植物细胞工程综合大实验

植物细胞工程综合大实验（一）
——培养基配制和无菌操作
一、实验目的与要求
熟练掌握器皿的洗涤
MS培养基的配制分装
培养基和物品的高压灭菌
实验室的消毒灭菌
植物材料的取材及流水冲洗
无菌操作
材料的培养观察
二、实验原理
植物细胞的全能性。

三、仪器设备与器具
电子天平、移液枪、冰箱、高压锅、超净工作台、
三角瓶、烧杯、容量瓶、培养皿、搪瓷缸、镊子、
解剖刀、酒精灯、试剂瓶、玻璃棒、线绳、pH试纸、封口膜、试管刷、洗涤剂、打火机等。

四、实验材料
彩云阁茎段（用于诱导愈伤组织）
茎节（用于诱导芽）
五、实验方法与步骤
（一）器皿的洗涤
一般器皿
有培养物但未污染的器皿
有培养物且污染的器皿
（二）MS培养基的配制分装
1、MS培养基母液的配制
母液A-F，每组配制A-E 100ml、F 50ml
0.1%升汞的配制
75%酒精的配制
6-BA
NAA
2、MS培养基的配制
按每人配制100ml，分5小瓶。

过程如下；每组按1L配制，先取容器内加70%的蒸馏水；
加入蔗糖30g/L；量取母液A-F；加入PGR（自己设计）；用容量瓶定容；用0.1-1N NAOH或HCl调整pH5.6-5.8；每人分100ml；加琼脂粉8g/L；分装到5个小三角瓶中、封口。

（三）培养基和物品的高压灭菌
培养基、无菌水（每组至少5瓶）、空瓶（每组至少2个）、烧杯（每组至少1个）、培养皿（每组至少一套）、接种工具（2套），包好或者分好以备高压灭菌。

高压锅的使用。

（四）实验室的消毒灭菌
75%的酒精擦拭超净工作台内表面，新洁尔灭水进行超净工作台外表面、培养架表面、墙壁及其他房间表面的擦拭。

（五）植物材料的取材及流水冲洗
选取适宜的彩云阁茎节及茎段，切割成适宜大小后放在流水下冲洗。

（六）无菌操作
演示。

（七）材料的培养观察
接种完的材料放在培养室的培养架上进行培养。

培养初期每天观察一次，持续1周。

之后每2-3天观察一次。

统计指标：
污染率（%）= （污染的外植体个数／接种外植体的总数）×100%。

愈伤组织诱导率（%）= （长愈伤外植体个数／接种外植体总数）×100%。

芽诱导率（%）= （长芽外植体个数／接种外植体的总数）×100%。

（八）结果与分析
植物细胞工程综合大实验（二）
——继代、最佳PGR种类和浓度配比
一、实验目的与要求
确定外植体最佳消毒时间、掌握初次继代方法、茎段诱导愈伤组织和茎节诱导芽阶段PGR种类与浓度配比的筛选
二、实验原理
植物细胞的全能性。

三、仪器设备与器具
电子天平、移液枪、冰箱、高压锅、超净工作台、三角瓶、烧杯、容量瓶、培养皿、搪瓷缸、镊子、解剖刀、酒精灯、试剂瓶、玻璃棒、线绳、pH试纸、封口膜、试管刷、洗涤剂、打火机等。

四、实验材料
彩云阁茎段（用于诱导愈伤组织）茎节（用于诱导芽）
五、实验方法与步骤
（一）器皿的洗涤
（二）MS培养基的配制分装
1、彩云阁茎段诱导愈伤组织的培养基
每人配制5瓶，PGR种类和浓度配比自己设计。

2、彩云阁茎节诱导芽的培养基
每人配制5瓶，PGR种类和浓度配比自己设计。

3、继代培养基
每人配制1瓶，PGR种类和浓度配比自己选择确定。

（三）培养基和物品的高压灭菌
请自己准备。

（四）实验室的消毒灭菌
（五）植物材料的取材及流水冲洗
（六）无菌操作
自己确定材料的消毒灭菌时间。

（七）材料的培养观察
每种处理，统计指标：
污染率（%）= （污染的种子个数／接种种子的总数）×100%。

愈伤组织诱导率（%）= （长愈伤组织个数／接种茎段外植体总数）×100%。

芽诱导率（%）= （长芽外植体个数／接种茎节外植体的总数）×100%。

（八）结果与分析。