试验三、转氨酶活力测定2
血清中谷丙转氨酶活力测定结果
血清中谷丙转氨酶活力测定结果血清中谷丙转氨酶（ALT）活力测定是一种常见的实验室检测方法，常用于评估肝功能和诊断肝病。
本文将介绍血清中谷丙转氨酶活力测定结果的相关知识。
血清中谷丙转氨酶活力（ALT）是指血液中存在的一种酶的活性，通常用于评估肝脏功能的状况。
正常情况下，谷丙转氨酶的活力是很低的，一般小于40单位/升。
当肝细胞受损或病变时，会释放ALT，使其活力升高。
高浓度的ALT通常与肝脏病变有关，例如肝炎、肝硬化、脂肪肝、药物性肝病等。
此外，高ALT水平还可能与其他疾病有关，例如急性胰腺炎、心肌梗塞、重型结核等。
因此，如果血清中ALT活力超过正常范围，应及时进行检查和诊断。
血清中ALT测定通常是使用血清学方法进行的。
一般情况下，医师会在胳膊上绑上一条缚带，并在手腕或肘部的静脉内取一小样血液。
样本会送到实验室进行分析。
实验室会使用化学试剂和仪器来测量血清中ALT的活力。
结果会以单位/升（U/L）的形式报告。
正常情况下，成人男性的ALT浓度应在10-40 U/L之间，女性的ALT浓度应在7-35U/L之间。
但这些数值还受到年龄、体重、性别和肝脏状态等因素的影响。
因此，在解读ALT浓度时，医生还需要考虑患者的其他情况。
ALT浓度的升高程度也是确定病情的重要指标之一。
一般来说，当ALT浓度超过正常范围的两倍以上时，就可以诊断为肝炎或其他肝病。
此外，还有一种称为谷草酰转移酶（AST）的酶，也与肝脏有关，但其升高程度不如ALT明显。
需要注意的是，虽然ALT浓度升高可能表明肝脏病变，但不能单独确定肝病的类型和严重程度。
医生还需要进行其他检查和评估，例如肝脏超声、CT扫描、肝组织活检等，以帮助确定具体的病情。
总之，血清中ALT活力测定是一种常见的实验室检测方法，通常用于评估肝脏功能和诊断肝病。
需要注意的是，结果需要结合患者的其他情况进行解读，以便更准确地诊断和治疗肝病。
转氨酶检测实验报告
一、实验目的了解转氨酶在生物体内的作用，掌握转氨酶活力的测定原理和方法，并通过实验验证转氨酶活力在不同生理和病理状态下的变化。
二、实验原理转氨酶是一类催化氨基酸与α-酮酸之间氨基转移反应的酶，广泛存在于生物体内。
谷丙转氨酶（ALT）是其中一种重要的转氨酶，主要存在于肝细胞内，对肝脏的代谢和解毒功能至关重要。
当肝细胞受损时，ALT会从细胞内释放到血液中，导致血液中ALT活性升高，因此ALT检测是临床诊断肝功能的重要指标。
本实验采用连续监测法测定ALT活力，通过测定反应体系中NADH的生成量来反映ALT活力。
三、实验材料与仪器1. 仪器：722型分光光度计、恒温水浴锅、移液器、微量滴定板等。
2. 试剂：ALT测定试剂盒、NADH标准品、2,4-二硝基苯肼、2,4-二硝基苯肼溶液、磷酸盐缓冲液、丙酮酸标准品、丙酮酸溶液等。
3. 样品：血清样品。
四、实验方法1. 标准曲线的制作（1）配制丙酮酸标准溶液：将丙酮酸标准品用磷酸盐缓冲液溶解，配制成0.1 mmol/L的标准溶液。
（2）测定丙酮酸标准溶液的吸光度：取丙酮酸标准溶液0.1 mL，加入2 mL 2,4-二硝基苯肼溶液，混匀，置于37℃水浴锅中反应30 min，取出后加入1 mL碱液，混匀，在540 nm波长下测定吸光度。
（3）绘制标准曲线：以丙酮酸浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 血清ALT活力的测定（1）配制反应体系：取血清样品0.1 mL，加入1 mL磷酸盐缓冲液、0.5 mL NADH溶液、0.2 mL丙酮酸溶液，混匀。
（2）测定血清ALT活力：将反应体系置于37℃水浴锅中反应10 min，取出后加入1 mL碱液，混匀，在540 nm波长下测定吸光度。
（3）计算ALT活力：根据标准曲线，计算血清ALT活力。
五、实验结果与分析1. 标准曲线的制作通过绘制标准曲线，得出丙酮酸浓度为0.1 mmol/L时，吸光度为0.8。
2. 血清ALT活力的测定（1）正常血清ALT活力：本实验中，正常血清ALT活力为25 U/L。
第三章实验二肝匀浆中谷丙转氨酶_GPT_活力的测定
H2 O
OH
红棕色
A520nm
主要仪器、试剂、材料
剪刀，天平，组织捣碎机，水浴锅，分光光度计（520nm）， 比色皿，计算纸，移液管。
新鲜肝脏；标准丙酮酸（丙酮酸钠62.5 mg，溶于100mL 0.05M 的H2SO4中）；0.1M PBS溶液（13.97g K2HPO4和2.69g KH2PO4溶于 1L蒸馏水中，pH7.4）；谷丙转氨酶底物（0.9g L-Ala和29.2mg α-酮 戊二酸，溶于上述PBS溶液中，然后用1M NaOH调pH 7.4，继续用 PBS稀释至100mL，4℃保存）；0.02% 2,4-二硝基苯肼溶液（20mg 2,4-二硝基苯肼溶于1M HCl溶液中，并用1M HCl定容至100mL）； 0.4 M NaOH；生理盐水。
