第八章消化系统疾病动物模型共118页文档

水温应保持恒定。 动物禁食期间，如自食粪便会影响实验
结果。
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应激性胃溃疡模型
［模型评价与注意事项］
应激束缚笼的大小应与动物匹配，松紧度 合适。
雌性大鼠更易引起应激性溃疡。 受试药物一般在应激前30~60 min给予。
雷尼替丁0.135 g/kg 西咪替丁（甲氰咪胍）1.0 g/kg体重
急性胃炎动物模型
大鼠禁食24h，在清醒状态下，用下述试剂或物质灌胃：
（1）水杨酸制剂（如20 mmol/L阿司匹林或水杨 酸溶液）按100 mg/kg体重灌胃；
（2）2ml 10 mmol/L的醋酸或2ml 不同浓度的盐酸 （1，10，100 mmol/L）；
（3）2ml 同种动物胆汁或2 mmol/L的牛磺胆酸； （4）15%的乙醇；
防御因素：粘液-碳酸氢盐屏障、粘膜屏障 、粘膜血流量、胃上皮细胞的更新、表皮生 长因子和内生性前列腺素等。
溃疡的形成主要由于防御因素和致溃疡因素 的平衡失调所致。
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急性胃溃疡动物模型
常用的方法
① 应激法
乙醇
组胺
② 幽门结扎法 促胃液素
③ 药物法
肾上腺类固醇 水杨酸盐
④ 醋酸法
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急性胃溃疡—利血平法
四、利血平诱发胃溃疡模型
急性胃溃疡—利血平法
造模机制
利血平是外周交感神经阻滞药，能耗竭肾上腺素能神 经末梢内儿茶酚胺类递质，引起胃粘膜损伤。 可减弱肾上腺素能神经的功能，使迷走神经兴奋性相对升 高，胃酸分泌增加，胃及血管平滑肌收缩加强； 可耗竭中枢及外周神经以及其他组织的多巴胺，使多巴胺 的细胞保护作用减弱； 可减少胃粘膜NO含量，降低胃粘膜的抗损伤能力，从而引 起胃溃疡。
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急性胃溃疡—乙醇法
模型评价及注意事项
乙醇性胃溃疡的程度与乙醇的浓度成正比，一 般乙醇浓度40％以上可引起胃黏膜明显损伤， 80％以上时出现明显破溃、坏死，因此制备胃 溃疡模型时多采用75％以上乙醇或无水乙醇。
也可用盐酸-乙醇(50%乙醇-O.15mmol/L盐酸) 给大鼠灌胃(1ml/100mg)造成溃疡，称为酸乙醇 性溃疡。
（2）-（4）可单独或几种合用（2ml左右）灌胃；
急性胃炎动物模型
[结 果]
4h后处死动物，剖检可见胃内发生急性弥 漫性炎症改变。
[病 变]
胃粘膜表面有浅表糜烂、出血，粘膜层 内见中性粒细胞浸润。
二、胆汁返流性胃炎模型
急性胃炎动物模型
[造模原理]
碱性肠液倒流入胃，刺激胃粘膜可引起 炎症，即胆汁反流性胃炎。常见于原发性或 继发性幽门功能紊乱或胃切除术后。本法取 上部小肠的碱性肠液注入已结扎幽门的同种 大鼠胃内，使之对胃粘膜产生持续刺激，形 成胃炎。
胃粘膜缺血、缺氧和 抵抗力↓
胃酸、胃蛋白酶和 胃泌素分泌↑
应激性溃疡
[实验动物]
应激性胃溃疡模型
Wistar大鼠，160-180g，雌雄不限。
[器 材]
大鼠固定钢板或束缚笼；恒温水浴装置。
应激束缚笼
应激性胃溃疡模型
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应激性胃溃疡模型
[操作方法]
禁食（不禁水）24h，将动物固定（笼或固定 器）。
对照组溃疡指数-给药组溃疡指数
溃疡抑制百分率=
对照组溃疡指数
×100%
溃疡发生百分率= 形成溃疡动物数 ×100%
实验动物数
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评价和注意事项
幽门结扎法胃溃疡模型
造模方法简单，溃疡发生快，成功率可达85%～100%； 用于观察药物对溃疡形成的预防作用。
本法规定大鼠禁食48~72 h。如大鼠体重小于180 g，禁食 24~48 h，这样动物可以耐受手术；若大鼠体重超过180 g， 禁食48~72 h，可提高胃溃疡发生率。
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二、胆汁返流性胃炎模型
[实验动物]
急性胃炎动物模型
Wistar大鼠，雄性，180 ~ 220g
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急性胃炎动物模型
[操作方法]
1. 制备上部小肠液； 2. 向胃内注入小肠液，2 ml/只（正常对照组注入2
ml生理盐水）。缝合腹壁，腹腔注射阿托品5 mg/kg体重，以抑制胃液分泌，利于胃粘膜损伤 模型的形成； 3. 处死大鼠，开腹，结扎贲门，取出胃，沿胃大弯 剪开。用滤纸吸干表面水分，立即称量胃重，以 胃湿重/体重之比（胃系数）表示胃水肿程度。 4. 肉眼观察并计数整个胃粘膜出血点数，作为损伤 指数。
