黄芩含量测定方法

黄苓含量测定方法（黄苓苷）黄苓为唇形科植物黄苓Scutellaria baicalensis Georgi 的干燥根。

2005版《中国药典》一部采用高效液相色谱法测定其黄苓苷的含量，文献报道的含量测定方法较多，主要有高效液相色谱法、薄层扫描法和紫外分光光度法等。

一、高效液相色谱法
2005 版《中国药典》黄苓含量测定项下:
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇水-磷酸（47: 53：0.2 ）为流动相；检测波长为280nm理论板数按黄苓苷峰计算应不得低于2500。

供试品溶液的制备：取本品中粉约0.3g，精密称定，加70聽醇40ml，加热回流3小时，放冷，滤过，滤液置100ml量瓶中，用少量70聽醇分次洗涤容器和残渣，洗液滤入同一量瓶中，加70聽醇至刻度，摇匀。

精密量取1ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

文献报道的采用HPLC法测定黄苓苷的含量，所用的色谱条件较多，按照常
用的流动相系统介绍。

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A :甲醇-水-磷酸系统:
①Waters 600 高效液相色谱仪；Shim-pack ODS 38柱（150m材 6.0mm ;
流动相为甲醇-0.4%磷酸水溶液（45: 55）;流速1.0ml/min ;检测波长280nm
②日本岛津LC-4A高效液相色谱仪；色谱柱：ZORBAX sb-C18
（4.6mm x 25cm ）;流动相：甲醇-0.4% 磷酸（1 : 1）;流速 1.0mL/min ;室温
25C±2C；检测波长280nm
③ waters -600高效液相色谱仪；色谱柱：ODSC18柱（610nm x 150nm）；流
动相：磷酸（1 f 146）-乙腈（18 : 7）;流速1ml/min ;检测波长277nm柱温:25C
④ Waters 515 高效液相色谱仪；色谱柱：HangBang C18 (200mm< 4.6mm, 5卩m）；流动相：甲醇-水-磷酸（47 : 53 : 0.2）；检测波长280nm流速为1.0mL/
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⑤岛津LC-2010高效液相色谱仪；色谱柱C18反相柱（150mm< 4.6mm）;柱温40C；流动相：甲醇-水-磷酸（47 : 53 : 0.2）;流速1.0ml/min ;检测波长280nm 样品一般用甲醇、流动相、70聽醇超声或回流提取，也有蒸馏水为提取溶剂的植提之家植提间中国植提坛< 提论坛血网QSX” 0%m"M
B :甲醇-水-冰醋酸系统:
①液相色谱仪（美国光谱物理公司）；色谱柱：DiamonsilTM （钻石）C18反相柱（4.6mm< 250 mm,5卩m）；流动相：甲醇-乙腈-水-冰醋酸（25 : 22：75：1）；柱温室温；流速1.0 ml/min ；检测波长为277nm供试品溶液的制备：咳喘静糖浆用正丁醇5分3次萃取（以PbAC试液检查母液中黄苓苷为负反应），取上层液合并，80C水浴蒸干。

残渣加4ml甲醇溶解后通过柱层析（中性氧化铝，100〜200 目,1cm）,用15mL甲醇洗脱，收集全部滤液，蒸干，残渣用5mL甲醇溶解后，用甲醇定容至25mL精密量取上述溶液3mL用流动相稀释定容至10 mL,作为供试品溶液。

（金虹，“高效液相色谱法测定咳喘静糖浆中黄苓苷含量的研究”，西南科技大学学报，2005, 20 （3））
②HP1100高效液相色谱仪（美国惠普公司）；色谱柱:ODS C18柱（Zobax）, 粒径5卩m ,柱径4.5mm,柱长250mm ）流动相：甲醇-水-醋酸=45 :
55 : 1 ;流速2.0ml/min ;柱温40°C；检测波长:274nm。

中一
③大连依利特P 200 U液相色谱仪；色谱柱：十二烷基硅烷健合硅胶柱
（25mn« 4.6mm）;流动相：乙腈-0.3%磷酸水溶液（100：400）;检测波长203nm
流速1.0 ml/min ；柱温室温。