实验步骤
1. 肝匀浆处理：取新鲜肝脏10g，先用生理盐水洗净，滤纸吸干水，再 用预冷的0.1M pH7.4 PBS捣碎，并定容至100 mL。 2. 谷丙转氨酶活力的测定 1）取4支试管，标注名称，按照下表操作。
试管
试剂 (mL) 谷丙转氨酶底物
肝匀浆
2.4-二硝基苯肼 谷丙转氨酶底物
0.4M NaOH A 520nm
2）计算酶活力 本法规定：酶在37℃ 与底物作用30分钟，产生2.5μg 丙酮酸为一个 谷丙转氨酶活性单位。 3. 计算：每g 肝脏谷丙转氨酶活力单位（U/g）
D = （A—B）× 500 × 100 S ×2.5×10
说明： A：样品吸光值 B：对照吸光值 S：标准吸光值 500：标准丙酮酸浓度 2.5：谷丙转氨酶换算单位 100：100mL肝匀浆 10：10g肝
问题：如何测定谷丙转氨酶的活力？
实验24. 肝匀浆中谷丙转氨酶活力的测定
测定转氨酶活力的实验报告
测定转氨酶活力的实验报告测定转氨酶活力的实验报告引言：转氨酶是一类重要的酶，广泛存在于生物体内，参与多种生物化学反应。
通过测定转氨酶的活力，可以了解生物体内的代谢情况，对疾病的诊断和治疗具有重要意义。
本实验旨在通过测定转氨酶的活力，探究其在生物体内的作用及其相关机制。
材料与方法：1. 实验动物：选取健康的小鼠作为实验对象。
2. 试剂：包括转氨酶检测试剂盒、生理盐水、麻醉剂等。
3. 仪器：分光光度计、离心机等。
实验步骤：1. 将小鼠随机分为实验组和对照组，每组10只。
2. 实验组小鼠经过麻醉后，采集血液样本，离心分离血清。
3. 对照组小鼠同样采集血液样本，离心分离血清。
4. 使用转氨酶检测试剂盒，按照说明书进行操作，测定血清中转氨酶的活力。
5. 使用分光光度计，测定各组样本的吸光度值，并计算相应的转氨酶活力。
6. 对实验结果进行统计学分析。
实验结果：实验组小鼠的转氨酶活力明显高于对照组小鼠。
经过统计学分析，两组之间的差异具有显著性。
讨论：转氨酶活力的测定结果表明，在实验组小鼠中，转氨酶的活力明显增强。
这可能是由于实验组小鼠受到了某种刺激，导致转氨酶的合成和释放增加。
转氨酶在生物体内参与氨基酸代谢和脂肪酸代谢等重要过程，其活力的增强可能与这些代谢通路的活跃有关。
转氨酶活力的测定对于疾病的诊断和治疗具有重要意义。
例如，肝功能异常常常伴随着转氨酶活力的改变。
通过测定转氨酶活力，可以及早发现肝脏疾病，并进行相应的治疗。
此外，转氨酶活力的测定还可以用于评估药物的肝毒性，指导药物的使用和剂量调整。
然而，需要注意的是，转氨酶活力的测定结果受到多种因素的影响。
例如，实验条件的控制、样本的保存和处理等都可能对结果产生影响。
因此，在进行转氨酶活力的测定时，需要严格控制实验条件，并进行多次重复实验，以确保结果的准确性和可靠性。
结论：通过测定转氨酶的活力，我们可以了解生物体内的代谢情况，并对疾病的诊断和治疗提供重要参考。
谷丙转氨酶活性测定
2、标准曲线的绘制 取 6 支试管分别用 0 、 1 、 2 、 3 、 5 标号，按下 表所列次序添加各试剂。 将试管于37℃水浴中保温，平衡管内外温度, 向各管内加 0.5ml 2，4— 二硝基苯肼后再保 温20分钟， 最后分别向各管内加入0.4N NaOH 5毫升， 在室温下静置30分钟后， 以 0 号管做“空白”用 520nm 进行比色，读出 光吸收值，以丙酮酸的微摩数为横坐标，光吸收 值为纵坐标，画出标准曲线。
0.35 0.10
0.30 0.10
0.25 0.10
37℃水浴中保温， 平衡管 2，4-二硝基苯肼/ ml 0.50 保温20
0.50
0.50
0.50
NaOH (0.4N)/ml
A520nm
5
静置30
5
分钟
5
5
5
5
2、谷丙转氨酶酶活力的测定
表2.谷丙转氨酶酶活力的测定
1 测定管 谷丙转氨酶底物/ml 0.50 2 “空白”对照管 0.50
37℃水浴保温10min，使管内外温度平衡
稀释肝匀浆/ml 0.10 37℃水浴保温30分钟 2,4—二硝基苯肼试剂/ml 稀释肝匀浆/ml 0.50 0.50 0.10
保温20分钟，冷却
NaOH (0.4N) /ml 5.0 室温下静置30分钟 A520nm 5.0
四、实验结果
用光吸收值读数在操作曲线上查出转氨酶活力单位 数，计算 每100毫升稀释肝匀浆中转氨酶的活力单位数
（4）2，4—二硝基苯肼溶液：
9 血液中转氨酶活力的测定
实验九&十血液中转氨酶活力的测定（分光光度法）本实验八人一组（根据分光光度计来确定）一、目的要求：1、了解转氨酶的重要作用及其在临床诊断中的意义。
2、学习转氨酶活力测定的原理和方法。
二、原理：（谷丙转氨酶和丙酮酸的反应方程式）生物体内广泛存在的氨基移换酶也称转氨酶，能催化α-氨基与丙酮酸的α-酮基互换，在氨基酸的合成和分解，尿素和嘌呤的合成等中间代谢过程中有重要作用。
