小鼠精子畸形实验

操作步骤
处死动物：用颈椎脱法处死小鼠，剪开腹腔， 处死动物：用颈椎脱法处死小鼠，剪开腹腔，取 出两侧附睾 过滤：放入盛有约１ 生理盐水的平皿中 生理盐水的平皿中， 过滤：放入盛有约１ml生理盐水的平皿中，用眼 科剪剪碎附睾， 科剪剪碎附睾，四层擦镜纸过滤 涂片： 涂片：取１小滴滤液涂片 固定：干燥，甲醇固定５分钟（ 固定：干燥，甲醇固定５分钟（可以直接涂片镜 检） 染色： 伊红染色１小时， 染色：用２％伊红染色１小时，冲洗 镜检：干燥镜检（先用低倍镜，再用高倍镜， 镜检：干燥镜检（先用低倍镜，再用高倍镜，在 较暗的视野下观察） 较暗的视野下观察）
小鼠精子畸形实验 Sperm Abnormality Test in Mouse
西南大学药学院
目的
观察精子在生成过程中形态的改变来 检 查受试物对雄性生殖细胞的致突变作 用.
原理
精子的成熟和正常形态受多种基因控制， 当这些基因中任何一个在化合物的作用下 发生突变，就会导致畸形率增高。某些特 殊的染色体重排，如性-常染色体易位是 精子产生畸形的主要机理。但是，缺血、 变态反应、感染和体温升高也可能导致精 子的畸形。
器材与试剂
器材：显微镜；镊子；剪刀；平皿 试剂：生理盐水；无水乙醇；2%伊红水 溶液
试验设计
1、试验动物：采用6～8周龄性成熟雄性小 、试验动物：采用 ～ 周龄性成熟雄性小 鼠 2、接毒剂量及分组：受试物设高、中、低 、接毒剂量及分组：受试物设高、 三个剂量组，同时设阴性和阳性对照组。 三个剂量组，同时设阴性和阳性对照组。 受试物高剂量组的总剂量应能使部分动物 死亡，然后以1/5或 递减为中、 死亡，然后以性对照组用环磷酰胺 mg/kg，腹腔注 ， 连续５ 每天一次。 射，连续５天，每天一次。
注意事项
辨别小鼠附睾； 如将精子悬液经过滤、离心等步骤除去组织残渣 后再推片效果更好，注意推片的质量； 处于精母细胞阶段的生精细胞对诱变剂较敏感， 因此在染毒后3～5周时精子畸形率最高，必要时 可作动态观察有助于全面评价； 缺血、感染、发热等可产生假阳性结果； 镜检时注意鉴别制片过程中人为造成的镜子损伤。