血尿液肌酐Cr测定作业指导书

血尿液肌酐Cr测定作业指导书
1. 实验原理
Vitros CREA试剂是一种干燥，多涂层的，在透明的聚合物支撑基片上涂有分析成份的化学干片。

将一滴患者样品滴于干片上，分布层会使之均匀地分布。

随后，肌酐扩散至试剂层并水解为肌酸。

这样生成的肌酸在肌酸氨基水解酶的作用下转化为肌氨酸和尿素。

肌氨酸又在肌氨酸氧化酶的作用下氧化生成甘氨酸，甲醛和过氧化氢。

最后，过氧化氢催化白色染料生成呈色剂。

测定方式：两点比色法
波长：670nm
测试时间和温度：37℃约５分钟
反应过程：
肌酐氨基水解酶
肌酐+ 水————→肌酸
肌酸氨基水解酶
肌酸+ 水———→肌氨酸+ 尿素
肌氨酸氧化酶
肌氨酸+ 氧气+ 水————→甘氨酸+ 甲醛+ 过氧化氢
POD
过氧化氢+ 白色染料————→呈色剂
2. 标本：
2.1 病人准备：无特殊。

2.2 样品类型：血清；肝素锂/钠和EDTA抗凝血浆。

定时收集的，稀释后的尿样。

2.3 标本采集与处理：
2.3.1 血清和血浆样品
特别要注意的是：不要用注射营养液的针管采集样品。

样品采集后4小时内要离心标本，吸出血清。

处理时要将其当成生物污染品。

2.3.2 尿液样品定时或随时采集的尿液。

测试前将1份样品加20份试剂级别的水进行稀释。

将测试结果乘以21，就得到原始样品中尿素氮的浓度。

冷藏的样品不能立即测试。

处理样品时要将其当成生物污染品。

3. 标本的存放：血清、血浆室温下最多5天；冷藏最多30天；冷冻保存可超过30天。

尿液样品室温下最多3天；冷藏最多5天；-18℃可长期保存。

4. 标本的运输：样品要放在带盖的容器内以防污染和蒸发。

5. 标本拒收的标准：污染、抗凝剂、防腐剂不符合要求，标本放置时间过长。

6. 试验材料：
6.1 测试Cr所需的物品包括：Vitros化学定标物Kit1；Vitros特制质控液；Vitros 7%BSA稀释液。

强生厂家提供原装进口，试剂盒外包装上标明了测试项目名称，试剂标签代码，有效期限和储藏温度。

6.1.1 试剂组成：干片成分：反应成份有肌酐氨基水解
酶，肌酸氨基水解酶，肌氨酸氧化酶，过氧化酶和白色染料。

其它成份有染色物质，粘合剂，缓冲剂，稳定剂，表面活性剂，螯合剂及交叉连接剂。

干片标记：试剂盒外包装上标明了测试项目名称，试剂标签代码，有效期限和储藏温度。

6.1.2试剂准备：从冰箱中取出干片盒，在将干片盒打开封装并装入仪器内的干片储藏器之前必须使其达到室温状态18～28℃。

因此从冰箱中取出的试剂盒至少要在室温下要放置60分钟，而冷藏的试剂盒至少要在室温下放置30分钟。

去除内包装后立即将干片盒放入仪器的储藏器中。

说明：在试剂盒达到室温后的24小时之内必须将其装入仪器中。

6.1.3 试剂稳定性与贮存
未开封的干片盒：存储在-18℃或低于该范围。

在机内干片储藏器中的干片盒：在仪器上放置时间不能超过2周，否则要更换新试剂。

当仪器关闭时间不超过2个小时时，可将干片盒留在储藏器中。

出现以下情形要做质控检测：仪器关闭时间超过2小时；再次装载从仪器储藏器中取出的干片盒。

如果储藏正确，Vitros Cr干片可保质到包装盒上标明的有效期限。

参见VITROS250干化学分析仪试剂稳定性及贮存.SOP文件。

6.1.4 变质指示：超过有效期的试剂干片不能使用。

6.1.5 注意事项：为避免干片盒打开以前其内包装受损，不能摔打干片盒；不要让尖利物刺入内包装。

6.2 校准品：用Vitros化学定标物Kit 1。

血清，尿液都用相同的定标液，不过各自的SAVs值不同。

有关标准液的配制，使用及保存的配制，保存和稳定的详情，可参阅VITROS250干化学分析仪校准品和质控品.SOP文件。

6.3 质控品：使用Vitros 特制的质控物品；若使用
其它的一些质控物品，当与别的GLU测试方法比较时就会出现差异，如：用人血清/血浆混合物分离制成的质控物品；含有高浓度防腐剂，稳定剂和其它化学添加剂的质控物品；乙烯乙二醇作稳定剂的质控物品不能使用。