转氨酶的最适pH接近7.4，它的种类很多，其中以谷氨酸-草酰乙酸转氨酶和谷氨酸-丙酮酸转氨酶（简称谷丙转氨酶）的活力最强。
正常人血清中只含有少量转氨酶，当发生肝炎、心肌梗死等病患时，血清中转氨酶活力常显著增加，所以在临床诊断上转氨酶活力的测定有重要意义。
本实验采用分光光度计法。
谷丙转氨酶作用于丙氨酸和α-酮戊二酸后，生成的丙酮酸与2，4-二硝基苯肼作用生成丙酮酸2，4-二硝基苯腙（催化反应方程式）。
丙酮酸2，4-二硝基苯腙加碱处理后呈棕色，可用分光光度法（520nm）测定。
从丙酮酸2，4-二硝基苯腙的生成量，可以计算酶的活力。
三、操作：实验九标准曲线的绘制（由于时间关系，只做一组数据，不要重复）1、向试管中加入试剂（有改动）：取6支试管，分别标上0、1、2、3、4、5六个号。
按表中所列的次序添加各种试剂（由于后面测定样品时有对照实验，所以不需要加入谷丙转氨酶底物，以蒸馏水补齐；不需要保温10分钟来平衡内外温度）。
2、向各管内加入0.5mL 2，4—二硝基苯肼溶液后37℃保温20分钟。
3、分别向各管内加入0.4mol/L氢氧化钠溶液5mL（丙酮酸2，4-二硝基苯腙加碱处理后呈棕色）。
在室温下保温静置30分钟，以0号管做空白，测定A520nm的吸光度。
用丙酮酸的摩尔数做横坐标，光吸收值为纵坐标，画出标准曲线。
实验十酶活力的测定一、目的要求：2、学习转氨酶活力测定的原理和方法。
二、原理：（谷丙转氨酶和丙酮酸的反应方程式）本实验采用分光光度计法。
实验二酶活力测定方法的研究
实验二酶活力测定方法以及水溶性蛋白含量的测定一．研究背景及目的酶是催化生物体内生化反应的重要成分，它可以在常温常压下非常高效的催化化学反应。
对于酶，我们最关注的的就是它的活性。
在实验中，当我们做酶实验时，只有知道自己在做的酶是有活性的，我们后续的工作才有可能继续。
在实验室购买特定的酶时，我们关注的不是购买的重量，而是购买到的酶活性有多少，能催化多少摩尔的化学反应。
掌握酶催化的活性也有利于我们估计反应需要进行的时间。
甚至在我们改造酶结构的时候，也许要一个标准证明我们的改造是有效的。
这一切，都需要我们能够测定酶的活性。
本实验的目的就是设计实验，合理的测定酶活力。
体会在不同的酶中，具体的实验设计步骤是否相同；学会根据不同酶的特点，设计其酶活力的测定方法；探究酶活力测定的基本原则。
二．原理淀粉酶是水解淀粉的糖苷键的一类酶的总称。
禾谷类种子的萌发时可快速将淀粉转变成葡萄糖，由此我们推断禾谷类种子中存在不止一种淀粉酶，一种是我们熟知的β-淀粉酶，它可从淀粉还原性末端切掉葡萄糖。
另一种α-淀粉酶它既作用于直链淀粉，亦作用于支链淀粉，无差别地随机切断糖链内部的α-1，4-链。
休眠的种子中就只有β-淀粉酶的存在，α-淀粉酶是在和粽子萌发的过程中形成的。
α-淀粉酶和β-淀粉酶各有其一定的特性。
β-淀粉酶不耐热，在高温下容易发生钝化，而α-淀粉酶不耐酸，在pH 3.6以下时发生钝化。
在萌发的种子中，这两种淀粉酶同时存在。
想要测定其中一种酶的活性，就要设法钝化另一种酶。
该实验的总体思路为精确控制酶促反应的条件，保持其处于最适条件，测定酶促反应的初速度来表示酶的活力。
通过3,5－二硝基水杨酸比色法确定催化产麦芽糖的含量。
三．仪器与试剂1.仪器：低速离心机（飞鸽牌，TDL-40B，上海安亭科学仪器厂）722分光光度计（上海分析仪器总厂）；40℃水浴锅（DK-S24，上海精宏实验设备有限公司）；70℃水浴锅（电热恒温水浴锅，天津市中环实验电炉有限公司）；药物天平（HCTP12B1，北京宣武天平厂制）；微量可调手动移液器(大龙牌)；具塞试管（15ml）;研钵；50ml容量瓶；100ml容量瓶。
肝脏谷丙转氨酶活力测定
或 组织捣碎机 2. 37℃水浴 3. 分光光度计 4.比色皿
四. 实验试剂
1.标准丙酮酸 2.谷丙转氨酶底物 3.0.1M pH7.4 PB 4.0.02% 2,4-二硝基苯肼溶液 5.0.4M NaOH 6.新鲜肝脏（购买或取活的小白鼠肝脏）
五、实验步骤
1.肝匀浆
COOH CH 2 2 C O COOH COOH CH 2 CH 2 C H N H2 COOH GPT CH
C H3 CHNH 2 COOH
C H3 C O COOH N O2 H2N H N
2,4-二硝基苯肼
CH 3 C N COOH H2 O N O2 NH
N O2 N O2
丙酮酸二硝基苯腙
3.计算
每ml肝匀浆谷丙转氨酶活力单位（U/ml） D = （A—B）× 2 S ×2.5 说明：A：样品A 520nm B：对照A 520nm 2：标准丙酮酸浓度 2.5：谷丙转氨酶换算单位
S：标准A 520nm
五、实验步骤
试管 试剂(ml) 谷丙转氨酶底物 肝匀浆 2.4-二硝基苯肼 谷丙转氨酶底物 0.4M NaOH A 520nm 测定管 （A） 0.5 标准管 （S） 0.5 对照管 （B） —— 空白管 —— 0.1（H2O） 0.5 0.5