C :甲醇-磷酸二氢钠系统：中一
①岛津LC-10ATvp高效液相色谱仪；Shim-pack ODSC18柱(150m材
6.0mm , 流动相为甲醇-磷酸二氢钠(36：64)，柱温50C,检测波长为280nm
②Agillent1100 高效液相色谱系统；色谱柱：C18柱(4.6mm X 260mm)流动相：甲醇-0.2mol/L 磷酸二氢钠(60 : 40),用磷酸调pH至2.7 ;流速 1.0mL/min ;检测波长275nm 柱温室温。

…
另外，不常使用的HPLC条件，如：_
HP1100 高效液相色谱系统；色谱柱：LUNA C18 (2) , 4.6mmx 150mm 5卩m 检测波长为318 nm；柱温35C ；流速0.9mlmin。

流动相梯度洗脱：0〜9分钟，0.4%磷酸溶液：87%乙腈：13% 9〜10分钟，0.4%磷酸溶液：87〜75%乙腈：13〜25% 10〜20分钟，0.4%磷酸溶液：77% 乙腈：25% 20〜21分钟，0.4% 磷酸溶液：75〜87%乙腈：25〜13% (陈长水，“梯度洗脱HPLC法同时测定双黄连口服液中绿原酸和黄苓苷含量”，安徽医药，2005, 9(10))中―
Waters-515 型高效液相色谱仪；色谱柱：Lichrospher C18
(4.6 x 200mm 5 卩m)；流动相:甲醇-0.05%三氟乙酸(47 : 53)；流速1.0mL/ min；柱温30C；检测波长280nm样品以75%^醇为提取溶剂。

(包贝华，“反相高效液相色谱法测定清热消炎冲剂中黄苓苷的含量”，中国实验方剂学杂志，2005, 11 (4))
、薄层扫描法中国■物提取物坛"ID LT52W
谢玲等用双波长薄层扫描法测定苓柏烧伤液中黄苓苷的含量。

采用CS-900双波长薄层扫描仪，硅胶GF254板，以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(7：3：1：1)
为展开剂，双波长反射线性扫描：入S=297nm入R=365nm样品用石油醚脱脂后，经过D101型大孔吸附树脂处理，收集40汇醇洗脱液。

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张武标等用薄层扫描法测定复方逍遥合剂中黄苓苷含量。

采用Scanner 3型薄层扫描仪，固定相为聚酰胺薄膜，以乙酸为展开剂，于275nm波长处测定吸收度。

三、薄层-比色法
王淑珍等用薄层-比色法测定中成药清喉咽合剂中黄苓苷的含量，采用
CS120-02紫外分光光度计（日本岛津公司）。

固定相为聚酰胺薄膜上,以36聽酸
为展开剂,展开吹干后于紫外分析仪365nm下剪下黄苓苷,用二甲基甲酰胺洗脱至薄膜上无黄苓苷为止（荧光灯下检查）,挥去二甲基甲酰胺,用50聽醇溶解至10ml,测定吸收度。

样品采用单渗滤法用57汇醇浸渍。

实验操作中,注意点样要
集中,剪取谱带要完全中国物物提取物坛B%W4aA3*d
四、紫外分光光度法
张涛等采用络合物萃取-紫外分光光度法测定平座散中黄苓苷的含量。

采用751-GW型分光光度计，测定方法与条件为：精密量取对照品溶液适量（含黄苓苷180卩g以内），置分液漏斗中并加水稀释至15ml,依次精密加入0.05%硫酸铜溶
液4ml,氨水溶液3ml,2.4%溴化十六烷基三甲铵溶液3ml混匀以形成络合物,精密加入正丁醇10ml振摇萃取3min,加4ml饱和氯化钠水溶液破乳；放置分层后取
正丁醇层离心，用干燥滤纸过滤，以取对照品溶液0.0ml的正丁醇萃取液为空白在20〜35C左右于（262 ± 1）nm处测定吸收度。