管材料内表面细菌附着并有纤维素样物质交联形成生物膜。 附着的细菌主要有铜绿假 单胞菌、鲍曼不动杆菌、大肠杆菌及葡萄球菌等。 结论： 阿利新蓝染色法可用于快速检测细菌生物膜的形 成 ，置 入 性 导 管 细 菌 生 物 膜 的 形 成 与 ICU 医 院 感 染 密 切 相 关 。
29 76
34 137
62 例标本共分离出细菌 137 株， 导尿管细菌 感 染 主 要 是 大 肠 埃 希 菌 （17 ／ 29， 58．62％ ），呼 吸 机 导管感 染 主 要 是 铜 绿 假 单 胞 菌 （34 ／ 76，44．74％）和 鲍 曼 不 动 杆 菌 （28 ／ 76， 36．84％），手 术 引 流 管 中 细 菌感染以鲍曼不动杆菌分离阳性率略高。 137 株细 菌 G－菌占 84．67％，G＋菌占 10．21％。
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我们的研究证实导管置入 3 d 以上即可有生
物膜形成， 各种医用导管材料在临床医治过程中
广泛应用，如不能有效防止形成生物膜，将增加医
院感染风险 。 ［13］ 因此，抵御导管等材料细菌生物膜
形成及感染， 将是今后控制医院感染深入研究方
向和工作重点。
4 参考文献
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细菌生物膜是细菌在营养不足时的生存方 式， 此时成膜菌体产生较多黏液物质容易与阿利 新蓝、刚果红染料结合镜下呈深红色，边界清晰， 背景为淡蓝色。 此染色技术简便快捷，应为临床确 定生物膜快速诊断适宜的方法。 扫描电镜可直接
观察生物膜表面的特征及结构，但其实验环节多，
技术复杂并要求特殊设备，更适用于研究。
in Acinetobacter baumannii： associated features and clinical
人体端 1 cm 引流管外壁酒精消毒后， 无菌操作下 纵向剪开引流管， 接种环直接刮取内壁涂片进行 阿 利 新 蓝 － 刚 果 红 染 色 ［5］， 油 浸 镜 （NIKON-80I） 下 观察并 CCD 拍照。 1．2 导管内壁生物膜形态结构观察 将引流管标 本 分 别 浸 泡 于 LB 肉 汤 中 ，37℃ Innova40 温 控 摇 床 振 荡 培 养 ， 振 幅 为 50Hz， 每 隔 48 h 取 出 无 菌 盐 水 冲洗，除去浮游菌，换新培养液，持续 7 d。 振荡培 养 后 的 引 流 管 经 2．5％戊 二 醛 4℃下 固 定 24 h， pH 7．2 的磷酸盐缓冲液冲洗 3 次，再以 1％的锇酸 4℃ 固 定 2 h，4℃双 蒸 水 冲 洗 3 次 ，梯 度 乙 醇 脱 水 （以 50％、70％、80％、90％、95％ 2 次 、100％ 3 次 ， 每 次 脱水时间 10 min），醋酸异戊酯置换，CO2 临界点干 燥 ， 离 子 喷 金 镀 膜 ， 通 过 KYKY-3200 SEM 扫 描 观 察引流管内壁生物膜形态结构。 1．3 形成生物膜的菌种确定 培养液接种于血平 板、麦康凯培养基上，连续传 3 代以上，获得纯种 细菌经生物一梅里埃公司 ATB 细菌鉴定仪鉴定到 种。 1．4 细菌生物膜模式株确定 选择平板分离单个 菌落接种于刚果红培养基上［6］，37℃培养 5 ～ 7 d，产 生生物膜的菌落变为棕黑色，不产生生物膜的菌落 仍为白色。 2 结果
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导尿管 呼吸机导管 手术引流管 合计
表 1 ICU 置 入 导 管 细 菌 感 染 的 主 要 病 原 菌 株
铜绿假单胞菌 0
34 7
41
革兰阴性
鲍曼不动杆菌 3
28 12 43
肺炎克雷白菌 0 6 4
10
大肠埃希菌 17 0 5 22
革兰阳性
葡萄球菌 5 7 2
14
其他细菌
4 1 2 7
株
合计
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