红菇提取液抗衰老作用初探

红菇提取液抗衰老作用初探
甘耀坤;刘英姿;梁钧淞;曾诗媛;余锦荣;周志云
【摘要】Objective： To study the influence of Liquid Extraction from the Russula Fruitbodyon on the life- span of Drosophila melanogaster, and discuss preliminarily the anti-ageing effect of Liquid Extraction from the Russula Fruitbodyon. Methods： With three recessive types of drosophila melanogasters as the research object, through drosophila melanogaster＇survival tests to obtain the statistics of drosophila melanogaster with average life-span, half-time death, the longest life-span, comparing the effect of four different concentrations influence of Liquid Extraction from the Russula Fruitbodyon： lmg/ml, 5mg/ml, 10mg/ml and 15mg/ml on the Life-span of Drosophila melanogaster. Results： With regard to the average life-span group, the life span of male drosophila rnelanogaster and female drosophila melanogaster delay respectively by 6.94 % and 11.14 % （P both 〈0.01 ） when it is lmg/rnl; the life span of female drosophila melanogaster delay by 7.14 % （ P 〈0.01 ） when it is 5 mg/ ml. With regard to half-time death group, when it is lmg/ml, the life span of male drosophila melanogaster and female drosophila melanogaster delay respectively by 7.51% and 8.45%（P both〈0.01）; when it is 5
mg/ml, the life span of female drosophila melanogaster delay by 7.38% （ P 〈0.01 ） . As for the longest life-span group, when they are 5mg/ml and 10mg/ml, the life span of female drosophila melanogaster delay respectively by13.47% and 16.37% （ P both 〈0.01 ） . Conclusion：
Liquid extraction from the 1Kussula Fruitbodyon on the drosophila melanogaster＇s life has certain anti-ageing effect, 1mg/ml of Liquid Extraction from the Russula Fruitbodyon has the best effect.%目的：研究红菇提取液对果蝇寿命的影响,初步探讨红菇提取液的抗衰老作用.方法：以3隐性果蝇为对象,通过果蝇的生存试验主要统计其平均寿命、半数死亡时间和最高寿命,比较1mg/ml、5mg/ml、10mg/ml和15mg/ml四种不同浓度红菇提取液对果蝇
寿命的影响.结果：从平均寿命看,1mg/ml时雄、雌果蝇分别延长6.94%、11.14%（P均〈0.01）;5mg/ml时雌果蝇延长7.14%（P〈0.01）.从半数死亡时间
看,1mg/ml时雄、雌果蝇分别延长7.51%、8.45%（P均〈0.01）;5mg/ml时雌果蝇延长7.38%（P〈0.01）.从最高寿命看,5mg/ml和10mg/ml时雌果蝇分别
延长13.47%和16.37%（P均〈0.01）.结论：红菇提取液对果蝇有一定的抗衰老作用,其中1mg/ml的红菇提取液效果最好.
【期刊名称】《玉林师范学院学报》
【年(卷),期】2011(032)005
【总页数】5页(P81-85)
【关键词】红菇提取液;果蝇;平均寿命;半数死亡时间;最高寿命
【作者】甘耀坤;刘英姿;梁钧淞;曾诗媛;余锦荣;周志云
【作者单位】玉林师范学院生命科学与技术学院,广西玉林537000;广西师范大学
生命科学学院,广西桂林537000;玉林师范学院生命科学与技术学院,广西玉林537000;玉林师范学院生命科学与技术学院,广西玉林537000;玉林师范学院生命
科学与技术学院,广西玉林537000;玉林师范学院生命科学与技术学院,广西玉林537000
【正文语种】中文
【中图分类】Q504
1 前言
红菇（Rusrada）是一种外生菌根真菌，隶属于担子菌亚门、层菌纲、红菇目、红菇科、红菇属[1].红菇子实体中含有丰富的氨基酸、菇多糖、多种人体必需的矿质元素，还含有多种脂肪酸、甾醇等与人体健康息息相关的功能性成分[2].广西容县野生红菇菇大香浓，不但营养丰富、味道鲜美，更为重要的是具有补血健体、抗疲劳、防止癌症、降低胆固醇、消肿去湿等多种药用与保健功能[3].广西容县具有丰富的红菇资源，主要分布在浪水、自良、十里和松山等乡镇的山林地带，其中以浪水乡的红菇资源最为丰富，浪水乡的浪北村、浪水村、长寿村、泗河村为红菇生长的优质产区[4].红菇的生长地还存在着大量的铁椆树和红椎树等乔木，红菇在这样的环境下生长繁殖.围绕保护和开发红菇资源这主题，众多研究者从红菇的生态、营养及功能性成分和红菇的人工培养等方面开展了大量的研究工作，但是这些试验均未成功栽培出红菇子实体.
