3种抗风湿中成药乌头碱限量检查

3种抗风湿中成药乌头碱限量检查
目的建立虎力散胶囊、腰息痛胶囊及盘龙七片的乌头碱限量检查方法。

方法采用薄层色谱法，分别考察几种展开剂和显色条件，对3种中成药中乌头碱限量进行检查。

结果以环己烷-乙酸乙酯-二乙胺（10∶7∶1）为展开剂，喷以稀碘化铋钾试液然后碘蒸汽熏为最佳，斑点清晰杂质干扰小，分离度好。

3种中成药的各3个批次限量检查均符合要求。

结论本方法简便、快速，可为这3种中成药的质量控制提供参考。

标签：虎力散胶囊；腰息痛胶囊；盘龙七片；薄层色谱法；乌头碱限量
现代常用抗风湿中成药中，乌头属中药如川乌、草乌、附子等是使用较多的组方药物。

《临床用药须知》2005年版收载的81种抗风湿中成药中，含乌头类的药物34种，占41.9%[1]。

乌头碱是乌头属中药的主要成分之一，具有强心、抗炎镇痛等多种药理活性[2]，它既是药效成分也是强毒性成分，口服乌头碱0.2 mg即可引起中毒[3]，经过炮制后其含量会降低。

为了保障制剂的质量及用药安全，必须对乌头碱限量进行测定。

虎力散胶囊、腰息痛胶囊、盘龙七片为常用的抗风湿中成药，目前尚未见有对其乌头碱限量的相关报道。

本研究采用薄层色谱法（TLC）对这3种中成药进行了乌头碱限量检测，报道如下。

1 仪器与试药
BSA223S型电子分析天平（赛多利斯科学仪器有限公司）；ZF-2型三用紫外仪（上海市安亭电子仪器厂）；KQ-600DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；电热恒温水浴锅（龙口市先科仪器公司）。

虎力散胶囊（云南运河药业有限公司，批号110238、090904、110102）；腰息痛胶囊（Ⅰ：通化振霖药业有限公司，批号110432；Ⅱ：四川豪运药业股份有限公司，批号100401；Ⅲ：河南辅仁药业有限公司，批号201104032）；盘龙七片（陕西盘龙制药有限公司，批号20100408、10100302、10100302）；乌头碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号110720-200410）；硅胶G（青岛海洋化工厂）。

二氯甲烷、环己烷、二乙胺等试剂均为分析纯。

2 方法与结果
2.1 供试品溶液制备
2.1.1 腰息痛胶囊供试品溶液取3个不同厂家样品内容物各4 g，精密称定，分别置于碘量瓶中，加氨水2 mL润湿，静置2 h，加乙醚30 mL低温超声提取30 min，滤过，残渣加乙醚20 mL分次洗涤，合并滤液低温挥干，残渣用二氯甲烷定容到1 mL，制成4 g/mL供试品溶液。

2.1.2 虎力散胶囊供试品溶液取3批样品内容物各1 g，精密称定，分别置
于碘量瓶中，加氨水1 mL润湿，静置2 h，加乙醚30 mL低温超声提取30 min，滤过，残渣加乙醚20 mL分次洗涤，合并滤液，用2%的盐酸提取3次，每次20 mL，合并提取液，用氨水调pH值到9，再用乙醚振摇提取3次，每次20 mL，合并乙醚液低温挥干，残渣用二氯甲烷溶解并定容至1 mL，制成1 g/mL供试品溶液。

2.1.3 盘龙七片供试品溶液取3批样品各12片，去糖衣，按“2.1.2”项下方法制备成12片/mL供试品溶液。

2.2 对照品溶液的制备
取乌头碱对照品适量，精密称定，加入二氯甲烷制成每1 mL含乌头碱1 mg 的溶液，作为对照品溶液。

2.3 薄层展开及结果
2.3.1 腰息痛胶囊分别吸取3种腰息痛胶囊供试品溶液各12 ?L及对照品溶液5 ?L，点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-二乙胺（10∶7∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，分别于自然光、紫外光灯（365 nm）、喷稀碘化铋钾试液及喷以稀碘化铋钾试液然后碘蒸汽熏蒸下观察。