称取0.5g 肝脏，剪成小块，加入预冷的pH7.4的PBS 4.5ml，在冰水浴中制成 10%的匀浆， 4000rpm冷冻离心10分钟后保存在冰水中备用。
2. 谷丙转氨酶活力的测定
1）取4支试管，标注名称，按照下表操作 2）计算酶活力 本法规定：酶在37℃ 与底物作用30分钟，产生2.5μg 丙酮酸为一个谷丙转 氨酶活性单位。
37℃ 水浴5 分钟 0.1 0.1（标准丙酮酸） 0.1 混匀后 37℃水浴 准确保温30分钟 0.5 0.5 0.5 —— —— 0.5 混匀后 37℃水浴 准确保温20分钟 各加5ml ，混匀，静置10min，读A 520nm
肝脏中转氨酶活力的测定
实验九肝脏中转氨酶活力的测定一、实验目的1. 了解转氨酶的性质和临床意义；2. 掌握谷丙转氨酶活力的测定方法二、实验原理本实验以丙氨酸的氧化脱氨基为例，分别测定谷丙转氨酶，谷氨酸脱氢酶活性外，又通过抑制剂观察肝组织中的联合脱氨基作用。
在谷丙转氨酶的催化下，丙氨酸和α-酮戊二酸作用生成丙酮酸和谷氨酸。
次反应可逆，平衡点近于1.0无论正向反应或逆向反应皆可用于测定此酶的活性，既可测定所产生的氨基酸，也可以测定生成的酮酸，因此可有多种测定方法。
本实验以丙氨酸和α-酮戊二酸作为谷丙转氨酶作用的底物，利用内源性磷酸吡哆醛作为辅酶，在一定条件及时间作用后测定所生成的丙酮酸的量来确定其酶活力。
丙酮酸能与2,4-二硝基苯肼结合，生成丙酮酸2,4-二硝基苯腙，后者在碱性溶液中呈现棕色，其吸收峰为439-530nm，可用于测定丙酮酸的含量。
α-酮戊二酸也能与2,4-二硝基苯肼结合，生成相应的苯腙，但后者在碱性溶液中吸收光谱与丙酮酸二硝基苯腙有差别，在520nm波长比色时，α-酮戊二酸二硝基苯腙的吸光度远较丙酮酸二硝基苯腙为低（约相差3倍）。
经转氨基作用后，α-酮戊二酸减少而丙酮酸增加，因此在波长为520nm 处吸光度增加的程度与反应体系中丙酮酸和α-酮戊二酸的摩尔浓度呈线性关系，故可借此测定谷丙转氨酶的活力。
三、实验材料、试剂和仪器（一）材料与试剂猪肝脏、乙醇、0.4mol/LNaOH标准丙酮酸溶液（1mL 相当于500μg）：准确称取纯化的丙酮酸钠62.5mg，溶于100mL 的0.05mol/L的H2SO4中，此液需临用前配制。
谷丙转氨酶底物：称取L-丙氨酸0.90g 及α-酮戊二酸29.2mg，先溶于pH7.4 的0.1mol/L 磷酸缓冲液中，然后用1mol/L NaOH 调至pH7.4，再加pH7.4 的0.1mol/L 磷酸缓冲稀释至100mL，贮藏于冰箱内，可保存一周。
（试验了一下pH 接近7.5，中间未调整pH 值）0.1mol/L 的磷酸缓冲液（pH7.4）：称取13.97gK2HPO4（如果是K2HPO4·∙H2O，则需称取18.31g）和2.69gKH2PO4 溶于1000mL 蒸馏水中。
分光光度法测定血清谷丙转氨酶活力实验原理的教学
在医学实验中，测定血清谷丙转氨酶（AST）活力是一项常见的实验项目。
AST是一种存在于细胞质和线粒体中的酶，其活力的变化与肝脏疾病、心肌梗塞等疾病有关，因此对其活力的测定具有重要的临床意义。
分光光度法是一种常用的测定AST活力的方法，其原理简单、灵敏度高，被广泛应用于实验室教学和临床实验中。
本文将介绍分光光度法测定血清谷丙转氨酶活力的教学方法及实验原理。
二、实验原理1. 原理概述分光光度法测定血清谷丙转氨酶活力的原理是通过测定NADH在340nm处的吸光度变化来间接测定AST的活力。
在AST催化下，谷丙酮酸被转化为丙酮酸，同时NADH被氧化为NAD+，在这个过程中，NADH的量减少，其在340nm处的吸光度也随之下降。
通过测定NADH在340nm处的吸光度变化可以间接测定AST的活力。
2. 实验步骤（1）样品制备：将待测血清标本离心沉淀，取清澈液体作为实验样品。
（2）反应体系配置：在离心管中依次加入0.1mol/L磷酸缓冲液、0.1mol/L谷氨酰胺、0.005mol/L的NADH和待测血清标本，将混合液置于37℃水浴中预温。
（3）光度计调零：将光度计调零，设置吸光度波长为340nm。
（4）反应开始：向预温的混合液中加入谷丙酮酸，开始计时测定吸光（5）记录数据：间隔一定时间（例如30秒）记录一次吸光度值，直至吸光度不再发生变化。
三、教学方法1. 理论讲解：在实验前，对分光光度法的原理进行详细的讲解，包括NADH在340nm处的吸光度变化与AST活力的关系，以及实验的步骤和注意事项。
2. 演示操作：老师可以进行实际的操作演示，展示如何配置反应体系、如何操作光度计、如何记录数据等。
3. 学生操作：让学生分组进行实验操作，指导学生合理分配实验任务，注意安全操作，并及时解答学生在实验中遇到的问题。
4. 数据分析：引导学生利用实验数据进行分析，计算得出血清谷丙转氨酶活力的结果，并进行讨论和总结。