尽管目前对红菇的研究已经越来越广泛深入，但是关于食用真菌延缓衰老的研究报道却不多，用果蝇生存试验来研究食药用真菌的报道也较少，而关于用果蝇研究红菇提取液延缓生命衰老的研究尚未见报道.本实验主要是采用果蝇生存试验来探讨红菇提取液对果蝇寿命的影响，为开发新的抗衰老功能食品和药物提供实验依据和理论参考.
2 实验材料和方法
2.1 实验材料
红菇：来源于广西容县浪水乡野生红菇；
3隐性果蝇：来源于玉林师范学院化学与生物系遗传学实验室.
2.2 主要仪器
50ml三角瓶，250ml锥形瓶，解剖针，玻璃棒，小铁锅，电热炉，天平，移液管，干湿球温度计，水银温度计，滤纸，冰箱，高温高压蒸汽灭菌锅（上海三申医疗器械有限公司），高速万能粉碎机（FW100型，天津市泰斯特仪器有限公司），恒温水浴锅（江苏省金坛市医疗仪器厂）.
2.3 主要药品
乙醚（分析纯）、酒精、盐酸、氢氧化钠、丙酸（分析纯）、琼脂粉（纯化）、玉米粉（超市购买）、蔗糖、酵母粉（校门口的面包店购买）.
2.4 实验方法
2.4.1 红菇提取液的制备
红菇提取液的制备 (热水浸提法+超声波浸提法)[5-8]：粉碎红菇子实体（将红菇子实体于80℃烘干,粉碎，过40目筛[9，10]）→超声波处理[按料液比1：20于水
浸提液中用超声波细胞破碎机处理（400w，40S，10S，30次）]→浸提(80℃水
浴3小时，共2次)→离心（2000r/min，10min）过滤后得到提取液→上清液浓
缩（加热浓缩）→初浓度提取液100mg/ml→pH调为5.5-5.8→置4℃冰箱中保
存（不超过2d）备用.
2.4.2 基础培养基的制备
参照由杨大翔《遗传学实验》一书的方法配置基础培养基，即对照组成分为蒸馏水150ml、玉米粉15.8g、蔗糖11.3g、琼脂1.2g、丙酸1.00ml和酵母粉3g.新鲜
配制好的培养基在25℃培养箱中放置24h，如无菌生长即可将果蝇引入.
2.4.3 添加红菇提取液培养基的制备
制备过程：当基础培养基煮成糊状物并离火后，待温度降到60℃左右加入
100mg/ml的红菇提取液适当体积到锅里，拌匀后加入相应的丙酸和酵母粉搅拌
即可分装到三角瓶中，相应浓度的红菇提取液培养基即可制成.新鲜配制好的培养
基在25℃培养箱中放置24h，如无菌生长即可将果蝇引入.
菇液Ⅰ组(1mg/ml浓度)：红菇提取液1.5ml（约占0.08%）；
菇液Ⅱ组(5mg/ml浓度)：红菇提取液7.5ml（约占0.43%）；
菇液Ⅲ组（10 mg/ml浓度）：红菇提取液15ml（约占0.89%）；
菇液Ⅳ组（15 mg/ml浓度）：红菇提取液22.5ml（约占1.39%）.
2.4.4 果蝇生存试验的培养过程
（1）取成熟3隐性（白眼、小翅、焦刚毛）果蝇培养并收集8小时内羽化的果蝇. （2）区分雌雄，分别挑取体型大小相近的雄、雌果蝇（处女蝇）随机分组.
（3）红菇提取液每个浓度设6个处理瓶，雄雌各3瓶，每瓶20只果蝇（用于方
差分析）.对照组用基础培养基培养，菇液组果蝇在基础培养基中培养12天后转移到含有不同浓度红菇提取液的培养基中培养直至其全部死亡.
（4）实验在（25±3）℃，相对湿度60%～70%的培养室内进行.
（5）每7天更换新鲜培养基1次，每天定时四次(7：00、12：00、17：00、22：00)记录每瓶果蝇的生长情况、死亡的时间和数量，及时清除死亡果蝇.记录时以观察第一只、第二只果蝇死亡的天数为最短寿命、次最短寿命，全部果蝇存活总天数的均数为平均寿命，达到半数果蝇死亡天数的均数为半数死亡时间，记录倒数第2只果蝇死亡的天数和最后1只死亡果蝇的天数为次最高寿命和最高寿命[11].
2.5 实验数据处理与分析
实验数据最终采用spss17.0软件进行方差分析，差异显著性采用LSD法分析[12]，显著性水平分别取α=0.05和α=0.01，以均数±标准差（± s）表示.