有关质控液的配制，保存和稳定的详情，可参阅VITROS250干化学分析仪校准品和质控品.SOP文件。

7. 仪器
美国强生厂家VITROS250全自动干式生化分析仪。

具体测试程序请参阅操作手册的介绍。

8. 操作步骤：将试剂复温后直接放入仪器，样品编程，仪器5分后自动打印结果。

具体测试程序请参阅VITROS250操作手册.SOP。

具体定标程序：参阅操作手册的相关章节内容。

何时进行定标：——在维护和保养时更换了仪器的重要部件。

——质控结果持续超出线性范围内时，详情参阅操作手册。

——管理条例上指定的时间，在美国，CLIA要求至少每6个月定标
一次。

9. 检验结果的判断与分析
10. 质量控制：操作建议：将质控物质当成生物污染品来处理；将质控液与患者样品同时进行测试；每天至少做一次质控以检测仪器运行状况；选择质控浓度来检查与临床的相关性；其它详情参阅操作手册质控章节的有关内容。

有关质控操作的常规性条例可参照国际质控检测（IQCT）的内容。

在每一批标本中都应把质控血清做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。

质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。

11. 计算方法：以用Vitros化学定标物校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以mmol/L报告。

12. 参考值范围国际单位(μmol/L)
血清/血浆男性62-106
女性71-133
尿液24 h尿样7000-25000μmol/day**
此参考范围是测试一批健康成人，然后取靶值附近95%的结果计算所得。

参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。

根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。

13. 临床意义：血清和尿液中的肌酐是正常人体肌肉组织代谢的产物，与饮食变化无关。

男性血清肌酐含量高于女性。

由于尿肌酐主要通过肾小球排泄，不被肾小管重吸收，所以测定血清和尿液中的肌酐浓度可以检查肾小球的通透率。

急性或慢性肾衰竭，尿路阻塞，肾血流减弱，休克，脱水，横纹肌炎都可造成血清肌酐浓度上升。

虚弱和肌肉量减少可造成肌酐浓度降低。

运动会使肌酐廓清率升高，但当尿量减少时该指标不可靠。

14. 操作性能
14.1 线性范围：血清4-1238μmol/L；尿液:：84-30639μmol/L（乘以稀释倍数21倍的结果）。

14.2 精密度：在Vitros 250生化仪上用质控液来测精密度。

结果反映了该方法的精密度。

当仪器维护，周围环境，干片处理和保存，质控液的复溶以及样品处理等方面发生变化都会影响结果的重复性。

日间精密
度
血清
x
(μ
mol/L
)
s
(μ
mol/L)
CV
(%)
室间精
密度
n=20天
x
(μ
mol/L)
s
(μ
mol/L
)
CV
(%)
样品1
n=79
87 0.9 样品1 87 0.9 1.4
样品2
n=78
523 4.4 样品2523 8.8 1.8
日间精密
度
尿液
x
(μ
mol/L
)
s
(μ
mol/L)
CV
(%)
室间精
密度
n=22天
x
(μ
mol/L)
s
(μ
mol/L)
CV
(%)
样品1
n=88
6160 97.8 样品1 6160 168.8 2.7
样品2
n=88
8830 135 样品28830 211.1 2.6
样品3
n=88
12373 257.3 样品3 12373 491.9 4.0
样品4
n=88
18827 218.5 样品418827 398.6 2.1
*日间精密度是将2至3份相同的样品在一天中运行两次，然后对测试结果进行统计计算。