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[溃疡程度的评定]
应激性胃溃疡模型
1.溃疡指数：
记分
点状淤血为1分； 线状淤血、长度小于1 mm为2分； 1~2 mm为3分； 3~4 mm为4分； 大于5 mm为5分； 将全胃分数的总和作为该大鼠的溃疡指数。
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实验动物
成年小鼠，雄雌均可。
操作步骤
急性胃溃疡—利血平法
动物禁食不禁水24 h后，灌胃给予受试药后 1 h，腹腔注射利血平5 mg/kg体重，18 h后处死 动物，取胃按上述方法用10%甲醛液固定，沿
垂直浸于18~20℃的恒温水浴槽中，水面浸至 剑突水平。
水浸泡7h后取出，处死动物，立即开腹检查。 胃的固定及处理。
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应激性胃溃疡模型
[结 果]
水浸3h，胃粘膜即发生损伤； 7-8h胃粘膜可出现多发性、出血性糜烂小点； 20h胃粘膜病变相当严重，但溃疡改变不超过粘膜 肌层，且以*腺胃（含胃体和胃窦）为重。
血清素
利血平
保泰松等
在抗溃疡药物药效学试验中，水浸应激法、
幽门结扎法和醋酸法制备的胃溃疡模型为必做实
验，利血平法和乙醇法可任选其一。
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应激性胃溃疡模型
一、应激性胃溃疡模型
[造模机制]
应激刺激
应激性胃溃疡模型
交感神经兴奋性↑
副交感神经-垂体-肾 上腺系统兴奋性↑
血管收缩
胃运动亢进
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幽门结扎法胃溃疡模型
二、幽门结扎法胃溃疡模型
幽门结扎法胃溃疡模型
[造模机制]
通过手术结扎幽门，使胃内胃酸、胃蛋白 酶潴留，对胃粘膜造成侵蚀而形成溃疡。
[实验动物]
成年大鼠，雄雌均可。
幽门结扎法胃溃疡模型
[操作方法]
1. 给药3天。实验前大鼠禁食(24h)不禁水。 2. 自胸骨剑突下沿腹中线切开腹壁，切口约2-3cm。
病变评价
2. 溃疡程度（Okabe法）
在解剖显微镜下测量溃疡面积，将每只 鼠溃疡面积 的综合分为5个等级作为溃疡指数：
溃疡面积总和(mm2)：
1-12 13-25 26-37 38-50 ≥50mm2或穿孔
溃疡指数: 1级 2级 3级 4级
5级
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幽门结扎法胃溃疡模型
病变评价
根据溃疡指数可进一步计算：
给药方法也可以连续给药5 d，每天1次，第3天给药后开 始禁食，末次给药后3 h手术结扎幽门。
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急性胃溃疡—乙醇法
三、乙醇诱发胃损伤模型
急性胃溃疡—乙醇法
造模机制
1.破坏胃粘膜屏障的完整性
减少胃粘膜中前列腺素、氨基己糖含量； 降低胃粘膜血流量； 减小胃粘膜跨膜电位差； 破坏主细胞减少粘液分泌； 引起胃粘膜微循环障碍等。
2. 细胞内钙超载和细胞凋亡。
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实验动物
成年大鼠，性别不拘。
急性胃溃疡—乙醇法
操作步骤
大鼠禁食不禁水24 h；
最后1次给予受试药（给药体积为1.0 ml/100g体重）后3 h，灌服无水乙醇1 ml/只；
1h后开腹取胃，以10%甲醛液胃腔内固定后检查胃粘膜损 伤程度。
在左侧肋缘部位用手指轻轻上推暴露胃。 3. 在胃幽门下穿结扎线（勿伤及血管）将幽门结
扎，注意勿将邻近的其他器官、血管结扎。同 时经十二指肠给予受试药。缝合腹壁切口，用 纱布包扎切口。
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幽门结扎法胃溃疡模型
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幽门结扎法胃溃疡模型
4. 幽门结扎后，停止供水供食，术后18h处死大 鼠，取胃固定、剖检。
造模评价：组织病理学是评价造模成功的 最主要指标，主要观察和测量胃粘膜厚度 、粘膜肌层厚度、腺体数量、壁细胞数量 、固有层炎细胞浸润程度和肠化生发生率 等。
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[造模方法]
综合法一 胆汁（去氧胆酸钠）+热水+主动免疫
综合法二 去氧胆酸钠+热糊+主动免疫
综合法三 去氧胆酸钠+酒精+氨水+吲哚美锌
5. 沿胃大弯剪开胃壁，洗净胃内容物，将胃壁展 开，胃粘膜面向上用大头钉固定在蜡板上。
6. 用肉眼或放大镜观察胃粘膜面，记录每只动物 产生的溃疡数、溃疡程度、溃疡面积（或溃 疡指数）及病变的情况。