四、实验结果分析通过分光光度法测定AST活力的实验，可以得到待测血清样本在一定时间内NADH在340nm处的吸光度值变化曲线。
血清转氨酶(GPT、GOT)活性的测定
血清转氨酶（GPT、GOT）活性的测定【原理】酶的活性即酶的催化效能，在一定条件下酶活性的高低代表酶的含量的多少，故酶活性的测定也即相当于酶含量的测定。
酶的活性通常都是在一定条件下（最适温度、最适的pH、必要的激动剂等），一定的时间内，测定该酶所催化的反应系统中底物的消耗量或产物生成量来确定的。
血清谷丙转氨酶（SGPT）及血清谷草转氨酸（SGOT）分别以丙氨酸和α-酮戊二酸；天冬氨酸和α-酮戊二酸为底物，催化它们进行如下反应：在SGOT催化下所生成的草酰乙酸又可在β脱羧酶和枸橼酸苯胺作用下脱羧，生成丙酮酸，而丙酮酸则可与2，4二硝基苯肼作用，生成丙酮酸2，4二硝基苯腙，后者在碱性溶液中呈棕色，在520nm比色时，α-酮戊二酸二硝基苯腙之光吸收远丙酮酸二硝基苯腙为低。
在反应后，α-酮戊二酸减少而丙酮酸增加，故520nm处光密度增加之程度与反应体系中丙酮酸与α-酮戊二酸之克分子比例成线性关系。
一般临床上用以测定SGPT及SGOT活性的方法有改良的穆氏法、金氏法及赖氏法，这些方法都是基于上述原理而设计的，操作也基本相同，只是这些实验的某些条件、活性单位的规定和计算有所差异。
改良的穆氏法（Mohun）规定血清在37（pH7.4）的条件下，与底物作用30分钟后，每生成2.5μg丙酮酸为一个转氨酶活性单位。
金氏法（King）则规定在同上条件下，与底物作用60分钟后，每生成1μM丙酮酸为一个转氨酶活性单位。
赖氏法（Reitman）本身并未对转氨酶活性单位提出规定，他是用卡门氏法（Karman）来定单位的。
卡门氏法是在紫外分光光度计中用1毫升血清，反应溶液总量为3毫升，在340nm波长下，用内径为1.0cm的比色皿，25℃ 1分钟内所产生的丙酮酸，在乳酸脱氢酶作用下，使NADH变成NAD+，而引起光密度下降0.001为1个转氨酶活性单位。
而赖氏法则是用卡门氏法所测出的单位数相当于赖氏法所产生的丙酮酸量的相关系数，套用卡门氏单位而来。
转氨酶测定
二硝基苯腙（黄色），进而在碱性环境中生成 取血清加入1号试管内，准确保温30min。
取2支试管并标号，用1号试管作为测定管，2好试管作为空白对照管。 酶活力（U/100mL）的计算
红棕色的苯腙硝醌化合物。 在标准曲线上查出 丙酮酸的umol数（用1 umol丙酮酸代表酶活力单位），计算100mL血清中转氨酶的活力单位数。
据此与同样处理的丙酮酸标准液相比较，便可算出或通过标准曲线查出血清中GPT的活力。 取血清加入1号试管内，准确保温30min。 测定转氨酶活力的方法很多，本实验采用分光光度法。
酶活力（U/100mL）的计算 在标准曲线上查出 丙酮酸的umol数（用1 umol丙酮酸代表酶活力单位），计算100mL血清中转氨酶的活力单位数。 取出后向各管加入NaOH溶液5mL。 室温下静置10min，以零号管作对照,于520nm波长处测定各管光吸收值。 向2支试管各加NaOH溶液5mL。 向2支试管各加NaOH溶液5mL。 室温下静置10min，以2号管作对照,于520nm波长处测定1号管光吸收值。 其颜色的深浅在一定范围内与丙酮酸的生成量，亦即与GPT活力的高低成正比关系。 各加入基质液，置37℃恒温水浴中保温10min以平衡内外温度。 磷酸缓冲液（）
血液中转氨酶活力的测定（分光光度法）
【实验目的】
1.掌握转氨酶活力测定的原理和方法。 2.了解血清谷丙转氨酶活力测定的临床意义。
【实验原理】
测定转氨酶活力的方法很多，本实验采用分 光光度法。血清中的谷-丙转氨（GPT），在 37℃、的条件下，可催化基质（底物）液中 的丙氨酸与α-酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸：
生化实验_转氨酶(GPT)活性的测定报告
实验二（2）转氨酶（GPT）活性的测定一．研究背景及目的转氨酶是生物体内重要的一类酶。
转氨酶催化α-氨基酸的氨基与α-酮酸的酮基之间的相互转化而生成一种新的氨基酸与一种的新的酮酸，这种作用被称为转氨基作用[1]。
转氨酶种类很多，体内除了赖氨酸、苏氨酸外，其余α-氨基酸都可参加转氨基作用并各有其特异的转氨酶。
其中以谷丙转氨酶（GPT）和谷草转氨酶（GOT）最为重要。
GPT与GOT活性的测定在临床上有着重要应用，可作为一些疾病诊断的指标。
GPT催化的是谷氨酸与丙酮酸之间的转氨作用，GOT催化的是谷氨酸与草酰乙酸之间的转氨作用，草酰乙酸在柠檬酸苯胺溶液中可以转变为丙酮酸与二氧化碳。
由于都有丙酮酸的生成，所以可以通过实验测定一定时间内丙酮酸的生成量而计算这两种转氨酶的活性。
本实验以动物的新鲜肝脏和血清为材料，分别测定其中的GTP的活性，以此来研究该转氨酶活性的测定方法。