**室间精密度是用同一个批号的干片每周定标一次，然后对测试结果进行统计计算。

14.3 方法学比较：
用Vitros700仪器和高效液相色谱参考方法分别测试相同血清或尿样品，对比结果显示Vitros方法的准确度良好。

用Vitros250仪器与Vitros700仪器测试相同的血清/尿液样品，对比结果显示Vitros250
方法的准确度良好，血清：Y=1.03X-7.07（r=0.999，N=52，检测范围80-1176μmol/L）；尿液：
Y=1.04X-439.35（r=0.999，N=59，检测范围
2714-27793μmol/L）。

14.4 灵敏度：本试剂的检测下限为血清4μmol/L；尿液:：84μmol/L（乘以稀释倍数21倍的结果）。

14.5 特异性：经测试，以下物质对Vitros CREA干片法均无干扰（偏差<0.1mg/dL，<8.8umol/L）。

乙酰乙酸30 mmol/L、氨苄西林1.5 mg/dL、阿米卡星1.5 mg/dL、氯化铵1 mmol/L、两性霉素B1.5 mg/dL、维生素C3 mg/dL、杆菌肽1.5 mg/dL、重碳酸盐40 mmol/L、胆红素20 mg/dL、硫酸博来霉素1.5 mg/dL、
羧苄西林1.5 mg/dL、头孢唑林1.5 mg/dL、头孢噻吩1.5 mg/dL、头孢噻啶1.5 mg/dL、头孢来星1.5 mg/dL、头孢氨苄1.5 mg/dL、头孢拉定1.5 mg/dL。

14.6 病人结果可报告范围：血清4-1238μmol/L；尿液:：84-30639μmol/L（乘以稀释倍数21倍的结果）。

15. 超出范围结果处理：本法线性上限为血清1238μmol/L；尿液:：30639μmol/L（乘以稀释倍数21倍的结果）。

如果样品中Cr浓度超出系统的测试线性范围，请按下列步骤进行稀释：血清或血浆用Vitros 7%BSA稀释。

尿液用生理盐水。

重新测试。

将测试结果乘以稀释倍数，就得到原始样品中Cr的浓度。

16. 病危报警值的处理当肌酐测定值>352 mol/L 时，在经过复查等确认手段处理后应及时向临床主管医生汇报。

17. 方法局限性
17.1 本法线性上限为血清1238μmol/L；尿液：30639μmol/L（乘以稀释倍数21倍的结果）。

如果样品中
Cr浓度超出系统的测试线性范围，请按下列步骤进行稀释：血清或血浆用Vitros 7%BSA稀释。

尿液用生理盐水。

重新测试。

将测试结果乘以稀释倍数，就得到原始样品中Cr的浓度。

17.2干扰物质：血清/血浆：肌酸：当肌酐浓度为 1.5 mg/dL (133 umol/L) ，肌酸大于8 mg/dL（707 umol/L）时，结果就会出现DP 标志（因为肌酸浓度太高引起底物缺乏）。

没有DP 标志，则是因为肌酸浓度小于0.15 mg/dL(13 umol/L)。

当肌酐浓度为14 mg/dL (1237umol/L) ，肌酸大于 1 mg/dL（88umol/L）时，结果就会出现DP 标志。

而没有DP 标志的结果偏差小于 2 %。

脯氨酸：患者注射含脯氨酸的营养液会使结果升高0.2 mg/dL (18 umol/L)。

因此，不能用静脉注射营养液的针管采样。

多巴酚丁胺（强心药）：静脉注射多巴酚丁胺时采集的样品会有明显的负偏差。

83 ug/mL的多巴酚丁胺会使原先4.8 mg/dL的肌酐浓度降至 2.7 mg/dL。

利多卡因：由于利多卡因和
N-乙基甘氨酸（NEG）代谢的影响，使用利多卡因做长期治疗的病人，结果会升高至多 1.0 mg/dL(88 umol/L)。

安乃近为1.13umol/L当肌酐浓度为88umol/L时，结果平均偏差为-53umol/L。

18. 补救措施：仪器出了故障可联系仪器厂家，进行紧急修理，如一时不能修好，则用OLYMPUS AU1000生化分析仪测定病人标本。

19. 参考文献强生厂家提供的方法学手册
20. 其他：仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按检验科废物处理.SOP文件处理。