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幽门结扎法胃溃疡模型
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结果
幽门结扎法胃溃疡模型
形成的溃疡主要发生在对胃液抵抗力较弱的 前胃部（瘤胃），多为圆形或椭圆形。但病变较 表浅，属于胃粘膜急性出血性糜烂，与人类胃溃 疡的典型病变差距较大。
２.根据溃疡指数推算：
模型组溃疡指数－给药组溃疡指数
溃疡抑制百分率＝
×100%
模型组溃疡指数
发生溃疡的动物数
溃疡发生百分率＝
×100%
实验动物数
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应激性胃溃疡模型
［模型评价与注意事项］
胃溃疡发生率高，重复性较好。中枢抑 制剂、抗胆碱药、制酸药对其有明显对 抗作用。方法简单，结果可靠，迄今仍 是研究抗溃疡药物的常用模型。
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幽门结扎法胃溃疡模型
病变评价
1. 溃疡面积 通过溃疡中心量取的最大纵径和横径 S=π×（d1/2）（d2/2） 式中S为溃疡面积，d1为通过溃疡中心量取的最大 纵径，d2为通过溃疡中心量取的最大横径。
可计数*前胃部溃疡面积，以其总和作为溃疡指数。
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幽门结扎法胃溃疡模型
第八章 消化系统疾病动物模型
The animal models of digestives system diseases
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急性胃炎动物模型
第一节 急性胃炎动物模型
急性胃炎动物模型
一、酸制剂诱发急性胃炎模型
[实验动物]
Wistar大鼠，雄性，300g
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[操作方法]
氨水单因素法
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综合法复制伴有幽门螺杆菌感染的慢性萎缩 性胃炎模型: ① 饮用去氧胆酸钠水; ② 免疫损伤; ③ 饮寒凉胆汁; ④ 饮食不洁和/或肌饱失常； ⑤ HP灌胃。
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第三节 急性胃溃疡动物模型
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溃疡病的病因
致溃疡因素:胃酸、胃蛋白酶、非甾体抗炎 药不合理应用、幽门螺杆菌感染等。
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[结 果]
急性胃炎动物模型
模型组动物胃系数和损伤指数明显增 加，肉眼观察模型组胃粘膜充血、水肿， 皱襞减少，颜色暗红，并有大量散在出血 点。
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第二节 慢性胃炎动物模型
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三、大鼠慢性萎缩性胃炎模型
病因:酗酒、用药不当、饮食习惯不良、 幽门螺杆菌感染、自身免疫。
评价损伤程度以各组动物的溃疡指数进行组间比较。
阳性对照药可选用雷尼替丁，剂量0.135 g/kg体重，灌 胃给予。
结果
急性胃溃疡—乙醇法
15分钟即可造成明显的胃粘膜损伤，且 时间越长损伤越严重。损伤主要发生在*腺胃 部表现为粘膜充血、水肿、细胞坏死，伴有 糜烂、出血及纵行的条索状出血坏死。
应激性溃疡在腺胃部沿血管走行分布，表面覆 盖凝血块，去除凝血后可见深褐色条索状溃疡。
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应激性胃溃疡模型
[溃疡程度的评定]
1.溃疡指数： 长度（宽度、点数）
溃疡的长径大于lmm者，直接测量其长度，每lmm为1分； 宽度大于l mm，则计分加倍 长度和宽度都小于l mm，按溃疡点数计，每点计0.5分。 将每只动物的累计总分作为该动物的溃疡指数，在组间进 行比较。
在实验过程中，大鼠单笼饲养，笼底网眼应足以使粪便 容易漏下，防止动物因自食粪便而影响溃疡形成。
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幽门结扎法胃溃疡模型
评价和注意事项
在幽门结扎时，勿影响胃壁血管，勿牵扯幽门和用器械 钳夹胃壁，干扰实验结果。结扎时间的长短、室温可直接影 响溃疡的形成。
观察药物对溃疡的影响时，动物应预先给药或同时给药， 若粗制剂可采用灌胃给药，应确认胃内药物已排空后方能结 扎幽门。粗制剂可在结扎幽门的同时采用十二指肠内注入给 药较好。