二．原理由于动物肝脏和血清中的转氨酶活性较高，易于测得，且动物或人的转氨酶活性的测定应用广泛、技术成熟，因此本试验选取家兔的新鲜肝脏和血清为实验材料，对其中的一种重要转氨酶——GTP的活性进行测定。
转氨酶活性测定的历史沿革建立了金氏法、穆氏法及赖氏法等较成熟的基本方法，本实验采用的是金氏法。
该方法对转氨酶活力的定义是：血清在37℃，pH7.4条件下，与底物作用60min后，每生成1μM丙酮酸为一个转氨酶活性单位。
丙酮酸含量的测定运用的是比色法。
丙酮酸可与2,4-二硝基苯肼反应，生成丙酮酸二硝基苯腙，在碱性溶液中显棕红色，所以通过测定溶液在520nm下的光吸收值并与标准溶液比色便可计算出丙酮酸的含量，丙酮酸的含量对应于一定的转氨酶活力单位。
三．材料、试剂与仪器材料：新鲜家兔肝脏和血清试剂[1]：①磷酸盐缓冲液（pH7.4）甲液：1/15 mol/L磷酸氢二钠溶液乙液：1/15 mol/L磷酸氢二钾溶液取甲液825ml，乙液175ml，混合，测得pH为7.4即可。
转氨酶活力实验报告
一、实验目的1. 了解转氨酶在生物体内的重要作用。
2. 掌握转氨酶活力的测定原理和方法。
3. 学会运用分光光度法测定转氨酶活力。
二、实验原理转氨酶是一类催化氨基酸与酮酸之间氨基转移反应的酶。
在生物体内，转氨酶参与氨基酸的合成和分解、尿素和嘌呤的合成等中间代谢过程。
转氨酶活力的高低可以反映肝细胞受损程度和肝功能状态。
本实验采用分光光度法测定转氨酶活力。
在特定条件下，转氨酶催化丙氨酸与α-酮戊二酸反应生成丙酮酸和谷氨酸。
丙酮酸与2，4-二硝基苯肼作用生成丙酮酸-2，4-二硝基苯腙，后者在碱性条件下呈棕色，可通过分光光度法测定其吸光度，从而计算出转氨酶活力。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 丙氨酸- α-酮戊二酸- 2，4-二硝基苯肼- 磷酸氢二钠- 磷酸二氢钠- 碘化钾- 氯化钠- 丙酮- 酒精- 37℃水浴2. 实验仪器：- 电子天平- 移液器- 试管- 试管架- 玻璃搅拌棒- 分光光度计- 移液管- 容量瓶四、实验步骤1. 配制工作溶液：- 丙氨酸溶液：称取0.1g丙氨酸，溶解于100ml蒸馏水中，配制成0.1mol/L 的丙氨酸溶液。
- α-酮戊二酸溶液：称取0.1gα-酮戊二酸，溶解于100ml蒸馏水中，配制成0.1mol/L的α-酮戊二酸溶液。
- 2，4-二硝基苯肼溶液：称取0.1g2，4-二硝基苯肼，溶解于10ml丙酮中，配制成0.01mol/L的2，4-二硝基苯肼溶液。
2. 标准曲线的绘制：- 取7支试管，分别加入不同浓度的丙酮酸标准溶液，加入1ml 2，4-二硝基苯肼溶液，混匀后置于37℃水浴中反应60min。
- 在520nm波长下测定吸光度，以吸光度为纵坐标，丙酮酸浓度为横坐标，绘制标准曲线。
3. 转氨酶活力的测定：- 取7支试管，分别加入不同浓度的转氨酶溶液，加入1ml 丙氨酸溶液和1ml α-酮戊二酸溶液，混匀后置于37℃水浴中反应60min。
- 取出试管，加入1ml 2，4-二硝基苯肼溶液，混匀后置于37℃水浴中反应60min。
转氨酶的测定实验报告
一、实验目的1. 了解转氨酶在生物体内的作用及其在临床诊断中的意义。
2. 学习转氨酶活力测定的原理和方法。
3. 掌握分光光度法测定转氨酶活力的操作步骤。
二、实验原理转氨酶（Transaminase）是一类催化氨基酸与酮酸之间氨基转移反应的酶。
它们在生物体内广泛存在，尤其在肝脏、心肌等组织中活性较高。
转氨酶在氨基酸的合成和分解、尿素和嘌呤的合成等中间代谢过程中发挥着重要作用。
本实验采用分光光度法测定血清谷丙转氨酶（ALT）活力。
谷丙转氨酶催化丙氨酸（Ala）与酮戊二酸（α-KG）之间的氨基转移反应，生成丙酮酸（Pyruvate）和谷氨酸（Glu）。
生成的丙酮酸与2，4-二硝基苯肼（2，4-DNPH）作用，生成丙酮酸2，4-二硝基苯腙（2，4-DNP-Pyruvate），加碱处理后呈棕色，可通过分光光度法测定其在特定波长下的吸光度，从而计算酶的活力。
三、实验材料与仪器1. 材料：血清样本、底物溶液、2，4-二硝基苯肼溶液、氢氧化钠溶液、pH7.4的磷酸盐缓冲液等。
2. 仪器：分光光度计、恒温水浴锅、移液器、试管等。
四、实验方法1. 准备工作：将血清样本、底物溶液、2，4-二硝基苯肼溶液、氢氧化钠溶液、pH7.4的磷酸盐缓冲液等实验材料准备好。
2. 标准曲线绘制：以不同浓度的丙酮酸为标准品，按实验步骤进行测定，绘制标准曲线。
3. 样本测定：将血清样本按照实验步骤进行测定，计算酶的活力。
五、实验步骤1. 标准曲线绘制：a. 取一系列不同浓度的丙酮酸标准品，加入2，4-二硝基苯肼溶液，混匀；b. 加碱处理后，于特定波长下测定吸光度；c. 以丙酮酸浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 样本测定：a. 取一定量的血清样本，加入底物溶液，混匀；b. 于37℃水浴中反应一定时间；c. 加入2，4-二硝基苯肼溶液，混匀；d. 加碱处理后，于特定波长下测定吸光度；e. 根据标准曲线，计算酶的活力。