结果自然光及紫外光下检视显示乌头碱无斑点，3种供试品在相同位置上出现大小、颜色相近的斑点，供试品组分相近。

喷稀碘化铋钾及喷显色剂后碘熏后的色谱对照品均出现斑点，但碘熏后的色谱更加清晰易于辨别效果最佳，该色谱中供试品色谱中在与对照品相应位置上没有出现斑点，符合限量要求。

见图1。

2.3.2 虎力散胶囊分别吸取虎力散胶囊供试品溶液各15 ?L及对照品溶液5 ?L，点于同一硅胶G薄层板上，按“2.3.1”项下方法进行检测。

结果365 nm处供试品色谱出现一系列大小位置相同的荧光斑点，3批供试品薄层性质基本相同。

经过碘熏后的色谱较于仅喷显色剂的色谱斑点更为清晰、圆整，易于观察，供试品色谱中在与对照品相同位置上无斑点，符合限量要求。

见图2。

2.3.3 盘龙七片分别吸取盘龙七片供试品溶液20 ?L及对照品溶液5 ?L点于同一硅胶G薄层板上，按“2.3.1”项下方法展开，观察。

结果自然光下样品及对照品无斑点显出。

荧光下供试品在相同位置显现一系列条形斑点。

喷以稀碘化铋钾试液后，乌头碱对照品色谱斑点微弱。

喷显色剂后经过碘熏的色谱显现对照品斑点，与对照品色谱相应位置的供试品色谱几乎无斑点。

3批样品乌头碱限量均符合要求。

见图3。

3 讨论
腰息痛胶囊、虎力散胶囊、盘龙七片中均含有制草乌等毒性药材，本试验参照《中华人民共和国药典》[4]中乌头碱限量规定对其毒性成分乌头碱进行了限量研究，根据3种中成药各自的日服用量，分别计算出供试品与对照品的取样量与配制浓度，并进行限量检测，结果9种供试品均符合乌头碱限量要求。

在制备虎力散胶囊及盘龙七片的供试品时，曾考虑与腰息痛胶囊相同的方法，结果虎力散胶囊色谱出现8个斑点，与对照品相近的位置上有2个斑点难以区分；盘龙七片色谱杂质较多，形成一个条形带，不能达到辨别效果。

故选择乙醚使生物碱溶解提取，经酸化使生物碱转移至水相，再碱化使其游离，用有机溶剂萃取除去溶于水的杂质达到分离纯化，效果良好。

本试验比较了药典及文献[5-7]中石油醚-氯仿-乙醇（2∶4∶3）、正己烷-乙酸乙酯-浓氨液（4∶4∶0.2）、苯-乙酸乙酯-二乙胺（14∶4∶1）、正己烷-乙酸乙酯-甲醇（6.4∶3.6∶1）、环己烷-乙酸乙酯-二乙胺（10∶7∶1）共5种展开剂体系。

结果显示，展开剂石油醚-氯仿-乙醇的Rf值小于0.2；正己烷-乙酸乙酯-浓氨液的浓氨试液的饱和时间对薄层显色有较大影响，重复性较差；苯-乙酸乙酯-二乙胺、正己烷-乙酸乙酯-甲醇的展开时间较长，故选取环己烷-乙酸乙酯-二乙胺（10∶7∶1）体系为展开剂，喷以稀碘化铋钾后碘熏效果最佳，主斑点清晰。

参考文献：
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典临床用药须知：中药卷版[S].北京：人民卫生出版社，2005：144-192.
[2] 陈信义，李峨，侯丽，等.乌头类生物碱研究进展与应用前景评述[J].中国中医药信息杂志，2004，11（10）：922-923.
[3] 王东青，张亚丽.应高度重视乌头类中药的毒副作用[J].国医论坛，2009，24（2）：37-38.
[4] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：220.
[5] 张聿梅，谢黔锋，鲁静，等.草乌药材标准修订研究[J].药物分析杂志，2010，30（5）：940-942.
[6] 招荣鑑，孙亦群，彭彤.祛风通络散中大黄与两面针的薄层色谱鉴别及酯型生物碱的限量检查[J].时珍国医国药，2006，17（7）：1258-1259.
[7] 李凤琴.舒筋祛风胶囊主要成分的定性限量检测[J].中成药，2004，26（9）：附17-19.。