成牙骨质细胞矿化过程中可变剪接事件分析

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1.
2.
2 成牙 骨 质 细 胞 矿 化 诱 导 6 孔 板 每 个 孔 接
种 3×105 个成牙骨质细胞,待细胞生长密度达底面
积 的 90% 时 换 矿 化 诱 导 液 (
5% FBS、DMEM、
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50μg/mL 抗 坏 血 酸)分
别 培养0、
7 和14d。在每个时间点用 Tr
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Osx)的相对表达量来验证矿 化 结 果。 生 物 信 息 学 分 析 可 变 剪 接 事 件 类 型。Gene On
持组织 丧 失,是 成 人 缺 牙 最 主 要 的 原 因 [1,2]。 牙 骨
质是附着在牙根表 面 的 矿 化 组 织,能 够 为 牙 周 膜 提
633
口腔医学研究 2021 年 7 月第 37 卷第 7 期
供附着位 点,进 而 使 牙 齿 牢 固 地 位 于 牙 槽 窝 内 [3]。
牙骨质的再生离不 开 成 牙 骨 质 细 胞,它 与 成 骨 细 胞
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l收集细
胞样品暂存于 -80 ℃ 恒温冰箱。
miR3064
3p 同样通过上述机 制 来 调 节 成 牙 骨 质 细
[
7,
胞的分化 8]。另外 miR361
3p 靶向作用于活化 T
1.
2.
3 细 胞 总 RNA 提 取 将 Tr
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l收 集 的 细 胞
样品按酚-氯仿提取法提取 RNA,用 Nanod
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织发育等 生 物 过 程 中 发 挥 重 要 作 用 [10]。 目 前 有 研
究发现可变剪接在小鼠性别决定、胚胎发育、氧化应
激和炎症反 应 中 发 挥 着 重 要 的 作 用 [11-13]。于 是,基
于本课题组前期小鼠成牙骨质细胞矿化诱导模型
[
9]
首次通过高通量测序(
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有着不同的特性 [4]。目前针对牙周炎的治疗主要是
以菌斑控制为主,牙 骨 质 再 生 以 及 使 牙 周 膜 重 新 附
着在新生的牙骨质和固有牙槽骨上依旧面临着巨大
的挑战 [5]。因此,探 究 清 楚 成 牙 骨 质 细 胞 分 化 和 矿
化的机制将有利于 牙 骨 质 再 生,对 未 来 牙 周 再 生 具
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1682 个可变剪接事件发生。差异可变剪接基因主要与蛋白质丝氨酸/苏氨酸激酶活性、肽基赖氨酸修饰、Wn
t信 号
通路和血管内皮生长因子信号通路等有关。结论:成功矿化诱导成牙骨质细胞。 通 过 生 信 分 析 确 定 可 变 剪 接 事 件
以及差异可变剪接基因可能在成牙骨质细胞矿化 过 程 中 发 挥 作 用,有 望 为 今 后 牙 骨 质 再 生 和 牙 周 再
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op2000
。上述研究主要是围
1.
2.
4 上机测序 和 生 物 信 息 学 分 析 将 Tr
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l收
集的细胞样品送至 安 诺 优 达 基 因 科 技 有 限 公 司,提
细胞核 因 子 5(
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[
9]
绕转录因 子 和 微 小 RNA(mi
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和生物信息学技术检测和分析了该细 胞 在 矿 化 0、
7
超微量分光光度计检测 RNA 纯度。
取 RNA 经纯 度 和 完 整 性 检 查 合 格 后,建 立 cDNA
文库,通 过 i
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用于 后 续 生 物 信 息 学 分 析。 采 用 rMATS 软 件
1 材料与方法
1.
1 主要材料和仪器
小鼠成牙骨质细胞系
OCCM30 由华盛顿大学 Ma
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赠予。DMEM (Hyc
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No.7
成牙骨质细胞矿化过程中可变剪接事件分析
黄汉韬1
王晓璇1,2
江晨曦1
马莉1
姚斯琦1
刘欢1,2
曹正国1,2*
1.武汉大学口腔医学院口腔基础医学省部共建国家重点实验室培训基地和
口腔生物医学教育部重点实验室 湖北 武汉 430079;
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端可变剪接(
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2.武汉大学口腔医院牙周科
湖北 武汉 430079
[摘要] 目的:生物信息学分析成牙骨质细胞矿化过程中可变剪接事件以及差异 可 变 剪 接 基 因 富 集 到 的 生 物 学 功
能和 信 号 通 路。 方 法:小 鼠 成 牙 骨 质 细 胞 OCCM30 矿 化 诱 导 0、
7 和 14 d。 实 时 荧 光 定 量 聚 合 酶 链 反 应
生提供新的研究思路。
[关键词] 成牙骨质细胞; 可变剪接; 矿化
[文献标识码] A
[文章编号] 1671—7651(
2021)
07—0632—05
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析差异可变剪接基因可能富集到的生物学功能和信
提供一个新的研究思路。
号通路。
和 14d 出现的 可 变 剪 接 事 件 以 及 差 异 可 变 剪 接 基
有重要意义。
之前 的 研 究 发 现 转 录 因 子 Os
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ap 和 Osx 在成牙骨质细胞矿化过程中表达量升 高。 与 0d 相 比,在 矿 化 第 7 天 和 第 14 天 时 分 别 有 1702 个 和
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1 成牙骨质细胞培养 将 1×10 个成牙骨质
细胞 接 种 于 底 面 积 25cm2 的 细 胞 培 养 瓶,加 入 含
10% 胎牛血 清 的 DMEM 培 养 基,在 细 胞 培 养 箱 内
培养(
37 ℃ 、
5%CO2),每隔 2d 换 1 次液,倒置显微
镜观察细胞 生 长 密 度 达 底 面 积 的 80% ~90% 时 传
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基金项目
作者简介
国家自然科学基金(编号:
81870776)
黄汉 韬 (
1993~ ),男,安 徽 人,硕 士 在 读,研 究 方
向:牙周病学。
* 通信作者
曹正国,
E-ma
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zhengguo@whu.
edu.
cn
牙周炎是一种 慢 性 炎 症 性 疾 病,会 导 致 牙 周 支
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oRNAs,miRNA)及
其相关信号通路来 探 究 成 牙 骨 质 细 胞 分 化 的 机 制,
但是关 于 可 变 剪 接 (
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ng)在 成 牙 骨
质细胞矿化中的作用鲜见报道。可变剪接可通过不
同的剪接 方 式 产 生 不 同 的 mRNA 剪 接 异 构 体,能
够调节基因表达和蛋白质组多样性,在细胞分化、组