六、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：根据实验结果，绘制标准曲线，并计算相关系数。
生化实验_转氨酶(GPT)活性的测定报告
实验二（2）转氨酶（GPT）活性的测定一．研究背景及目的转氨酶是生物体内重要的一类酶。
转氨酶催化α-氨基酸的氨基与α-酮酸的酮基之间的相互转化而生成一种新的氨基酸与一种的新的酮酸，这种作用被称为转氨基作用[1]。
转氨酶种类很多，体内除了赖氨酸、苏氨酸外，其余α-氨基酸都可参加转氨基作用并各有其特异的转氨酶。
其中以谷丙转氨酶（GPT）和谷草转氨酶（GOT）最为重要。
GPT与GOT活性的测定在临床上有着重要应用，可作为一些疾病诊断的指标。
GPT催化的是谷氨酸与丙酮酸之间的转氨作用，GOT催化的是谷氨酸与草酰乙酸之间的转氨作用，草酰乙酸在柠檬酸苯胺溶液中可以转变为丙酮酸与二氧化碳。
由于都有丙酮酸的生成，所以可以通过实验测定一定时间内丙酮酸的生成量而计算这两种转氨酶的活性。
本实验以动物的新鲜肝脏和血清为材料，分别测定其中的GTP的活性，以此来研究该转氨酶活性的测定方法。
二．原理由于动物肝脏和血清中的转氨酶活性较高，易于测得，且动物或人的转氨酶活性的测定应用广泛、技术成熟，因此本试验选取家兔的新鲜肝脏和血清为实验材料，对其中的一种重要转氨酶——GTP的活性进行测定。
转氨酶活性测定的历史沿革建立了金氏法、穆氏法及赖氏法等较成熟的基本方法，本实验采用的是金氏法。
该方法对转氨酶活力的定义是：血清在37℃，pH7.4条件下，与底物作用60min后，每生成1μM丙酮酸为一个转氨酶活性单位。
丙酮酸含量的测定运用的是比色法。
丙酮酸可与2,4-二硝基苯肼反应，生成丙酮酸二硝基苯腙，在碱性溶液中显棕红色，所以通过测定溶液在520nm下的光吸收值并与标准溶液比色便可计算出丙酮酸的含量，丙酮酸的含量对应于一定的转氨酶活力单位。
三．材料、试剂与仪器材料：新鲜家兔肝脏和血清试剂[1]：①磷酸盐缓冲液（pH7.4）甲液：1/15 mol/L磷酸氢二钠溶液乙液：1/15 mol/L磷酸氢二钾溶液取甲液825ml，乙液175ml，混合，测得pH为7.4即可。
生物化学实验3.紫外法测定血清蛋白质的含量.血清转氨酶活性的测定
紫外分光光度法测定蛋 白质含量
(二）仪器 722G型可见光分光光度计、恒温水浴箱
四、操作步骤
1.标准曲线的绘制（不做）。 2.血清ALT活力测定 取两支试管按下表操作：
试剂（ml）
测定管
空白管
血清
0.1
0.1
ALT底物液
0.5
-
混匀，置37℃水浴保温30min
2,4-二硝基苯肼
0.5
0.5
AL保温20min
(一）试剂 1、0.9%Nacl溶液 2、小牛血清
(二）仪器
754型紫外分光光度计、刻度吸量管、微量移
液器
四、实验步骤
1、稀释血清
准确吸取0.1mL血清，置于50mL容量瓶中， 用0.9%Nacl溶液稀释至标准刻度（即500倍）。
2、测定吸光度
检查→开机→预热（30min）→ 设置波长→放入比色皿
由于蛋白质样品中经常混有核酸，其最大吸收峰 在260nm处 但其在280nm处也有光吸收，可通过公式 校正，以消除核酸的影响，而推算出蛋白质浓度。
蛋白质浓度(mg/mL) =（1.45×A280 – 0.74×A260）×500 =（1.55×A280 – 0.76×A260）×500
三、试剂和仪器
二、实验原理
生成的丙酮酸可与2,4二硝基苯肼（起终止和显色 作用）发生加成反应，生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙，进 而在碱性环境中生成红棕色的苯腙硝醌化合物，其颜色 的深浅在一定范围内与丙酮酸的生成量成正比关系。
转氨酶的提取实验报告
一、实验目的1. 学习转氨酶的提取方法。
2. 掌握实验室基本操作技能。
3. 了解转氨酶在生物体内的作用及其在临床诊断中的意义。
二、实验原理转氨酶是一种催化氨基酸与酮酸之间氨基转移的酶，广泛存在于生物体内。
本实验采用酶的提取方法，从动物组织或植物组织中提取转氨酶，通过分光光度法测定其活力，了解转氨酶在代谢过程中的重要作用及其在临床诊断中的意义。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：动物肝脏、植物叶片、磷酸缓冲液、丙酮、蒸馏水、氯化钠、碳酸氢钠、氢氧化钠、硫酸铵等。
2. 仪器：离心机、分光光度计、电子天平、研钵、烧杯、移液器、试管等。
四、实验步骤1. 样品处理：将动物肝脏或植物叶片用剪刀剪成小块，称取适量，置于研钵中，加入适量磷酸缓冲液（pH=7.4）和氯化钠，研磨成匀浆。
2. 提取液制备：将匀浆转移至离心管中，离心（3000 r/min，10 min），取上清液作为提取液。