3 实验结果与分析
3.1 不同浓度红菇提取液培养基对雄果蝇寿命的影响效果比较
表1 不同浓度红菇提取液对雄果蝇平均寿命的影响效果比较注：﹡为P<0.05，﹡
﹡为P<0.01，与对照组比较.剂量（mg/ml）平均寿命（d）平均寿命延长率（%）0 18.02±1.36 ——1 19.27±1.35﹡﹡6.94 5 18.70±2.18 3.77 10
18.65±2.85 3.50 15 18.49±1.17 2.6
从表1可知，与对照组比较，菇液Ⅰ组培养雄果蝇对提高其平均寿命有极显著性
差异,雄果蝇的平均寿命延长率为6.94%（P<0.01），而菇液Ⅱ组、菇液Ⅲ组、菇液Ⅳ组的延长率逐步降低，虽有延长效果但并无显著性差异.
表2 不同浓度红菇提取液对雄果蝇半数死亡时间的影响效果比较注：﹡为P<0.05，﹡﹡为P<0.01，与对照组比较.剂量（mg/ml）半数死亡时间（d）半数死亡时
间延长率（%）0 17.04±0.81 ——1 18.32±0.69﹡﹡7.515 17.39±0.85 2.0510 17.32±0.95 1.6415 17.85±0.37﹡﹡ 4.75
从表2可知，与对照组相比，菇液Ⅰ组、菇液Ⅳ组培养雄果蝇对提高其半数死亡
时间有极显著性差异,雄果蝇半数死亡时间的延长率分别为7.51%和4.75%（P均
<0.01）.菇液Ⅱ组、菇液Ⅲ组虽有延长效果但并无显著性差异.从表3可知，与对
照组相比，四组浓度红菇提取液培养雄果蝇对其最高寿命虽有延长效果，最高时延长率为10.11%，但并无显著性差异.
表3 不同浓度红菇提取液对雄性果蝇最高寿命的影响效果比较注：﹡为P<0.05，﹡﹡为P<0.01，与对照组比较.组别剂量（mg/ml）最高寿命（d）最高寿命延长率（%）对照组0 19.78±0.67 ——菇液Ⅰ组1 21.11±1.05 6.72菇液Ⅱ组 5 21.22±2.54 7.28菇液Ⅲ组10 21.78±4.27 10.11菇液Ⅳ组15 19.89±1.54 0.56 3.2 不同浓度红菇提取液培养基对雌果蝇寿命的影响效果比较
表4 不同浓度红菇提取液培养基对雌果蝇平均寿命的影响效果比较注：﹡为
P<0.05，﹡﹡为P<0.01，与对照组比较.组别剂量（mg/ml）平均寿命（d）平均寿命延长率（%）对照组0 17.78±1.58 ——菇液Ⅰ组1 19.76±2.10﹡﹡
11.14菇液Ⅱ组5 19.05±2.11﹡﹡ 7.14菇液Ⅲ组10 18.43±1.46 3.66菇液Ⅳ组
15 18.64±1.99﹡ 4.84
从表4可知，与对照组相比，菇液Ⅰ组、菇液Ⅱ组培养雌果蝇对其平均寿命有极
显著性差异，其平均寿命延长率分别为11.14%和7.14%（P均<0.01）；菇液Ⅲ
组对其平均寿命虽有延长效果但并无显著性差异；菇液Ⅳ组培养雌果蝇对其平均寿命有显著性差异，其平均寿命延长率为4.84%（P<0.05）.
表5 不同浓度红菇提取液培养基对雌果蝇半数死亡时间的影响效果比较注：﹡为
P<0.05，﹡﹡为P<0.01，与对照组比较.组别剂量（mg/ml）半数死亡时间（d）半数死亡时间延长率（%）对照组0 16.80±1.11 ——菇液Ⅰ组1 18.22±1.31﹡
﹡ 8.45菇液Ⅱ组5 18.04±0.77﹡﹡ 7.38菇液Ⅲ组10 17.42±0.77﹡ 3.69菇液
Ⅳ组15 17.20±0.89 2.38
从表5可知，与对照组相比，菇液Ⅰ组、菇液Ⅱ组培养雌果蝇对其半数死亡时间
有极显著性差异，半数死亡时间延长率分别为8.45%和7.38%（P均<0.01）；菇液Ⅲ组则具有显著性差异，半数死亡时间延长率为3.69%（P<0.05）；菇液Ⅳ组
对其半数死亡时间虽有延长效果但并无显著性差异.
表6 不同浓度红菇提取液培养基对雌果蝇最高寿命的影响效果比较注：﹡为
P<0.05，﹡﹡为P<0.01，与对照组比较.组别剂量（mg/ml）最高寿命（d）最高寿命延长率（%）对照组0 19.00±0.00 ——菇液Ⅰ组1 20.56±1.67 8.21菇液Ⅱ组5 21.56±1.59﹡﹡ 13.47菇液Ⅲ组10 22.11±2.76﹡﹡ 16.37菇液Ⅳ组 15 20.00±1.00 5.26
从表6可知，与对照组相比，菇液Ⅰ组、菇液Ⅳ组培养雌果蝇对其最高寿命虽有
延长效果但并无显著性差异；菇液Ⅱ组和菇液Ⅲ组则对雌性果蝇的最高寿命有极显著性差异，其最高寿命的延长率分别为13.47%和16.37%（P均<0.01）.