3. 酶液制备：取一定量的提取液，加入等体积的丙酮，混合均匀，放置冰箱中过夜，使酶蛋白沉淀。
4. 沉淀处理：将沉淀用蒸馏水洗涤两次，加入适量碳酸氢钠溶液，搅拌均匀，室温下放置30 min，使酶蛋白重新溶解。
5. 离心：将溶液离心（3000 r/min，10 min），取上清液作为酶液。
6. 转氨酶活力测定：取一定量的酶液，加入底物（L-丙氨酸和α-酮戊二酸）和反应缓冲液，在适宜的温度下反应一定时间，测定反应液在特定波长下的吸光度，根据标准曲线计算酶活力。
五、实验结果与分析1. 转氨酶活力：通过分光光度法测定，酶液在特定波长下的吸光度与酶活力呈线性关系。
根据标准曲线，计算酶活力为XX U/mg蛋白。
2. 影响酶活力的因素：实验结果表明，温度、pH值、底物浓度等因素对转氨酶活力有显著影响。
在一定范围内，酶活力随温度升高而增加，pH值在7.4左右时酶活力最高，底物浓度在一定范围内增加时，酶活力也随之增加。
六、实验结论1. 成功提取了动物肝脏或植物叶片中的转氨酶。
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【思考题】
1.血清中谷丙转氨酶的测定有何临床意义？ 2.血清谷丙转氨酶的测定有何注意点？为什么要避免 溶血？ 3.根据下列公式可以计算待测物的浓度，请问怎样才 能减少实验误差？
A标 A样
C标 C 未知
实验试剂配制
1. 0.1M/L pH7.4磷酸盐缓冲液 420mL 0.1M/L NaH2PO4 +80mL 0.1M/L Na2HPO4
丙酮酸可与2,4二硝基苯肼发生加成反应，生成丙酮酸2,4-二硝基苯腙，该产物在碱性环境中可转化成红棕色 的苯腙硝醌化合物，其颜色的深浅与丙酮酸的生成量， 亦即与谷丙转氨酶活性的高低成正比。通过标准曲线可 以查出丙酮酸的生成量。
仪cm试管、刻度吸量管。 2. 恒温水浴、离心机、721型分光光度计。
c. 向空白与样品管中分别加入0.5 mL 2，4－二硝基
苯肼，摇匀，水浴保温15 min；
d. 向空白管中加入0.1 mL血清，摇匀。
e. 向所有3支试管中都加入5.0 mL 0.4 M NaOH溶液， 摇匀并水浴保温15 min后在520 nm进行比色测定。
保温30分钟
37℃ 保温30分钟
五、实验结果
1、用测定吸光值在标准曲线上查出丙酮酸的生成量; 2、计算：
丙酮酸物质的量（mol）
谷丙转氨酶活性单位/100mL =
时间（min）
×1000
六、酶活力单位的定义
国际单位：在最适温度（25℃）下，1分钟内转化1 mol底物的酶量称为1个酶单位（U）。
Katal单位：在一定条件下，1秒钟内转化1mol底物所 需要的酶量。 1 U＝16.67 nKat 1 Kat ＝6 107 U
* 试剂
1. 0.1 mol/L pH 7.4磷酸盐缓冲液 ⑴ 0.1 mol/L磷酸氢二钠溶液 ⑵ 0.1 mol/L磷酸二氢钾溶液
⑶ 0.1 mol/L pH 7.4的磷酸盐缓冲液。
仪器与试剂 (二)
2. 标准丙酮酸（含丙酮酸 2.0 mol/mL）
3. 谷-丙转氨酶底物溶液
(含-酮戊二酸2 mol/ml及DL-丙氨酸200 mol/ml) 4. 2,4-二硝基苯肼溶液 5. 0.4 mol/L NaOH溶液。
四、实验操作
1、标准曲线制作： (1)取6支试管，分别标上0，1，2，3，4，5编号。先将试管 置于37℃恒温水浴中保温5分钟以平衡内外温度。然后按下 表所列的次序添加各试剂。
（2）向各管内加入0.5 mL 2,4-二硝基苯
肼溶液;
37 ℃保温15 min;
分别向各管内加入0.4 M氢氧化钠溶液5 mL;
七、注意事项 1.在测定谷丙转氨酶活力时，应事先将底物、血清 在37℃ 水浴中保温，然后在血清管中加入底物， 准确记时; 2.转氨酶只能作用于-L-氨基酸，对D-氨基酸无作 用。实验室多用-DL-氨基酸; 3.进行样品测定时，加入2,4-二硝基苯肼溶液后要 摇匀并保温15 min; 4. 血清样品的测定需在显色后30 min内完成。
37℃保温15 min;
以0号管作空白对照，测定520 nm的光吸收值;
用丙酮酸的微摩尔数为横坐标，光吸收值为
纵坐标，画出标准曲线。
2、血清样品谷丙转氨酶活性的测定
a. 取3支试管，分别标上空白、样品1、样品2;向各管内 加入0.5 mL谷丙转氨酶底物、0.1 mL磷酸缓冲溶液并 摇匀，37℃水浴保温5 min; b. 向样品管中分别加入0.1 mL血清，37℃保温30 min;
实验三、氨基移换反应 —血液中转氨酶活力的测定
一．实验原理
转氨作用
指在转氨酶催化下将 -氨基酸的氨基转给 另一个-酮酸，生成 相应的-酮酸和一种 新的-氨基酸的过程, 也称氨基移换作用。
血清中的谷-丙转氨酶，在37℃、pH 7.4的条件下，可催化丙氨酸与-酮戊 二酸反应生成谷氨酸和丙酮酸.