4 实验讨论
本研究寿命试验选择的模式生物为果蝇.果蝇具有寿命短、繁殖力强、易于饲养、
对实验条件敏感等优点[13].果蝇的代谢、生理状况和生长发育与哺乳动物基本相似，是研究抗衰老药物的好材料[14].而3隐性基因品系果蝇的寿命短，更适合作
衰老生物学的动物模型[15].在果蝇生存试验的几个指标中，平均寿命是最重要的
指标，是综合药效的反映；而半数死亡时间则偏向于反映药物对体弱果蝇的延寿效果；最高寿命偏向于反映药物对强壮的果蝇的延寿效果及果蝇对某药物过多摄取的耐受力[12].
红菇具有抗疲老、防止癌症、降低胆固醇、消肿去湿等作用.本实验结果表明：红
菇提取液对果蝇的寿命有延缓衰老功能；但存在性别差异，对雌果蝇作用更明显，这与动物的寿命普遍存在性别差异现象有关[16]；不同浓度红菇提取液对果蝇寿命的影响普遍表现为较低浓度时的延长效果优于高浓度，但是雄果蝇的半数死亡时间延长效果在15mg/ml时有极显著性差异，雌果蝇的最高寿命在10mg/ml时也有极显著性差异，造成该结果的原因尚未清楚.
5 展望
在本次实验中可以看出，红菇提取液对果蝇的寿命已经表现出具有不同的延长效果，能起到一定的抗衰老作用，是一种较好的天然食用菌抗衰老药物.但是红菇提取液
的抗衰老机理仍需进一步的探讨.近年来，随着我国老年人口平均增长速率地不断
增加，超过了总人口年增长速度，延长老年人的寿命并且使之保持良好的健康状况非常重要.长命百岁，青春永驻，是人们梦寐以求的美好愿望，也是医药界悬而未
决而又孜孜探究的一个课题.本实验为开发新的抗衰老功能食品和药物提供一定的
实验依据和理论参考，同时呼吁广大群众积极保护善待好我们有限的红菇资源，争取做到“合理开发，合理利用”.
[1]陈旭健，甘耀坤，王名光等. 红菇的分离培养研究初探[J].玉林师范学院学报（自然科学），2005，26（5）：64-65，77.
[2]王青云，石木标. 中国红菇的研究现状与展望[J].中国食用菌，2004，23（4）：
10-12.
[3]甘耀坤，赵良发，戴卢等.野生红菇研究综[J].玉林师范学院学报(自然科学)，2005，（3）：70-74．
[4]甘耀坤，陈旭健，冯槐全等.广西容县的红菇资源及开发与保护[J].食用菌，2005，（6）：l1-12．
[5]李惠珍，黄德鑫，许旭萍等. 正红菇的化学成分的研究[J].菌物系统，1998，17（1）：68-72.
[6]甘耀坤，娄小华，李岩等. 红菇子实体抗氧化性能的初步研究[J].食用菌，2007，29（1）：57-59.
[7]邱龙新. 正红菇子实体多糖的提取技术及抗癌活性研究[J].中国食用菌，2004，23（6）：48-50.
[8]李惠珍，许旭萍，谢华玲. 正红菇的麦角固醇及多糖提取法的研究[J].中国食用菌，1998，17（4）：37-39.
[9]刘文杰，胡辉. 食用菌多糖的生产技术[J].农牧产品开发，2000，5：20-21.
[10]石红旗，缪锦来，姜伟等.共轭亚油酸对肥胖模型大鼠减肥作用的研究[J].中国海洋药物杂志，2003，6(总第96期)：23-25.
[11]叶恩赐，艾裕和. 老年学实验用果蝇寿命指标的选择.老年学杂志，1988，8（2）：101-103.
[12]刘金庆，张松，杨小兵等. 5种珍稀食药用真菌活性提取物对果蝇寿命影响的
研究[J].生命科学研究，2006，10(2)：166-17.
[13]王菊凤，李鹄鸣. 蛹虫草多糖对果蝇寿命影响的研究[J].中国野生植物资源，2008，27（3）：38-41，48.
[14]李连德，樊美珍，李增智.14种虫草多糖对果蝇成虫寿命影响的试验[J].微生物学通报，2000，27(7)：427-428.
[15]袁朝辉.不同基因型黑腹果蝇的寿命比较[J].华东师范大学学报（自然科学版），1994，3：85-88.
[16]夏康博，肖德柄，王厚德等.衰老生物学[M].上海知讽出版社，1981.。